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中草药 2014年第14期45卷 2036-2041页

作者：詹扬韦英杰孙娥王丹丹景莉君贾晓斌中国中医科学院江苏分院、江苏省中医药研究院、国家中医药管理局中药口服释药系统重点研究室江苏南京210028 江苏大学药学院江苏镇江212013

目的利用泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松模型筛选朝鲜淫羊藿抗骨质疏松活性部位,探讨斑马鱼骨质疏松模型的适用性与合理性。方法将受精后4 d的斑马鱼幼鱼暴露在25μmol/L泼尼松龙模型药物组,含25μmol/L泼尼松龙的15μg/mL依替膦酸二钠... 详细信息

目的利用泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松模型筛选朝鲜淫羊藿抗骨质疏松活性部位,探讨斑马鱼骨质疏松模型的适用性与合理性。方法将受精后4 d的斑马鱼幼鱼暴露在25μmol/L泼尼松龙模型药物组,含25μmol/L泼尼松龙的15μg/mL依替膦酸二钠阳性药物组,0.5%DMSO溶媒对照组、含25μmol/L泼尼松龙的朝鲜淫羊藿总提物(生药0.1、1.0、10.0、100.0μg/mL)及其大孔树脂水及30%、50%、70%、90%乙醇洗脱部位(生药1.0、10.0、100.0、1 000.0μg/mL)溶液组,28.5℃下在24孔板中培养,每天换液至第9天处死。采用茜素红对各组斑马鱼幼鱼骨骼染色,并以显微检测、数码成像方法定量分析骨骼染色区域。结果与对照组相比,模型组斑马鱼头部骨骼染色面积和染色光密度值显著减少;与模型组比较,除朝鲜淫羊藿大孔树脂水洗脱部位外,朝鲜淫羊藿总提物及30%、50%、70%、90%乙醇洗脱部位的斑马鱼头部骨骼染色面积和染色光密度值显著增加。色谱分析表明30%、50%、70%、90%乙醇分离部位主要含黄酮类成分和少量非黄酮类化合物。结论斑马鱼骨质疏松模型成功用于高效筛选朝鲜淫羊藿的抗骨质疏松活性部位,具简单、高效及可操作性强的优势。

关键词：斑马鱼骨质疏松朝鲜淫羊藿活性部位筛选

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基于网络药理学的淫羊藿防治疾病的优效组分及信号通路研究

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中国中药杂志 2018年第23期43卷 4709-4717页

作者：张润桐吴海宁于桂红周园里贾晓斌封亮江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药释药系统重点研究室江苏南京210028 中国药科大学中药学院中药制药系江苏南京211198

该研究采用网络药理学技术筛选出中药淫羊藿防治疾病的活性组分,并对潜在的靶点与机制进行整合与分析。采用TCMSP数据库筛选活性成分,利用TTD和DrugBank数据库配合文献挖掘潜在靶点进行预测,利用通路注释技术对淫羊藿中活性成分及潜在... 详细信息

该研究采用网络药理学技术筛选出中药淫羊藿防治疾病的活性组分,并对潜在的靶点与机制进行整合与分析。采用TCMSP数据库筛选活性成分,利用TTD和DrugBank数据库配合文献挖掘潜在靶点进行预测,利用通路注释技术对淫羊藿中活性成分及潜在靶点进行通路的富集与分析。该研究共筛选出淫羊藿中具有潜在靶点的活性成分34个,主要包括淫羊藿苷,朝藿定A,朝藿定B,朝藿定C,淫羊藿A,淫羊藿C在内的21个黄酮类组分;(+)-cycloolivil和olivil在内的木脂素类组分以及谷甾醇、24-epicampesterol和poriferast-5-en-3beta-ol在内的甾醇类组分。另外,筛选出与之相对应的作用靶点183个,主要包含Ptgs2,NCOA6,RANK,OPG,WNT9B,PTH1R,BMPs,SMAD4A等;共涉及信号通路84条,如NF-κB信号通路、T细胞受体信号通路、IL-17信号通路等在内的8条炎症相关通路,乳腺癌、膀胱癌、胰腺癌在内的10条肿瘤疾病类相关通路以及与雌激素信号通路在内的内分泌等相关通路。这为淫羊藿活性组分的发现及作用机制研究奠定了基础。

