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江苏医药 2015年第8期41卷 873-875,F0002,I0001页

作者：秦霞宋英张咏梅徐州医学院麻醉学院生理学教研室江苏省麻醉学重点实验室江苏省221004

目的构建针对大鼠促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体并进行鉴定。方法针对CRH基因设计4个RNAi靶点并分别构建入慢病毒骨架载体,测序鉴定。过表达质粒和RNAi质粒共转染293T工具细胞后,用Western blot进行... 详细信息

目的构建针对大鼠促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体并进行鉴定。方法针对CRH基因设计4个RNAi靶点并分别构建入慢病毒骨架载体,测序鉴定。过表达质粒和RNAi质粒共转染293T工具细胞后,用Western blot进行外源筛靶以确定有效靶序列。有效RNAi病毒质粒与辅助质粒通过Lipofectamine 2000共转染293T细胞,培养48h后,收集细胞培养上清液,将其浓缩后用孔稀释法测定病毒滴度。结果 Western blot外源筛靶显示3个靶点能有效敲减目的基因的表达。测定浓缩病毒悬液的滴度为1.5×109 TU/ml。结论成功构建了CRH基因的RNAi慢病毒载体,可用于CRH在应激反应中作用的研究。

关键词：促肾上腺皮质激素释放激素基因 RNA干扰慢病毒载体

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外源性硫化氢减轻D-半乳糖诱导的亚急性衰老大鼠血管老化

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生理学报 2014年第3期66卷 276-282页

作者：乔伟丽杨文学刘磊石玥崔洁柳红闫长栋徐州医学院生理学教研室徐州221004 徐州医学院心血管研究所徐州221004 徐州医学院病理学教研室徐州221004 徐州医学院江苏省麻醉学重点实验室徐州221004

本文旨在观察亚急性衰老大鼠血管壁结构和功能的改变,探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对血管老化的影响。雄性SD大鼠40只,随机分为溶剂组、D-半乳糖组、NaHS(H2S的供体)低、中、高剂量组,每组8只。D-半乳糖组每日背部皮下注射125 mg/k... 详细信息

本文旨在观察亚急性衰老大鼠血管壁结构和功能的改变,探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对血管老化的影响。雄性SD大鼠40只,随机分为溶剂组、D-半乳糖组、NaHS(H2S的供体)低、中、高剂量组,每组8只。D-半乳糖组每日背部皮下注射125 mg/kg D-半乳糖,连续8周;溶剂组每日背部皮下注射等体积生理盐水;NaHS低、中、高剂量组每日背部皮下注射125 mg/kg D-半乳糖,同时分别按1、10、100μmol/kg腹腔注射NaHS,连续8周。HE和Masson染色法观察各组大鼠主动脉形态学改变;硫代巴比妥酸(TBA)法和黄嘌呤氧化酶法检测大鼠主动脉超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量以及抗超氧阴离子含量;生化方法测定大鼠血清H2S浓度的变化;酶联免疫法(ELISA)检测血浆血管紧张素II(AngII)浓度变化;免疫印迹法测定大鼠主动脉血管紧张素II型1类受体(AT1R)蛋白的表达。结果显示,与溶剂组相比,D-半乳糖组大鼠血清H2S的浓度降低(P<0.05);而给予NaHS处理后,NaHS各剂量组大鼠血清H2S的浓度较D-半乳糖组明显升高(P<0.05)。血清H2S浓度的增高能够改善D-半乳糖引起的亚急性衰老大鼠主动脉形态学的变化。HE染色结果中,溶剂组主动脉内膜较薄,结构完整,中膜平滑肌排列规则;D-半乳糖组主动脉内膜增厚、隆起,内皮细胞部分脱落,中膜明显增厚,平滑肌增生、紊乱;与D-半乳糖组相比,NaHS各剂量组内皮细胞脱落减少,平滑肌细胞增生减少。Masson染色结果表明:与溶剂组相比,D-半乳糖组胶原纤维增多,平滑肌细胞增生(P<0.05);与D-半乳糖组相比,NaHS各剂量组胶原纤维减少,平滑肌细胞增生减少(P<0.05)。ELISA检测结果显示:与溶剂组相比,D-半乳糖组大鼠血浆AngII浓度明显升高(P<0.05);而给予NaHS处理后,NaHS各剂量组大鼠血浆AngII浓度较D-半乳糖组明显降低(P<0.05)。与溶剂组相比,D-半乳糖组大鼠主动脉SOD活性下降、MDA含量升高、抗超氧阴离子含量降低(P<0.05);而给予NaHS处理后,血管组织氧化应激水平得到明显改善:与D-半乳糖组相比,NaHS各剂量组主动脉SOD活性升高、MDA含量降低、抗超氧阴离子含量升高(P<0.05)。免疫印迹法测定显示,与溶剂组相比,D-半乳糖组大鼠主动脉血管AT1R蛋白表达上调(P<0.05),给予NaHS处理能下调主动脉AT1R蛋白的表达。以上结果提示,外源性H2S能够改善亚急性衰老大鼠主动脉形态学变化,降低血浆AngII的浓度、下调主动脉AT1R蛋白的表达,提高血管组织抗氧化应激的能力,延缓血管老化的发生。

