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家畜传染病学会第六次人畜共患病学术交流会

作者：胡茂志焦新安潘志明黄金林邵国青刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学生物科学与技术学院扬州大学生物科学与技术学院江苏省农业科学院兽医研究所扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

表达P36基因的重组菌BL21(6P-1-P36)经诱导表达,超声波裂解后高速离心,分别收集上清和沉淀。可溶性表达产物亲和层析纯化后用于检测:同时,用GST-P36包涵体沉淀腹腔注射免疫BALB/c小鼠(400μg/只)。利用淋巴细胞杂交瘤技术,获得了一株能... 详细信息

表达P36基因的重组菌BL21(6P-1-P36)经诱导表达,超声波裂解后高速离心,分别收集上清和沉淀。可溶性表达产物亲和层析纯化后用于检测:同时,用GST-P36包涵体沉淀腹腔注射免疫BALB/c小鼠(400μg/只)。利用淋巴细胞杂交瘤技术,获得了一株能分泌特异性抗体的单克隆细胞株5A7-2。生物学特性鉴定表明,腹水单抗的间接ELISA效价为1:2.5×106;免疫球蛋白亚类为IgG2a。免疫印迹结果显示,腹水单抗与GST-P36融合蛋白反应而不与GST蛋白反应,并且在猪肺炎支原体(Mhp)蛋白36kD位置也有明显的条带,说明细胞株5A7-2所分泌的是针对Mhp P36蛋白的单抗。P36蛋白携带Mhp种特异性抗原表位,并且重组P36蛋白的抗体也不与其它支原体或细菌反应,因此,其单克隆抗体的制备,为Mhp种特异性检测方法的建立奠定了基础。

关键词：猪肺炎支原体 P36蛋白单克隆抗体

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斑点免疫金渗滤法快速检测鸡白痢/鸡伤寒沙门氏菌抗体的应用研究

斑点免疫金渗滤法快速检测鸡白痢/鸡伤寒沙门氏菌抗体的应用研究

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家畜传染病学会第六次人畜共患病学术交流会

作者：曹春梅焦新安潘志明黄金林张晓明刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学生物科学与技术学院扬州大学生物科学与技术学院扬州大学生物科学与技术学院扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

将鸡伤寒沙门氏菌Sg9脂多糖(LPS)抗原包被于渗滤盒检测区(T区),针对沙门氏菌09抗原单克隆抗体3-47-0包被在质控区(C区),用胶体金标记鸡伤寒沙门氏菌LPS抗原,建立了一种抗原夹心法快速检测鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌抗体的斑点免疫金渗滤法(... 详细信息

将鸡伤寒沙门氏菌Sg9脂多糖(LPS)抗原包被于渗滤盒检测区(T区),针对沙门氏菌09抗原单克隆抗体3-47-0包被在质控区(C区),用胶体金标记鸡伤寒沙门氏菌LPS抗原,建立了一种抗原夹心法快速检测鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌抗体的斑点免疫金渗滤法(DIGFA)。人工感染鸡试验表明,DIGFA在感染后第7天即可从32只鸡中的7只检测到抗体,在时间上早于玻板凝集试验(PAT)。722份现场检测血清的检疫结果表明,斑点免疫金渗滤法比PAT有更高的阳性检出率,阳性样品抗体算术平均滴度DIGFA大于PAT法。本文建立的DIGFA快速、灵敏、准确,给鸡伤寒和鸡白痢的早期诊断提供了一个新的有效手段。

关键词：鸡白痢沙门氏菌鸡伤寒沙门氏菌斑点免疫金渗滤法(DIGFA)

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携带新城疫病毒DNA疫苗减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建及其免疫原性

携带新城疫病毒DNA疫苗减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建及其免疫原性

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会

作者：潘志明焦新安黄金林唐丽华张晓明张小荣刘秀梵扬州大学生物科学与技术学院(扬州) 扬州大学生物科学与技术学院(扬州) 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室(扬州) 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室(扬州)