关键词：淫羊藿网络药理学成分-靶点组分发现

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二维斑马鱼模型联合色谱技术评价朝藿定A及其代谢物宝藿苷I抗骨质疏松活性

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药学学报 2014年第6期49卷 932-937页

作者：詹扬韦英杰孙娥徐凤娟贾晓斌中国中医科学院江苏分院江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药口服释药系统重点研究室江苏南京210028 江苏大学药学院江苏镇江212013

以二维斑马鱼模型联合色谱技术筛选朝藿定A及其代谢物宝藿苷I的抗骨质疏松活性,建立高效筛选中药抗骨质疏松活性成分新方法。用斑马鱼成鱼对朝藿定A的0.5%DMSO溶液进行代谢,代谢液浓缩后用LC-MS分析、HPLC捕获代谢产物宝藿苷I,用斑马鱼... 详细信息

以二维斑马鱼模型联合色谱技术筛选朝藿定A及其代谢物宝藿苷I的抗骨质疏松活性,建立高效筛选中药抗骨质疏松活性成分新方法。用斑马鱼成鱼对朝藿定A的0.5%DMSO溶液进行代谢,代谢液浓缩后用LC-MS分析、HPLC捕获代谢产物宝藿苷I,用斑马鱼骨质疏松模型评价朝藿定A和宝藿苷I的活性。结果表明朝藿定A和宝藿苷I均能防止泼尼松龙诱导斑马鱼骨质疏松。该方法使朝藿定A的量微代谢产物得到富集、分离分析,通过在体斑马鱼抗骨质疏松模型简单、高效的筛选朝藿定A及代谢产物宝藿苷I的抗骨质疏松活性,为早期、快速发现中药量微成分及其代谢物的抗骨质疏松活性提供新思路与方法。

关键词：斑马鱼骨质疏松模型代谢模型活性筛选朝藿定A 宝藿苷I

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栀子苷降糖作用及相关机制研究

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中草药 2014年第8期45卷 1121-1125页

作者：姚冬冬舒娈杨蕾贾晓斌孙敏安徽大学生命科学学院安徽合肥230039 江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药释药系统重点研究室江苏南京210028

目的探讨栀子苷对糖尿病小鼠的降糖作用及机制。方法 C57BL/6J小鼠通过一次性注射90 mg/kg链脲佐菌素(STZ)后结合4周喂养高脂食料建立糖尿病小鼠模型。实验小鼠随机分为对照组、模型组、栀子苷(100 mg/kg)治疗组。ig给药,每日1次,定期... 详细信息

目的探讨栀子苷对糖尿病小鼠的降糖作用及机制。方法 C57BL/6J小鼠通过一次性注射90 mg/kg链脲佐菌素(STZ)后结合4周喂养高脂食料建立糖尿病小鼠模型。实验小鼠随机分为对照组、模型组、栀子苷(100 mg/kg)治疗组。ig给药,每日1次,定期检测小鼠空腹血糖及体质量。治疗30 d后,检测小鼠空腹血浆胰岛素和口服糖耐量(OGTT)变化。采用胰岛素及Ki67抗体对小鼠胰腺组织切片进行免疫荧光染色,观察胰腺组织形态学的改变,以及胰岛β细胞增殖情况;Western Blotting方法检测小鼠肝脏组织中p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达水平。结果与模型组相比,栀子苷治疗组小鼠血糖水平降低,体质量下降,而血浆胰岛素水平升高,OGTT有所改善;胰腺组织切片免疫荧光染色结果表明,模型组小鼠胰岛结构被破坏,而栀子苷治疗组有明显改善,并且观察到Ki67表达,表明栀子苷能够促进胰岛β细胞增殖;栀子苷治疗组小鼠肝脏中Akt、GSK-3β蛋白磷酸化水平较模型组均有显著上调。结论栀子苷能够有效改善糖尿病模型小鼠的高血糖症状,并增加血浆胰岛素水平,其作用可能与促进胰岛β细胞增殖,激活胰岛素受体下游Akt通路有关。

关键词：栀子苷糖尿病胰岛β细胞蛋白激酶B 糖原合成酶激酶

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泽泻醇提物对大鼠肾毒性及其分子机制的探究实验

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中国中药杂志 2016年第18期41卷 3432-3438页

