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中国人兽共患病杂志 2003年第1期19卷 105-107页

作者：冀德君高崧吴艳涛彭大新杨玲焦新安扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

炭疽杆菌及其芽孢感染人兽,引起高热、皮肤溃疡及焦痂,亦可因不同侵入途径而引起肺炎、肠炎或全身性败血症,是一类重要的烈性人畜共患病病原.本菌存在于感染动物及人的各个组织及排泄物中,其芽孢存在于受污染的土壤、水草、皮毛及其制品... 详细信息

炭疽杆菌及其芽孢感染人兽,引起高热、皮肤溃疡及焦痂,亦可因不同侵入途径而引起肺炎、肠炎或全身性败血症,是一类重要的烈性人畜共患病病原.本菌存在于感染动物及人的各个组织及排泄物中,其芽孢存在于受污染的土壤、水草、皮毛及其制品中.本菌及其芽孢常从破损皮肤及伤口处或从呼吸道、消化道侵入草食兽及人,迅速繁殖而产生各种毒力因子,使局部组织出血、坏死及周围组织水肿甚至导致全身性症状,使动物及人休克及死亡.本菌致病作用主要依赖于其分泌的外毒素,即使在感染的某一时期使用抗生素消灭了体内所有的炭疽杆菌,亦很难保证患畜及人免于死亡,而且抗药性的存在令其危害更大.由于这一特点,炭疽杆菌及其芽孢成为一种生物武器的材料,并被应用于恐怖活动,也正是由于这一公共卫生意义,对炭疽杆菌毒力因子及其作用机制的研究较为深入,在美国炭疽热事件之后进展更快,即将推出抑制毒素作用的新药.本文对炭疽杆菌的毒力因子研究进展作一综述.

关键词：炭疽杆菌毒力因子作用机制研究进展荚膜

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应用噬菌体肽库技术定位沙门氏菌鞭毛蛋白上属特异性共同抗原表位

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畜牧兽医学报 2003年第2期34卷 183-187页

作者：刘文博焦新安高崧张扬潘志明王芳张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

用生物素标记的沙门氏菌属特异性单克隆抗体de7作为分子探针 ,应用亲和筛选法从噬菌体肽库中筛选该单抗所针对的表位克隆 ,最终进行定位。经三轮筛选后 ,用斑点印迹法检测 ,得到良好的富集效果。通过免疫筛选法从第三轮筛选物中挑取了 ... 详细信息

用生物素标记的沙门氏菌属特异性单克隆抗体de7作为分子探针 ,应用亲和筛选法从噬菌体肽库中筛选该单抗所针对的表位克隆 ,最终进行定位。经三轮筛选后 ,用斑点印迹法检测 ,得到良好的富集效果。通过免疫筛选法从第三轮筛选物中挑取了 2 4个阳性克隆 ,再以斑点印迹、竞争ELISA进一步鉴定阳性克隆 ,证实已获得了沙门氏菌鞭毛属特异性共同抗原的模拟表位。测得的序列为SRRSFTTTE ,将其与沙门氏菌鞭毛蛋白氨基酸序列相比较 ,同源性较小 ,但在不同血清型沙门氏菌鞭毛蛋白氨基酸序列的Ⅰ区高度保守序列中 ,发现 6 1 6 5位氨基酸的RSXXT序列与所得的线性表位有相同的排列 ,而大肠杆菌鞭毛蛋白氨基酸在此段的序列为RAXXT ,且这种序列排列的几率为 1/2 0 5,因此推断该单抗所针对的表位在该区段上。此外 ,以阳性克隆免疫Balb/c小鼠 ,并制备高免血清进行间接荧光检测和竞争ELISA鉴定 ,结果表明其具有优良的免疫原性和高度的特异性 ,这亦为模拟表位疫苗的研究提供了新思路。

关键词：沙门氏菌鞭毛蛋白属共同抗原位表位模拟表位噬菌体肽库表位定位

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家禽DNA疫苗研究进展(上)

引用

中国家禽 2003年第24期25卷 40-42页

作者：张小荣焦新安扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

家禽D N A 疫苗具有安全性好、稳定性好、特异性能强等特点，本文综述了D N A 疫苗的结构、接种途径与免疫应答机制、影响免疫应答的因素以及D N A 疫苗的佐剂，并对目前研究中存在的问题进行了总结，提出了切实可行的对策，具有一定的... 详细信息

家禽D N A 疫苗具有安全性好、稳定性好、特异性能强等特点，本文综述了D N A 疫苗的结构、接种途径与免疫应答机制、影响免疫应答的因素以及D N A 疫苗的佐剂，并对目前研究中存在的问题进行了总结，提出了切实可行的对策，具有一定的科学性和实践性。