关键词：硫化氢 D-半乳糖主动脉老化血管紧张素Ⅱ 血管紧张素Ⅱ型1类受体

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GHR基因遗传变异及其对中国西门塔尔牛胴体性状的效应分析

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2015年第4期36卷 31-34页

作者：武秀香杨章平毛永江施雪奎黄必志王安奎亏开兴徐州医学院生物学教研室江苏徐州221004 扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 苏州大学科技处江苏苏州215006 云南省草地动物科学研究院云南昆明650212

为探索生长激素受体(GHR)基因在中国黄牛不同群体中的变异以及GHR基因作为影响牛肉质性状候选基因的可能性,采用PCR-SSCP技术对雷琼牛、云南高峰牛、BMY牛及中国西门塔尔牛共367头个体GHR基因部分外显子遗传变异进行检测,分析群体遗传特... 详细信息

为探索生长激素受体(GHR)基因在中国黄牛不同群体中的变异以及GHR基因作为影响牛肉质性状候选基因的可能性,采用PCR-SSCP技术对雷琼牛、云南高峰牛、BMY牛及中国西门塔尔牛共367头个体GHR基因部分外显子遗传变异进行检测,分析群体遗传特征,并运用SPSS17.0软件中GLM模型分析所检测的遗传变异与中国西门塔尔牛部分肉质性状的关联性。结果表明:在GHR基因DNA序列中发现T229C多态位点,雷琼牛群体处于Hardy-Weinberg平衡状态,其他群体偏离平衡。对GHR基因T229C位点与胴体性状关系分析表明:该位点对肌肉生长性状效应显著,对宰前活重、胴体重、屠宰率、胴体产肉率、净肉率、肉骨比、头与蹄重、脂肪覆盖率也有显著影响。结果提示GHR基因可作为牛屠宰及肉质性状的候选基因。

关键词：中国黄牛 GHR基因遗传变异胴体性状

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颗粒酶-B在大鼠心肺复苏后脑组织中的表达及其意义

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国际麻醉学与复苏杂志 2015年第7期36卷 587-592页

作者：梁婧邵博明花嵘张咏梅徐州医学院江苏省麻醉学重点实验室江苏省麻醉与镇痛应用技术重点实验室徐州医学院麻醉生理学教研室221004 解放军第九七医院急诊科

目的观察大鼠心搏骤停（cardiacarrest，CA）、心肺复苏（cardiopulmonary resuscitation，CPR）后早期，脑中颗粒酶-B（granzymeB，Gra-B）、穿孔素表达及CD8±T细胞含量的变化，探讨其在CPR后脑损伤中的意义。方法雄性Wistar大鼠... 详细信息

