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动物医学进展 2004年第5期25卷 37-40页

作者：卢建红邵卫星韦栋平刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

禽流感病毒(AIV)亚型众多、宿主广泛、抗原易变,不同种类的宿主对AIV的反应差异很大。体液免疫可提供抗疫病的保护,抗血凝素的中和抗体是主要的决定因素。细胞毒性T细胞(CTL)反应主要是针对比较保守的内部蛋白,细胞免疫在不同亚型或不... 详细信息

禽流感病毒(AIV)亚型众多、宿主广泛、抗原易变,不同种类的宿主对AIV的反应差异很大。体液免疫可提供抗疫病的保护,抗血凝素的中和抗体是主要的决定因素。细胞毒性T细胞(CTL)反应主要是针对比较保守的内部蛋白,细胞免疫在不同亚型或不同毒株间有交叉反应性,但保护性低。AIV感染的早期,CTL和细胞因子等细胞免疫对限制病毒扩散等起一定作用;感染后期,中和抗体的产生对病毒的清除和宿主恢复起重要作用。

关键词：禽流感病毒宿主免疫应答禽流感体液免疫血凝素细胞免疫

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猪肺炎支原体特异性蛋白P36基因的克隆与表达

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中国预防兽医学报 2004年第3期26卷 188-191页

作者：胡茂志焦新安张小荣潘志明黄金林殷月兰张晓明邵国青刘文博刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 扬州大学生物科学与技术学院江苏扬州225009 江苏省农业科学院兽医研究所江苏南京210014

根据Genbank中猪肺炎支原体P36基因序列设计一对特异性引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增出猪肺炎支原体ZCF23株特异性蛋白P36基因序列,经测序确认后,克隆入原核表达载体pGEX6p＿1的EcoRI和XhoI位点之间,转化宿主菌BL21,将筛选出的阳性... 详细信息

根据Genbank中猪肺炎支原体P36基因序列设计一对特异性引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增出猪肺炎支原体ZCF23株特异性蛋白P36基因序列,经测序确认后,克隆入原核表达载体pGEX6p＿1的EcoRI和XhoI位点之间,转化宿主菌BL21,将筛选出的阳性克隆用IPTG诱导,通过SDS＿PAGE电泳进行鉴定,结果表明,P36蛋白基因获得了表达,这为猪肺炎支原体免疫检测与诊断提供了重要条件。

关键词：猪肺炎支原体 P36基因克隆表达

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以减毒沙门氏菌运送的H5亚型禽流感病毒DNA疫苗的构建及其对小鼠的免疫原性

以减毒沙门氏菌运送的H5亚型禽流感病毒DNA疫苗的构建及其对小鼠...

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全国首届动物生物技术学术研讨会

作者：张小荣焦新安潘志明张晓明黄金林张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学生物科学与技术学院扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

根据Genbank中已经发表的H5亚型禽流感病毒HA基因序列,设计一对引物,通过RT-PCR扩增鹅源H5亚型高致病性禽流感病毒HA基因,测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1和asd-pVAX1得到重组表达载体pVAX1-HA和asd-pVAX1-HA。将重组质粒转染P... 详细信息

根据Genbank中已经发表的H5亚型禽流感病毒HA基因序列,设计一对引物,通过RT-PCR扩增鹅源H5亚型高致病性禽流感病毒HA基因,测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1和asd-pVAX1得到重组表达载体pVAX1-HA和asd-pVAX1-HA。将重组质粒转染P815细胞,经间接免疫荧光试验证实,HA基因在细胞内得到了瞬时表达。进一步将重组质粒转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550,得到两种运送DNA疫苗的重组沙门氏菌X4550(pVAX1-HA)和X4550(asd-pVAX1-HA),以1×10～9CFU/只的剂量两次口服免疫BALB/c小鼠,免疫小鼠不仅可以检测到血清抗体应答,而且还能抵抗稳定表达H5亚型禽流感病毒HA基因的P815肥大细胞瘤的攻击,说明该运送DNA疫茵的减毒沙门氏菌系统在体内能够成功释放所携带的质粒,并且能够刺激机体产生免疫应答。