根据GenBank中发表的新城疫病毒融合蛋白(F)基因序列,设计一对引物,通过RT-PCR扩增出鹅源新城疫病毒分离株JS5 F基因,约1700bp,测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1,获得重组真核表达质料***1-F经脂质体转染COS-7细胞,间接免疫荧光... 详细信息

根据GenBank中发表的新城疫病毒融合蛋白(F)基因序列,设计一对引物,通过RT-PCR扩增出鹅源新城疫病毒分离株JS5 F基因,约1700bp,测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1,获得重组真核表达质料***1-F经脂质体转染COS-7细胞,间接免疫荧光试验检测出F基因在COS-7细胞中的表达产物.将pVAX1-F转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,构建成功携带DNA疫苗的重组沙门氏菌SL7207(pVAX1-F).以10<'9>CFU/只的剂量两次免疫BALB/c小鼠,免疫小鼠可以检测到特异性针对NDV F蛋白的血清抗体和小肠粘膜抗体应答,SL7207(pVAX1-F)免疫组抗体水平显著高于SL7207(pVAX1)组(p<0.05),表明该运送DNA疫苗的减毒沙门氏菌系统在体内能够成功释放所携带的质粒,并能够刺激机体产生免疫应答.

关键词：减毒沙门氏菌 DNA疫苗新城疫病毒免疫原性

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抗H9亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的制备及初步鉴定

抗H9亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的制备及初步鉴定

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第六次人畜共患病学术交流会

作者：曾艳兵焦新安潘志明黄金林张苏华孙泉云刘秀梵扬州大学生物科学与技术学院扬州大学生物科学与技术学院扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室(扬州) 上海畜牧兽医总站兽医诊断中心(上海) 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室(扬州)

以AIV H9亚型油乳剂灭活疫苗作为免疫原,免疫8wk BALB/c小鼠.采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗AIV H9亚型血凝素蛋白的mAb;采用ELISA和血凝抑制试验(HI)检测腹水mAb的效价;采用ELISA、HI、免疫荧光染色(IF)及Western-blot鉴定mAb的特异性.... 详细信息

以AIV H9亚型油乳剂灭活疫苗作为免疫原,免疫8wk BALB/c小鼠.采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗AIV H9亚型血凝素蛋白的mAb;采用ELISA和血凝抑制试验(HI)检测腹水mAb的效价;采用ELISA、HI、免疫荧光染色(IF)及Western-blot鉴定mAb的特异性.获得3株可稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞株2A3、2H1和1C8,其腹水mAb的效价依次为1×10<'7>、1×10<'5>和5×10<'6>,血凝抑制效价为1×2<'8>~1×2<'13>;3株mAb的Ig亚类均为IgG<,1>.以2H1 mAb进行Western-blot的结果显示,该mAb能与AIV的75kd的蛋白条带起反应,表明其是针对AIV H9亚型血凝素蛋白的mAb.与32株AIV H9亚型国内分离株进行血凝抑制试验表明,2H1 mAb具有良好的广谱性.本文成功地制备了抗AIV H9亚型血凝素蛋白的mAb,为AIV的抗原性分析、血清学诊断、疫苗质量的监测及流行病学调查等奠定了基础.

关键词：禽流感病毒血凝素单克隆抗体抗原性分析血清学诊断流行病学调查

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抗猪肺炎支原体特异性P36蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

抗猪肺炎支原体特异性P36蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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第六次人畜共患病学术交流会

作者：胡茂志焦新安潘志明黄金林邵国青刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学生物科学与技术学院(江苏扬州) 扬州大学生物科学与技术学院(江苏扬州) 江苏省农业科学院兽医研究所(江苏南京)

表达P36基因的重组菌BL21(6P-1-P36)经诱导表达,超声波裂解后高速离心,分别收集上清和沉淀.可溶性表达产物亲和层析纯化后用于检测;同时,用GST-P36包涵体沉淀腹腔注射免疫BALB/c小鼠(400μg/只).利用淋巴细胞杂交瘤技术,获得了一株能分... 详细信息