目的观察大鼠心搏骤停（cardiacarrest，CA）、心肺复苏（cardiopulmonary resuscitation，CPR）后早期，脑中颗粒酶-B（granzymeB，Gra-B）、穿孔素表达及CD8±T细胞含量的变化，探讨其在CPR后脑损伤中的意义。方法雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为两组：复苏组和假手术组，复苏组又按取材时间不同分为12h组、1d组、3d组3个亚组。假手术组大鼠仅进行麻醉和气管插管、血管穿刺，不进行窒息及CPR，于术后1d处死取样。以夹闭气管导管，窒息6min的方法成功建立大鼠CPR模型后，用平衡木行走实验及肌力测定实验检测大鼠神经功能的变化。通过检测脑组织中伊文蓝（evansblue，EB）的含量说明血脑屏障（blood-brain barrier，BBB）的破坏程度，应用免疫组化染色，Western blot以及免疫荧光染色技术检测脑组织内CD8±T细胞浸润、Gra-B和穿孔素表达的变化以及CDnT细胞和Gra-B的共表达情况。结果与假手术组比较，复苏组大鼠CPR后的感觉运动功能和肌力明显减退，其评分在第3天达到最低[复苏组（4．0±0．7）分，假手术组（0．9±0．3）分（P〈0．01）]，第4、5天开始恢复。CPR后大鼠BBB通透性增大，脑皮质和纹状体中CD8±T细胞的浸润以及Gra-B的表达增多，在1dGra-B的表达增加最明显[皮质中1d组（O．95±0．08）比假手术组（O．35±0．09）（P〈0．05）；纹状体中1d组（1．08±0．15）比假手术组（0．39±0．09）（P〈0．05）]。CD8±T细胞与Gra-B在脑中共表达。结论CA-CPR后，大鼠脑中BBB通透性增加，CD8±T细胞浸润并释放Gra-B及穿孔素，参与脑神经损伤。

关键词：心搏骤停颗粒酶-B CD8+T细胞穿孔素

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颅脑外伤合并硬脑膜外血肿患者急诊手术的护理

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黑龙江医药 2015年第4期28卷 1004-1007页

作者：薛冰赵圣琴江苏省徐州市第一人民医院 221002 徐州医学院附属市立医院麻醉学教研室 221002

颅内血肿是颅脑损伤中最常见最严重的继发病变,发生率约占闭合性颅脑损伤的10%和重型颅脑损伤的40%-50%,如不及时诊断处理,可因进行性颅内压增高,形成脑疝危及生命[1]。硬脑膜外血肿（epidural hematoma）约占外伤性颅内血肿的30%,大多... 详细信息

颅内血肿是颅脑损伤中最常见最严重的继发病变,发生率约占闭合性颅脑损伤的10%和重型颅脑损伤的40%-50%,如不及时诊断处理,可因进行性颅内压增高,形成脑疝危及生命[1]。硬脑膜外血肿（epidural hematoma）约占外伤性颅内血肿的30%,大多属于急性型,多为直接暴力引起,多伴骨折。

关键词：硬脑膜外血肿外伤性颅内血肿重型颅脑损伤闭合性颅脑损伤 epidural 急诊手术 hematoma 脑膜中动脉沟颅内压增高手术时间

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大隐静脉旁淋巴管的应用解剖

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中国临床解剖学杂志 2014年第3期32卷 269-274页

作者：潘伟人王德广陈渊曾凡强徐州医学院人体解剖学教研室江苏徐州221004

目的：研究大隐静脉周围淋巴管的解剖学特征，为治疗下肢继发性阻塞性淋巴水肿提供解剖学基础。方法择成年新鲜尸体3具，截取3对下肢。在内踝后皮内，注入少量双氧水，于真皮下找到淋巴管，将显影剂经30G注射针注入淋巴管。在下肢内侧... 详细信息

目的：研究大隐静脉周围淋巴管的解剖学特征，为治疗下肢继发性阻塞性淋巴水肿提供解剖学基础。方法择成年新鲜尸体3具，截取3对下肢。在内踝后皮内，注入少量双氧水，于真皮下找到淋巴管，将显影剂经30G注射针注入淋巴管。在下肢内侧沿显影之淋巴管进行追踪解剖、照像及X线记录。结果从内踝后区至腹股沟可见不同数量、大小的淋巴管，呈向心性、蜿蜒起伏地与大隐静脉伴行于下肢内侧的皮下组织内。管径在0.2-1.8 mm之间。在行程中淋巴管分叉或合流、或与附近淋巴管交叉通过。汇入腹股沟淋巴结前分成许多小分支。解剖过程中，发现了淋巴管壁的营养血管。结论详细描叙了从内踝后区到腹股沟淋巴结的淋巴通路。为治疗继发性淋巴水肿和其他与下肢淋巴系有关的疾病时提供形态学基础。

关键词：淋巴管大隐静脉淋巴水肿淋巴管-静脉吻合淋巴管移植

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基质细胞衍生因子-1_α/CXCR4/CXCR7轴对骨髓间充质干细胞迁移的影响

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解剖学报 2014年第5期45卷 639-645页

作者：王玉兰何晓梅唐薇顾怡萍张世春汤曼徐铁军高殿帅徐州医学院解剖学教研室江苏徐州220014 徐州医学院临床医学系江苏徐州220014 徐州医学院神经生物学实验室江苏徐州220014