关键词：减毒沙门氏菌 DNA疫苗 H5亚型禽流感病毒免疫原性

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华东地区家鸭中不同HA亚型禽流感病毒的分布

华东地区家鸭中不同HA亚型禽流感病毒的分布

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中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：钱忠明张评浒薛峰刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

2002年7-2003年11月,在华东地区家鸭中采集到1603个泄殖腔拭子。用鸡胚尿囊腔传代接种法对泄殖腔拭子进行分离鉴定禽流感病毒,共分离到207株禽流感病毒,总分离率为12.9%。经HI试验和RT-PCR法鉴定,这207株禽流感病毒中共有8种HA亚型,包... 详细信息

2002年7-2003年11月,在华东地区家鸭中采集到1603个泄殖腔拭子。用鸡胚尿囊腔传代接种法对泄殖腔拭子进行分离鉴定禽流感病毒,共分离到207株禽流感病毒,总分离率为12.9%。经HI试验和RT-PCR法鉴定,这207株禽流感病毒中共有8种HA亚型,包括Hl、H3、H4、H5、H6、H9、H10和H11亚型。在这些禽流感病毒中,优势禽流感病毒是H5亚型禽流感病毒,其次是H3亚型禽流感病毒。不同月份的分离率显示,冬春季节的分离率特别高(大于40.0%),而夏季的分离率则很低(低于6.0%)。H5亚型病毒的分离率也具有相似的特征。本次调查的结果表明,我国家鸭在冬春季节时H5亚型病毒的高感染率,可能与我国近几年来鸡在冬春季节易发H5亚型高致病性禽流感有一定的联系。

关键词：禽流感病毒家鸭 HA亚型分布

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华东地区家鸭中不同HA亚型禽流感病毒的分布

华东地区家鸭中不同HA亚型禽流感病毒的分布

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中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：钱忠明张评浒薛峰刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室(江苏扬州)

2002年7月-2003年11月,在华东地区家鸭中采集到1603个泄殖腔拭子.用鸡胚尿囊腔传代接种法对泄殖腔拭子进行分离鉴定禽流感病毒,共分离到207株禽流感病毒,总分离率为12.9﹪.经HI试验和RT-PCR法鉴定,这207株禽流感病毒中共有8种HA亚型,包... 详细信息

2002年7月-2003年11月,在华东地区家鸭中采集到1603个泄殖腔拭子.用鸡胚尿囊腔传代接种法对泄殖腔拭子进行分离鉴定禽流感病毒,共分离到207株禽流感病毒,总分离率为12.9﹪.经HI试验和RT-PCR法鉴定,这207株禽流感病毒中共有8种HA亚型,包括H1、H3、H4、H5、H6、H9、H10和H11亚型.在这些禽流感病毒中,优势禽流感病毒是H5亚型禽流感病毒,其次是H3亚型禽流感病毒.不同月份的分离率显示,冬春季节的分离率特别高(大于40.0﹪),而夏季的分离率则很低(低于6.0﹪).H5亚型病毒的分离率也具有相似的特征.本次调查的结果表明,我国家鸭在冬春季节时H5亚型病毒的高感染率,可能与我国近几年来鸡在冬春季节易发H5亚型高致病性禽流感有一定的联系.

关键词：禽流感病毒家鸭 HA亚型流行病学

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华东地区家鸭中不同HA亚型禽流感病毒的分布

华东地区家鸭中不同HA亚型禽流感病毒的分布

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会

作者：钱忠明张评浒薛峰刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室(江苏扬州)

为了确定我国家鸭中禽流感病毒的流行和分布状况,对华东地区的家鸭进行了病毒学监测.在华东地区共采集到1603个鸭泄殖腔拭子.对这1603个泄殖腔拭子用鸡胚尿囊腔传代接种法分离鉴定禽流感病毒.从1603个鸭泄殖腔拭子中共分离到207株禽流... 详细信息