关键词：家禽 DNA疫苗优越性结构真核表达质粒抗原基因接种途径免疫应答机制佐剂

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某大型鸡场鸡大肠杆菌病流行病学调查

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中国家禽 2003年第13期25卷 12-14页

作者：彭孝先高崧刘秀梵扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州225009

某大型鸡场的28个分场分离到的菌株,经生化检验为大肠杆菌的有87株,经O血清测定定型65株,4株自凝,18株未能定型,其中O78占20株,O1占14株,O2占5株,这些分离株中O78、O1、O2有39株占定型菌株的60.0%,因此可以认定O78、O1和O2为该大型鸡场... 详细信息

某大型鸡场的28个分场分离到的菌株,经生化检验为大肠杆菌的有87株,经O血清测定定型65株,4株自凝,18株未能定型,其中O78占20株,O1占14株,O2占5株,这些分离株中O78、O1、O2有39株占定型菌株的60.0%,因此可以认定O78、O1和O2为该大型鸡场的优势血清型,以不同场分离的菌株,以每分离株107菌落形成单位(CFU)细菌气管接种1日龄易感鸡,根据接种后7天内发生死亡和病变鸡的比例,确定出高致病株、中等致病株和低致病株分别为87.36%、8.05%和4.59%。

关键词：鸡大肠杆菌病流行病学血清型大肠杆菌分离

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PRRS病毒核衣壳蛋白基因的原核表达

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2003年第1期24卷 10-13,17页

作者：陈义平彭长凌刘文博刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒 ( PRRSV)核酸序列设计 1对引物 ,用 RT-PCR扩增出美洲型 PRRSV的核衣壳蛋白 ( N)基因 ,克隆到 p GEM-T easy载体中 ,再亚克隆到表达载体 p GEX-6p-1谷胱甘肽 S转移酶 ( GST)基因的下游。重组质粒转化大肠杆... 详细信息

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒 ( PRRSV)核酸序列设计 1对引物 ,用 RT-PCR扩增出美洲型 PRRSV的核衣壳蛋白 ( N)基因 ,克隆到 p GEM-T easy载体中 ,再亚克隆到表达载体 p GEX-6p-1谷胱甘肽 S转移酶 ( GST)基因的下游。重组质粒转化大肠杆菌 BL2 1 ,用 IPTG于 3 7℃条件下诱导 ,经 SDS-PAGE和 Western blotting分析 ,GST-N融合蛋白的分子质量约为 3 9.5 ku,另 3种不同大小的 GST-N降解产物 ,分子质量分别为 3 3 .0、3 0 .5和 2 7.5 ku,其中 3 9.5和3 0 .5 ku的降解产物分别占菌体蛋白的 3 0 .9%和 1 5 .3 %。结果表明 :PRRSV核衣壳蛋白基因在大肠杆菌中以 GST融合蛋白的形式得到高效表达 ,且表达产物能与 PRRSV抗体阳性的猪血清发生特异性反应 ,可作为

关键词：猪繁殖呼吸综合征病毒 PRRS病毒核衣壳蛋白基因表达原核表达

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AIVF株HA和NA全基因的扩增及序列比较

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2003年第1期24卷 18-22页

作者：卢建红彭大新吴艳涛张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

根据禽流感病毒 ( AIV)各基因片段两端保守区序列设计锚引物 ,应用 c DNA末端快速扩增法获得了 AIV分离株 A/Chicken/Shanghai/F/98( H9N2 )的血凝素 ( HA)和神经氨酸酶 ( NA)全长基因。 1 5个毒株的 HA和 NA序列比较结果表明 :F株与 Ch... 详细信息

根据禽流感病毒 ( AIV)各基因片段两端保守区序列设计锚引物 ,应用 c DNA末端快速扩增法获得了 AIV分离株 A/Chicken/Shanghai/F/98( H9N2 )的血凝素 ( HA)和神经氨酸酶 ( NA)全长基因。 1 5个毒株的 HA和 NA序列比较结果表明 :F株与 Chicken/Beijing/1 /94、Duck/Hong Kong/Y2 80 /97同源率较高 ,为 94.4%～ 97.4% ,但与香港人流感病毒 Hong Kong/1 0 73 /99、Hong Kong/1 0 74/99及 Quail/Hong Kong/G1 /97同源率较低 ,为 90 .3 %～ 91 .9%。F株与 Duck/Hong Kong/Y2 80 /97的 NA基因不但同源率高达 97.4% ,而且均在 2 0 5位核苷酸之后缺失 9个核苷酸。另外 ,3 0个毒株的 HA基因 c DNA比较结果显示 ,最后