作者：汪春飞马良侯雪峰陈海峰封亮贾晓斌江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药释药系统重点研究室江苏南京210028 安徽中医药大学药学院安徽合肥230038 厦门大学药学院福建厦门361102

泽泻醇提物长期喂养大鼠,探究其对大鼠的肾毒性作用,并研究其肾毒性的可能的分子机制。60只雌性大鼠随机分为空白组,雷公藤对照组,庆大霉素对照组,泽泻高、中、低剂量组,连续给药6个月。利用高效液相色谱仪(HPLC)对泽泻提取物成分进行分... 详细信息

泽泻醇提物长期喂养大鼠,探究其对大鼠的肾毒性作用,并研究其肾毒性的可能的分子机制。60只雌性大鼠随机分为空白组,雷公藤对照组,庆大霉素对照组,泽泻高、中、低剂量组,连续给药6个月。利用高效液相色谱仪(HPLC)对泽泻提取物成分进行分析,同时采用HE染色检测肾脏病理变化,通过Western blot法、免疫组织化学和q-PCR法检测Kim-1,clusterin,LCN2,osteopontin,ceruloplasmin和TIMP1蛋白和m RNA水平。HPLC解析出泽泻醇提物中的8个成分(环氧泽泻烯,泽泻醇F,泽泻醇A,24-乙酰泽泻醇F,泽泻醇A-24-醋酸酯,泽泻醇B,23-乙酰泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇C)。HE染色结果显示,高、中剂量的大鼠肾脏间质炎性细胞浸润,肾小管上皮细胞水肿且形态发生变化。与空白组相比,雷公藤和庆大霉素对照组大鼠肾脏Kim-1,clusterin,LCN2,osteopontin和TIMP1蛋白和m RNA水平显著地提高,而ceruloplasmin蛋白和m RNA水平显著地降低;给予泽泻高、中剂量6个月后,大鼠肾脏Kim-1,clusterin,LCN2,osteopontin和TIMP1蛋白和m RNA水平也有显著地提高,而ceruloplasmin蛋白和m RNA水平显著地降低。长期大剂量服用泽泻醇提物可导致雌性大鼠产生肾毒性,其分子机制可能是通过调节Kim-1,ceruloplasmin,clusterin,LCN2,osteopontin和TIMP1等蛋白的表达来实现。

关键词：泽泻泽泻醇提物肾毒性分子机制

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紫堇灵的分离制备及抗炎活性

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中国药科大学学报 2017年第6期48卷 715-720页

作者：张浩李木子翟晓婷朱粉霞南京中医药大学药学院南京210023 南京中医药大学附属江苏省中西医结合医院南京210028 江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药口服制剂释药系统重点研究室南京210028

旨在从苦地丁药材中分离出紫堇灵,从TLRs/NF-κB信号传导通路角度探讨其抗炎作用机制。以80%乙醇提取、硅胶柱色谱等方法制备紫堇灵,UPLC、MS、1H NMR、^(13)C NMR等方法进行纯度及结构鉴定;利用MTT实验评价紫堇灵的细胞毒性;采用脂多糖... 详细信息

旨在从苦地丁药材中分离出紫堇灵,从TLRs/NF-κB信号传导通路角度探讨其抗炎作用机制。以80%乙醇提取、硅胶柱色谱等方法制备紫堇灵,UPLC、MS、1H NMR、^(13)C NMR等方法进行纯度及结构鉴定;利用MTT实验评价紫堇灵的细胞毒性;采用脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞建立炎症模型,用紫堇灵进行干预,以Western blot技术检测RAW264.7巨噬细胞中TLR4、TLR2、IκBα、p-IκBα、p65和p-p65蛋白的表达水平;进而通过实时荧光定量PCR、Western blot技术分别检测p65 mRNA及细胞核p65表达情况。实验发现,在LPS诱导的RAW264.7炎症细胞模型中,5~40μmol/L紫堇灵呈正相关下调RAW264.7细胞中TLR4、TLR2蛋白的表达水平,抑制IκBα磷酸化并从基因水平和蛋白水平抑制p65转位入核。结果表明,紫堇灵可能是通过TLRs/NF-κB信号通路发挥对LPS致RAW264.7细胞炎症的抑制作用。

关键词：紫堇灵脂多糖 RAW264.7巨噬细胞抗炎机制

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基于斑马鱼在体模型高效筛选补骨脂配伍减毒研究

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南京中医药大学学报 2021年第1期37卷 54-61页