为了确定我国家鸭中禽流感病毒的流行和分布状况,对华东地区的家鸭进行了病毒学监测.在华东地区共采集到1603个鸭泄殖腔拭子.对这1603个泄殖腔拭子用鸡胚尿囊腔传代接种法分离鉴定禽流感病毒.从1603个鸭泄殖腔拭子中共分离到207株禽流感病毒,总分离率为12.9﹪.经HI试验和RT-PCR法鉴定,这207株禽流感病毒中共有8种HA亚型,包括H1、H3、H4、H5、H6、H9、H10和H11亚型.在这些禽流感病毒中,优势禽流感病毒是H5亚型禽流感病毒.不同月份的分离率显示,冬春季节的分离率特别高(大于40.0﹪),而夏季的分离率则很低(低于6.0﹪).H5亚型病毒的分离率也具有相似的特征.H3亚型病毒几乎每个季节都能分离到,但以春秋季节的分离率较高.通过比较发现,我国家鸭中禽流感病毒分布的季节性与国外野生水禽中禽流感病毒分布的季节性相反.本次调查的结果表明,我国家鸭在冬春季节时H5亚型病毒的高感染率.

关键词：禽流感病毒家鸭 HA亚型禽流感病毒学监测

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抗鸡马立克氏病双价基因工程冻干疫苗中试

抗鸡马立克氏病双价基因工程冻干疫苗中试

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鸡马立克氏病(MD)是鸡的一种常见的淋巴组织增生性肿瘤疾病，因可引起高死亡率、胴体废弃增加、饲料报酬低和严重免疫抑制，造成的经济损失十分巨大，是中国最重要的禽病之一。MD的防控除采用严格的生物安全措施防止早期感染外，接种疫... 详细信息

标准号: 0800530156

鸡马立克氏病(MD)是鸡的一种常见的淋巴组织增生性肿瘤疾病，因可引起高死亡率、胴体废弃增加、饲料报酬低和严重免疫抑制，造成的经济损失十分巨大，是中国最重要的禽病之一。MD的防控除采用严格的生物安全措施防止早期感染外，接种疫苗是最有效的策略。目前中国使用量较大的MD疫苗CVI988，虽然比早期的火鸡疱疹病毒疫苗(HVT)保护力强，但由于它必须在液氮中保存和运输，而且价格偏高，不能满足中国养禽业以中小型为主、肉鸡使用MD疫苗上升的市场需要。为此课题组以鸡痘病毒中国疫苗株(282E4)为载体分别构建了表达MDV gB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-MDgB)和表达II型干扰素(IFN II)的重组鸡痘病毒(rFPV-IFN II)，将它们的冻干制剂与鸡MD火鸡疱疹病毒(HVT)冻干制剂组合成联苗。为了解决该疫苗工业化生产和大面积推广应用中的问题，课题组承担了农业科技成果转化资金项目《抗鸡马立克氏病双价基因工程冻干疫苗中试》(02EFN213201078)，通过两年多的努力，该项目在技术上取得了突破，推广转化取得成就，产生了良好的经济、生态和社会效益。一、技术突破：对任何动物用疫苗来说，特别是基因工程疫苗，有3个特性决定它是否有工业化生产和推广应用价值，这就是安全性、免疫效力和价格。课题组在该项目的实施过程中，集中力量解决与上述3个方面有关的技术问题，取得了突破。1.提高了重组鸡痘病毒对1日龄雏鸡安全性：经过基因操作，获得的重组rFPVs比其母本病毒282E4对1日龄雏鸡安全，以10倍疫苗剂量免疫在观察期内全部健活，而且无全身痘反应，与此相反母本病毒282E4在用作疫苗时只能用于2周龄以上的鸡，2周龄以下的雏鸡会产生包括死亡在内的严重副反应。通过农业转基因安全评价中间试验、环境释放试验和生产性试验，重组鸡痘病毒rFPV-MDgB和rFPV-IFN II已取得生产应用安全证书(2004-2009年)。综上所述，以鸡痘病毒为载体的抗鸡马立克氏病双价基因工程疫苗是很安全的。2.克服母源抗体干扰，提高了重组疫苗的免疫效力：以鸡痘病毒为载体的基因工程疫苗研究在国内外已有十多年的历史，但是到目前为止大规模投入推广应用的很少见，究其原因是因为母源抗体对重组疫苗有严重的干扰作用，影响其免疫效力。为了解决这一难题，课题组研究了用不同途径克服母源抗体干扰的方法，其中包括筛选合适的细胞因子作为免疫佐剂，表达外源基因的插入载体优化和启动子优化和外源基因的表达方式。研究中发现，分别表达两种鸡细胞因子的rFPV与表达保护性抗原基因的rFPV以一定比例的量混和后免疫鸡，不仅有强的抗母源抗体干扰作用，而且显著减轻重组鸡痘病毒接种幼龄雏鸡产生的增重减缓和免疫抑制等副作用。根据该发现申请的发明专利《重组鸡痘病毒联合疫苗》正在进行实质审查。研究中还发现插入载体的优化和启动子优化对抗母源抗体干扰也起关键作用。用优化的插入载体和启动子构建的表达保护抗原的rFPV进行免疫保护试验，证明其抗母源抗体性能可达到现场应用可接受的程度。3.优化了重组鸡痘病毒工业化生产的工艺：在新工艺条件下细胞和病毒产量大幅度提高，降低了重组鸡痘病毒的生产成本，使该基因工程产品在价格上具有与常规疫苗竞争的优势。单胚细胞产量从6×10<'7>个左右上升到2.0-2.5×10<'8>个，每个中转瓶(3000ml容量)接种最适量的细胞和病毒，可生产4×10<'10>PFU的重组鸡痘病毒，产量远高于用鸡胚或细胞生产的常规鸡痘疫苗。这种优化工艺使以鸡痘病毒为载体的MD双价基因工程疫苗和其他基因工程疫苗在与常规疫苗或其他载体基因工程疫苗的竞争中处于很有利的地位，加之该疫苗具有不需液氮保存、运输使用方便的特点，因此市场前景很好。二、推广转化及经济、生态及社会效益：该成果完成了区域试验和扩大区域试验近500万羽份，从试验地区反映的情况来看，该抗鸡马立克氏病双价基因工程冻干疫苗，不需液氮保存，运输、使用方便，免疫效力达到MD 1型冷冻疫苗CVI988/Rispens和2+3型冷冻疫苗的相同水平，而价格只需两种冷冻疫苗的一半，受到广大用户特别是中小型养禽企业的欢迎，取得了良好的经济、生态和社会效益。该项目的实施有利于农业结构调整，对农村养殖业特别是中小型养鸡业的发展起到良好的促进作用，而养鸡业的发展是部分地区农民增收的主要途径。该项目在执行期内生产疫苗累计约1亿羽份，产值500万元，利税300多万元。