目的探讨基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)受体CXCR4、CXCR7在骨髓间充质干细胞(BMSCs)中蛋白和mRNA的表达;及SDF-1α/CXCR4/CXCR7轴对BMSCs迁移作用的可能机制。方法体外培养大鼠BMSCs,流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD29、CD44和CD34。应用... 详细信息

目的探讨基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)受体CXCR4、CXCR7在骨髓间充质干细胞(BMSCs)中蛋白和mRNA的表达;及SDF-1α/CXCR4/CXCR7轴对BMSCs迁移作用的可能机制。方法体外培养大鼠BMSCs,流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD29、CD44和CD34。应用CXCR4特异性拮抗剂AMD3100及CXCR7中和抗体分别阻断CXCR4及CXCR7,通过Western blotting和RT-PCR分别检测BMSCs蛋白和mRNA的表达变化;Transwell法检测细胞迁移能力。本次实验分为单纯BMSCs组(A)、AMD3100预处理BMSCs组(B)、CXCR7中和抗体预处理BMSCs组(C)及AMD3100+CXCR7中和抗体预处理BMSCs组(D)。结果经鉴定第3代大鼠BMSCs中CD29和CD44均呈阳性表达,而CD34表达阴性。BMSCs中CXCR4、CXCR7蛋白和mRNA均有表达。与A组相比,B组及D组CXCR4及CXCR7蛋白表达明显受到抑制(P<0.05),C组只有CXCR7蛋白表达降低(P<0.05);各组CXCR4 mRNA和CXCR7 mRNA的表达差异均无显著性。SDF-1α可以诱导BMSCs迁移,与0μg/L组相比,10μg/L组和100μg/L组穿膜细胞数均显著增多(P<0.01),与10μg/L组相比,100μg/L组穿膜细胞数亦明显增多(P<0.01);AMD3100和CXCR7中和抗体均能抑制BMSCs的迁移作用(P<0.05),当两者同时作用时,抑制效应更为显著(P<0.05)。结论 BMSCs共表达CXCR4、CXCR7蛋白及mRNA;BMSCs的迁移具有SDF-1α浓度依赖性;SDF-1α/CXCR4/CXCR7轴介导BMSCs的迁移作用,CXCR4受体和CXCR7受体对BMSCs的迁移可能具有协同促进作用。

关键词：基质细胞衍生因子-1α CXCR4 CXCR7 骨髓间充质干细胞免疫印迹法大鼠

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丹参素通过SIRT1-SOD信号通路延缓大鼠主动脉内皮细胞老化

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生理学报 2014年第5期66卷 575-582页

作者：王硕吴迪刘磊崔洁乔伟丽孙红闫长栋徐州医学院生理学教研室徐州221004 徐州医学院心血管研究所徐州221004 徐州医学院江苏省麻醉学重点实验室徐州221004

本研究旨在观察丹参素(Danshensu,DSS)预处理对大鼠主动脉内皮细胞(rat aortic endothelial cells,RAECs)老化的影响及机制。原代RAECs株传代培养到第四代为年轻组细胞(Young group),传代至第十二代为老年组细胞(Old group);自第四代起... 详细信息

本研究旨在观察丹参素(Danshensu,DSS)预处理对大鼠主动脉内皮细胞(rat aortic endothelial cells,RAECs)老化的影响及机制。原代RAECs株传代培养到第四代为年轻组细胞(Young group),传代至第十二代为老年组细胞(Old group);自第四代起,给予DSS孵育到第十二代,即为DSS组细胞;自第四代起,联合给予DSS和细胞沉默信息调节因子1(SIRT1)抑制剂尼克酰胺(NAM)孵育到第十二代,即为DSS+N组细胞。用细胞衰老β-半乳糖苷酶(SAβ-gal)染色法鉴定细胞老化程度,DAPI荧光染色检测老化相关的异染色质位点(senescence associated heterochromatin foci,SAHF)的表达变化,硫代巴比妥酸(TBA)法和化学比色法检测RAECs中丙二醛(MDA)和过氧化氢(H2O2)含量,免疫印迹法测定细胞SIRT1、黄嘌呤氧化酶(XOD)和超氧化物歧化酶2(SOD2)的表达。结果显示,与年轻组相比,老年组细胞发生明显衰老,细胞SAβ-gal阳性率、SAHF形成率、MDA及H2O2含量显著增加(均P<0.01);DSS处理能明显减少老年组细胞SAβ-gal阳性率、SAHF形成率、MDA及H2O2含量(P<0.05或P<0.01),SIRT1阻断剂可以逆转DSS对细胞的保护作用;免疫印迹结果显示,与年轻组相比,老年组细胞XOD蛋白表达增加,SIRT1和SOD2蛋白表达减少(P<0.05或P<0.01),DSS可以使老年组细胞XOD蛋白表达减少,SIRT1和SOD2蛋白表达增加(P<0.05);而给予SIRT1阻断剂逆转DSS的作用。以上结果提示,DSS预处理能减轻RAECs的氧化应激水平,延缓细胞的衰老进程,其机制可能与SIRT1蛋白表达的上调有关。