表达P36基因的重组菌BL21(6P-1-P36)经诱导表达,超声波裂解后高速离心,分别收集上清和沉淀.可溶性表达产物亲和层析纯化后用于检测;同时,用GST-P36包涵体沉淀腹腔注射免疫BALB/c小鼠(400μg/只).利用淋巴细胞杂交瘤技术,获得了一株能分泌特异性抗体的单克隆细胞株5A7-2.生物学特性鉴定表明,腹水单抗的间接ELISA效价为1:2.5×10<'6>;免疫球蛋白亚类为IgG<,2a>.免疫印迹结果显示,腹水单抗与GST-P36融合蛋白反应而不与GST蛋白反应,并且在猪肺炎支原体(Mhp)蛋白36 kD位置也有明显的条带,说明细胞株5A7-2所分泌的是针对Mhp P36蛋白的单抗.P36蛋白携带Mhp种特异性抗原表位,并且重组P36蛋白的抗体也不与其它支原体或细菌反应,因此,其单克隆抗体的制备,为Mhp种特异性检测方法的建立奠定了基础.

关键词：猪肺炎支原体 P36蛋白单克隆抗体融合蛋白

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携带新城疫病毒DNA疫苗减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建及其免疫原性

携带新城疫病毒DNA疫苗减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建及其免疫原性

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中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：潘志明焦新安黄金林唐丽华张晓明张小荣刘秀梵扬州大学生物科学与技术学院扬州大学生物科学与技术学院扬州大学生物科学与技术学院扬州大学生物科学与技术学院扬州大学生物科学与技术学院扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

根据GenBank中发表的新城疫病毒融合蛋白(F)基因序列,设计一对引物,通过RT-PCR扩增出鹅源新城疫病毒分离株J55 F基因,约1700 bp,测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1,获得重组真核表达质粒pVAX1-F。pVAX1-F 经脂质体转染COS-7细胞,... 详细信息

根据GenBank中发表的新城疫病毒融合蛋白(F)基因序列,设计一对引物,通过RT-PCR扩增出鹅源新城疫病毒分离株J55 F基因,约1700 bp,测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1,获得重组真核表达质粒pVAX1-F。pVAX1-F 经脂质体转染COS-7细胞,间接免疫荧光试验检测出F基因在COS-7细胞中获得表达。将pVAX1-F转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,构建成功携带DNA疫苗的重组沙门氏菌SL7207(pVAX1-F)。以109CFU/只的剂量两次免疫BALB/c小鼠,免疫小鼠可以检测到特异性针对NDV F蛋白的血清抗体和小肠粘膜抗体应答,SL7207(pVAX1-F)免疫组抗体水平显著高于SL7207(pVAX1)组(p<0.05),表明该运送DNA疫苗的减毒沙门氏茵系统在体内能够成功释放所携带的质粒,并能够刺激机体产生免疫应答。

关键词：减毒沙门氏菌 DNA疫苗新城疫病毒免疫原性

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Real-time PCR和常规PCR方法快速鉴定肉骨粉中的牛源性成分

Real-time PCR和常规PCR方法快速鉴定肉骨粉中的牛源性成分

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第六次人畜共患病学术交流会

作者：李林王志亮陈继明农业部动物检疫所国家外来动物疾病诊断中心(山东青岛) 扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室(江苏扬州) 农业部动物检疫所国家外来动物疾病诊断中心(山东青岛)

疯牛病是一种严重危害动物和人健康的疾病,其病原朊病毒可以通过食物链进行传播,因此建立准确的检测牛源性成分的方法非常重要.我们采用常规PCR和Real-time PCR中的TaqMan技术建立了快速鉴定牛源性成分的方法,使用Chelex-100提取肉骨粉... 详细信息

