原生质体瞬时转化系统简便高效,已被广泛用于植物基因功能分析。然而,目前甘薯中尚未建立原生质体瞬时转化系统。本研究以徐紫薯8号水培根系为试验材料,通过聚乙二醇(PEG)介导,建立了一个操作简便且高效的原生质体分离和瞬时转化系统。结果表明,水培根系制备的原生质体产量高达每1 g 1.106×10^(7)个,质粒转化效率高达69.46%。并利用该系统,首次成功将甘薯蔗糖转运蛋白(IbSUT4)定位到甘薯细胞膜上。本研究结果为甘薯功能基因研究和分子育种提供了重要技术支撑。
紫肉甘薯块根富含多糖、多酚、淀粉、蛋白质和色素等物质,会影响紫肉甘薯块根总RNA的提取。本研究对五种不同的RNA提取方法进行比较,分析各自的优缺点,并对所得总RNA的浓度和纯度进行测定。研究结果表明,改良CTAB法和华越洋试剂盒提取法均能提取出浓度、纯度较高的RNA,且RNA可用于反转录,并扩增出Ib Tub A基因的特异条带,能够进行后续实验分析,其中华越洋试剂盒提取法操作更加快捷和方便。另外三种提取方法都存在一些弊端,所提取RNA质量略差,不能达到后续实验的要求。增加去色素环节可以有效去除色素,三个不同色素差异品种的提取结果较为一致。
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