关键词：鸡病马立克氏病冻干疫苗基因工程疫苗重组鸡痘病毒载体生产工艺

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华东地区致初生仔猪腹泻大肠杆菌的O血清型和毒力因子

华东地区致初生仔猪腹泻大肠杆菌的O血清型和毒力因子

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中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：陈祥高崧王雷焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室(扬州)

从江苏、江西、安徽等7个省疑似黄、白痢直肠棉拭及病死猪的十二指肠和肠系膜淋巴结中分离鉴定出339株病原性大肠杆菌.经O血清型鉴定,除77株未能定型、41株自凝外,测定出221个分离株的O血清型,这些分离株覆盖了64个血清型,以O、O、O、O... 详细信息

从江苏、江西、安徽等7个省疑似黄、白痢直肠棉拭及病死猪的十二指肠和肠系膜淋巴结中分离鉴定出339株病原性大肠杆菌.经O血清型鉴定,除77株未能定型、41株自凝外,测定出221个分离株的O血清型,这些分离株覆盖了64个血清型,以O<,107>、O<,101>、O<,20>、O<,93>、O<,11>和O<,149>为主,共99株,占定型菌型的44.80﹪.这些血清型与已报道的常见血清型间存在一定差异.运用黏附素单抗对以上菌株进行F4、F5、F6、F18、F41五种黏附素检测,共97个分离株表达黏附素(28.61﹪),而表达两种和3种黏附素的菌株分别有22株和8株,它们分别占表达黏附素菌株的22.68﹪和8.25﹪,其中单独表达F4、F6、F5+F41黏附素菌株分别有18、30、15株,分别占表达黏附素菌株的18.56﹪、30.93﹪和15.46﹪;同时运用多重PCR对其中145个分离株进行毒素基因(STa、STb、LT、SLT-2e)的检测,拥有STa和STb毒素基因的菌株分别占检测菌株的51.72﹪和37.24﹪.F6、F4、F5+F41和STa、STb为该地区致初生仔猪腹泻大肠杆菌常见的毒力因子.