关键词：禽流感病毒 F株 HA基因 NA基因血凝素神经氨酸酶序列分析 RACE

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多重PCR检测猪源大肠杆菌毒素基因

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2003年第3期24卷 12-14,67页

作者：陈祥高崧王雷张小荣刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

根据猪源大肠杆菌产生的4种主要毒素(STa、STb、LT、SLT-2e)基因序列,设计4对聚合酶链式反应(PCR)引物,建立多重PCR方法。该方法能快速地检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌(ETEC)和产志贺样毒素大肠杆菌(SLTEC)菌株,准确地了解所检测菌株产生... 详细信息

根据猪源大肠杆菌产生的4种主要毒素(STa、STb、LT、SLT-2e)基因序列,设计4对聚合酶链式反应(PCR)引物,建立多重PCR方法。该方法能快速地检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌(ETEC)和产志贺样毒素大肠杆菌(SLTEC)菌株,准确地了解所检测菌株产生肠毒素和志贺样毒素的情况。对215株猪源病原性大肠杆菌进行检测,其中STa为52.56％,STb为26.51％,STa+STb为8.84％,STa+STb+SLT-2e为6.51％。这表明多重PCR可为猪源大肠杆菌毒素基因的检测提供一种更加快速、经济、易行的技术。

关键词：大肠杆菌毒素基因多重聚合酶链式反应猪

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NDV和H_9亚型AIV在血凝抑制及混合病毒在鸡胚增殖中的相互干扰

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中国家禽 2003年第z1期25卷 57-59页

作者：刘文博丁炜东孔晶王海燕胡顺林何海蓉张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

先测定NDV强、弱毒毒株和H9AIV毒株的血凝(HA)效价,并用血清分别作血凝抑制(HI)试验。将测定好的病毒液按不同比例混合,测定HA效价及血清对其抑制效价后接种SPF鸡胚。收获死胚尿囊液后测定HA、HI效价。结果显示,H9AIV和NDV之间存在比较... 详细信息

先测定NDV强、弱毒毒株和H9AIV毒株的血凝(HA)效价,并用血清分别作血凝抑制(HI)试验。将测定好的病毒液按不同比例混合,测定HA效价及血清对其抑制效价后接种SPF鸡胚。收获死胚尿囊液后测定HA、HI效价。结果显示,H9AIV和NDV之间存在比较严重的干扰现象。

关键词：鸡新城疫 H9亚型禽流行性感冒血凝抑制试验病毒干扰

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RNA病毒“拯救”技术

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中国生物工程杂志 2003年第9期23卷 21-25页

作者：刘玉良刘秀梵扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州225009

介绍了RNA病毒拯救技术体系建立的简要过程、拯救成功与否的主要影响因素以及优化拯救体系的主要研究进展。着重介绍了该技术在分子病毒学研究和疾病防制中的重要应用及发展前景。

关键词： RNA病毒反向遗传 “拯救”技术分子病毒学疾病防制

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牛奶中雌性激素样物质对雄性大鼠生殖腺的影响

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卫生毒理学杂志 2003年第2期17卷 97-100页

作者：李湘鸣刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室江苏扬州225009

白丹麦的Carlsen等~[1],报道人类精子计数下降以来，世界各国对人类男性生殖健康问题给予极大的关注。有研究报道，近50年来，人类的精子数量了50%，与此同时，世界各国前列腺和睾丸癌发病率也在不断升高，特别是以发达国家为重~[2]。... 详细信息

白丹麦的Carlsen等~[1],报道人类精子计数下降以来，世界各国对人类男性生殖健康问题给予极大的关注。有研究报道，近50年来，人类的精子数量了50%，与此同时，世界各国前列腺和睾丸癌发病率也在不断升高，特别是以发达国家为重~[2]。究竟是何种原因造成了男性生殖健康日趋恶化？有关专家认为是由于环境刺激素在起作用，所谓环境刺激素，是指环境中存在的一些能够像刺激素一样影响人体内分泌功能的物质，又称为环境内分泌干扰剂(environmental endocrine-eisrupting chemicals,简称EDCs)它干扰生物为保持体内平衡和调节发育过程的正常激素的产生、释放、转移、代谢、结合、反应和消除，主要通过水、空气和食物作用于人体。但是Boyle等~[3]学者认为，人类精子计数下降及生殖肿瘤发病率的升高与动物性食物摄入量有关。Hartmann等~[4]，发现动物性食物中含有较多的雌激素样物质，特别是牛奶中含量较多。为此，我们选用Wistar大鼠，对于牛奶进行了2代繁殖试验评价研究

关键词：牛奶环境雌激素雄性大鼠生殖腺胰岛素类生长因子-1

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