疯牛病是一种严重危害动物和人健康的疾病,其病原朊病毒可以通过食物链进行传播,因此建立准确的检测牛源性成分的方法非常重要.我们采用常规PCR和Real-time PCR中的TaqMan技术建立了快速鉴定牛源性成分的方法,使用Chelex-100提取肉骨粉中的DNA,过程简单可靠仅需要20分钟左右,对不同含量的牛肉骨粉进行检测,常规PCR能够检测到的最低含量是0.001﹪,用Real-time PCR对相同的样品进行检测所得到的灵敏度更高,可达到0.0001﹪,两种PCR方法的鉴定过程都非常简单快速,各需要2个小时左右.这两种方法可以根据各实验室的不同条件作为肉骨粉鉴别的常规检测方法.

关键词：牛海绵状脑病肉骨粉朊病毒常规检测疯牛病

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直接ELISA和PCR联合检测、鉴定沙门氏菌的研究与应用

直接ELISA和PCR联合检测、鉴定沙门氏菌的研究与应用

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家畜传染病学会第六次人畜共患病学术交流会

作者：黄金林焦新安潘志明文其乙刘秀梵扬州大学生物科学与技术学院扬州大学生物科学与技术学院扬州大学生物科学与技术学院扬州大学生物科学与技术学院扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

目的通过比较试验,得到准确、快速的沙门氏菌检测方法。方法在PCR和ELISA检测沙门氏菌的基础上,将两种快速检测方法进行比较研究。结果PCR法的敏感性优于直接ELISA法。直接ELISA结合PCR法对饮食行业工作人员健康检查的1546份人粪便样品... 详细信息

目的通过比较试验,得到准确、快速的沙门氏菌检测方法。方法在PCR和ELISA检测沙门氏菌的基础上,将两种快速检测方法进行比较研究。结果PCR法的敏感性优于直接ELISA法。直接ELISA结合PCR法对饮食行业工作人员健康检查的1546份人粪便样品进行检测,同时以国标方法为参照,直接ELISA法的敏感性和特异性达100%和97.14%,PCR法的敏感性和特异性均为100%。结论确定了优化的沙门氏菌检测程序:对大量样品采用直接ELISA筛检,除去大量阴性样品,阳性样品用PCR法作进一步鉴定;血清型的确定用国标方法。

关键词：沙门氏菌 PCR ELISA 快速检测

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Pas Reform——生产孵化新产品的跨国公司

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中国禽业导刊 2004年第7期21卷 23-23页

作者：张艳梅提金凤扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室 225009

PasReform是一家基地在荷兰的私营跨国集团,是腾凯特(TenCate)集团公司的一分子。自1919年起专门从事家禽孵化新技术的开发研究。

关键词： Pas Reform 生产孵化跨国公司家禽孵化技术

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树突状细胞在沙门氏菌感染获得性免疫中的作用

树突状细胞在沙门氏菌感染获得性免疫中的作用

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家畜传染病学会第六次人畜共患病学术交流会

作者：潘志明焦新安黄金林唐丽华刘秀梵扬州大学生物科学与技术学院扬州大学生物科学与技术学院扬州大学生物科学与技术学院扬州大学生物科学与技术学院扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

对于沙门氏菌感染的免疫反应是天然免疫系统和获得性免疫系统共同发挥作用的结果。天然免疫系统中的许多成分以协调的方式来防御沙门氏菌的感染。其中发挥作用的细胞有吞噬性和非吞噬性的两种细胞组分,如中性粒细胞、巨噬细胞、自然杀... 详细信息

对于沙门氏菌感染的免疫反应是天然免疫系统和获得性免疫系统共同发挥作用的结果。天然免疫系统中的许多成分以协调的方式来防御沙门氏菌的感染。其中发挥作用的细胞有吞噬性和非吞噬性的两种细胞组分,如中性粒细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞(NK)和NKT细胞等。这些细胞通过吞噬并杀死感染的细菌。最先是由中性粒细胞和巨噬细胞(Mφ)发挥这一功能。另外,这些细胞分泌产生的细胞因子和

关键词：沙门氏菌感染特异性免疫应答经口感染

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