关键词：仔猪腹泻大肠杆菌 O血清型黏附素毒素基因毒力因子

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重组鸡痘病毒表达的鸡IL-1β、IL-2和髓细胞生长因子对新城疫La Sota疫苗免疫效果影响

重组鸡痘病毒表达的鸡IL-1β、IL-2和髓细胞生长因子对新城疫La S...

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会

作者：邵卫星卢建红彭大新刘秀梵扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室(扬州)

本研究目的:在新城疫La Sota疫苗免疫不全的情况下,重组鸡痘病毒(rFPV)表达的鸡白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素2(IL-2)和髓细胞生长因子(MGF)是否具有免疫增强作用.10日龄SPF鸡随机分成8组(Ⅰ~Ⅷ),每组18只,每只接种1个半数保护剂量... 详细信息

本研究目的:在新城疫La Sota疫苗免疫不全的情况下,重组鸡痘病毒(rFPV)表达的鸡白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素2(IL-2)和髓细胞生长因子(MGF)是否具有免疫增强作用.10日龄SPF鸡随机分成8组(Ⅰ~Ⅷ),每组18只,每只接种1个半数保护剂量(PD<,50>)的La Sota疫苗,同时免疫不同剂量的表达鸡IL-1β、IL-2或cMGF的rFPV(rFPV-IL-1β、IL-2、cMGF).结果:rFPV表达的IL-1β、IL-2或cMGF可以消除鸡痘病毒在免疫早期对雏鸡体重增长的影响;一定剂量的IL-1β和IL-2可使鸡脾脏中CD4<'+>T细胞和CD8<'+>T细胞的总体水平提高;免疫21天后用新城疫的F48E8强毒经肌肉攻毒,一定剂量的IL-1β和IL-2(Ⅰ和Ⅲ组)能提高La Sota疫苗的免疫保护率,而cMGF却没有表现出这种作用.本研究表明rFPV表达的IL-1β和IL-2在一定的剂量下可以增强La Sota疫苗的免疫效果,具有免疫增强作用.

关键词：鸡痘病毒白细胞介素1β 白细胞介素2 髓细胞生长因子 La Sota疫苗新城疫

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应用多重PCR方法鉴定粪样和食品中产气荚膜梭菌

应用多重PCR方法鉴定粪样和食品中产气荚膜梭菌

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家畜传染病学会第六次人畜共患病学术交流会

作者：梁光军赵李祥杨旭芹贾红张小荣文其乙刘秀梵扬州大学兽医学院畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州大学兽医学院畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州大学兽医学院畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州大学兽医学院畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州大学兽医学院畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州大学兽医学院畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州大学兽医学院畜禽传染病学农业部重点开放实验室

按国标方法从346份粪便样品分离出了69株产气荚膜梭菌,从275份食品样品分离到97株产气荚膜梭菌。经过生化试验鉴定和多重PCR方法鉴定,证实均为A型产气荚膜梭菌,携带β2毒素的产气荚膜梭菌共为53株,另从检出了2株肠毒素阳性A型产气荚膜... 详细信息

按国标方法从346份粪便样品分离出了69株产气荚膜梭菌,从275份食品样品分离到97株产气荚膜梭菌。经过生化试验鉴定和多重PCR方法鉴定,证实均为A型产气荚膜梭菌,携带β2毒素的产气荚膜梭菌共为53株,另从检出了2株肠毒素阳性A型产气荚膜梭菌。本实验初步摸清了我国的粪便中和食品中的产气荚膜梭菌的动态分布。并在食品中发现了导致人食物中毒的肠毒素阳性A型产气荚膜梭菌,为分子流行病学研究提供了重要理论依据。

关键词：产气荚膜梭菌多重PCR 肠毒素基因分型

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