关键词：丹参素老化大鼠主动脉内皮细胞沉默信息调节因子1 氧化应激

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趾足部浅淋巴管分布及其临床意义

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中国临床解剖学杂志 2014年第6期32卷 655-658页

作者：曾凡强潘伟人王德广徐州医学院人体解剖学教研室江苏徐州221004

目的探究趾和足部浅淋巴管的解剖特征,为临床提供解剖学基础。方法 2具新鲜成人尸体的4例足部标本,在趾侧、足缘皮肤内,注入6%双氧水。在手术显微镜下解剖淋巴管,找到淋巴管插入30G细针,注入硫酸钡混合物。追踪淋巴管的行程并进行照像... 详细信息

目的探究趾和足部浅淋巴管的解剖特征,为临床提供解剖学基础。方法 2具新鲜成人尸体的4例足部标本,在趾侧、足缘皮肤内,注入6%双氧水。在手术显微镜下解剖淋巴管,找到淋巴管插入30G细针,注入硫酸钡混合物。追踪淋巴管的行程并进行照像记录。淋巴管灌注完成后,标本进行X线摄像记录。确切显示足部浅淋巴管的解剖位置、形态、与周围静脉的关系。结果各趾两侧可见集合淋巴管1支,管径0.3 mm。足背集合淋巴管由始于趾、足内外侧缘的淋巴管汇集而成,有14支,管径0.6mm。足后区可见2支集合淋巴管,管径0.4 mm,始于内外踝与跟腱间真皮下。足部淋巴管蜿蜒地行走于皮下组织,与静脉交汇时,从其浅面和/或深面通过。结论本文准确地描述了足部浅表淋巴管的解剖形态,以及与周围组织、血管神经的关系,为相关的临床和科研提供了解剖学依据。

关键词：淋巴管足淋巴水肿淋巴管-静脉吻合淋巴管皮瓣

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手指淋巴管的应用解剖

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中国临床解剖学杂志 2014年第5期32卷 548-552页

作者：曾凡强潘伟人王德广陈渊徐州医学院人体解剖学教研室江苏徐州221004

目的研究人体指淋巴管的解剖特征为临床提供解剖学基础。方法 2具新鲜成人尸体4例手标本,指尖两侧皮内,注入少量双氧水墨水混合剂。于真皮下找到淋巴管,将显影剂经30G注射针注入。追踪指淋巴管的行程并进行照像和X线记录。1例标本作指... 详细信息

目的研究人体指淋巴管的解剖特征为临床提供解剖学基础。方法 2具新鲜成人尸体4例手标本,指尖两侧皮内,注入少量双氧水墨水混合剂。于真皮下找到淋巴管,将显影剂经30G注射针注入。追踪指淋巴管的行程并进行照像和X线记录。1例标本作指截面研究。结果各指两侧皮下各分布淋巴管1支,近指根处偶见多支。它们始于远侧指间关节两侧真皮下、沿指中轴两侧皮下组织蜿蜒起伏地行走。管径0.2~0.8 mm,近端较粗,远端较细。除拇指桡侧和小指尺侧淋巴管各自在掌背尺、桡侧汇入手背淋巴管外,其他指淋巴管在指蹼处与邻近淋巴管吻合,再汇入掌背淋巴管。指横截面显示指淋巴管与周围组织的解剖关系。结论详细描述了各指淋巴管的解剖形态,以及与周围组织、血管神经的关系,为临床和科研提供解剖学基础。

关键词：淋巴管手指淋巴水肿指再植指再造

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