作者：宁青刘中秋韦英杰胡明广州中医药大学国际中医药医学转化研究所广东广州510006 江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药释药系统重点研究室江苏南京210028

目的基于斑马鱼在体模型高效筛选补骨脂配伍减毒药味,探讨其减毒机制,为临床用药安全提供理论依据。方法采用受精后1~6 dpf斑马鱼,研究不同药味对斑马鱼的影响,观察鱼脏器行态/形态,计数死亡数,快速筛选确定安全浓度;以补骨脂素为代表... 详细信息

目的基于斑马鱼在体模型高效筛选补骨脂配伍减毒药味,探讨其减毒机制,为临床用药安全提供理论依据。方法采用受精后1~6 dpf斑马鱼,研究不同药味对斑马鱼的影响,观察鱼脏器行态/形态,计数死亡数,快速筛选确定安全浓度;以补骨脂素为代表毒性成分,观察不同药味与其配伍后对斑马鱼毒性的变化,筛选有效减毒的药味及成分;采用RNA-seq技术(RNA sequencing)对杜仲代表活性成分桃叶珊瑚苷配伍补骨脂素进行转录组测序,建立基因表达谱(DGE)文库,进行肝毒相关基因本体论(GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析,筛选出肝脏相关通路中有代表性的差异表达基因,初步探讨桃叶珊瑚苷配伍减毒机制。结果通过筛选表明桃叶珊瑚苷可显著降低补骨脂对斑马鱼的肝脏毒性影响。RNA-Seq富集显示,加入桃叶珊瑚苷配伍后与原有的单一补骨脂素组相比,毒性、疾病(癌症)、免疫激活、化学致癌特征信号方面有明显的减少,神经营养因子、长寿调节、血小板激活信号通路增强。同时筛选出差异表达基因gpx1b、pgd、rrm2、gstp2、anpepb、cyp1a、prf1.5、nfκb2。结论利用斑马鱼在体快速评价的优势,实现基于体内过程的毒性评价,先从毒性明确的代表成分补骨脂素配伍可快速锁定减毒药味及成分,利用RNA-seq技术可进一步分析其配伍减毒的机制,该研究对其临床药味配伍减毒理论具有一定的意义。

关键词：斑马鱼补骨脂配伍减毒 RNA-seq

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胶体二氧化硅固化银杏黄酮组分磷脂复合物的研究

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中草药 2014年第8期45卷 1078-1082页

作者：夏海建张振海孙娥陈小云万高星河贾晓斌南京中医药大学附属中西医结合医院江苏南京210028 江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药释药系统重点研究室江苏南京210028

目的制备银杏黄酮组分磷脂复合物(GF-PC),并利用胶体二氧化硅(CS)对其进行固化。方法以CS为载体,固化GF-PC。采用差示扫描量热分析(DSC)法、X射线粉末衍射分析(XPRD)法和扫描电镜(SEM)法对所制备的磷脂复合物和固化粉末进行物相表征,并... 详细信息

目的制备银杏黄酮组分磷脂复合物(GF-PC),并利用胶体二氧化硅(CS)对其进行固化。方法以CS为载体,固化GF-PC。采用差示扫描量热分析(DSC)法、X射线粉末衍射分析(XPRD)法和扫描电镜(SEM)法对所制备的磷脂复合物和固化粉末进行物相表征,并考察其体外溶出和流动性。结果 DSC和XPRD图谱表明,GF以无定形状态存在于固化粉末中。体外溶出结果表明,固化粉末能够有效促进药物的溶出。结论 CS固化GF-PC的制备工艺简单、操作方便,在提高自身流动性的同时能够显著改善其溶出性。

关键词：银杏黄酮组分胶体二氧化硅磷脂复合物固化粉末表征

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雷公藤红素缓释滴丸的研究

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中草药 2013年第7期44卷 834-838页

作者：夏海建张振海贾晓斌南京中医药大学附属中西医结合医院江苏南京210028 江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药释药系统重点研究室江苏南京210028

目的制备雷公藤红素缓释滴丸,考察药物的分散状态和体外释放度,优化制备工艺。方法以聚乙二醇4000(PEG4000)和单硬脂酸甘油酯(GM)为载体材料,采用固体分散体方法制备雷公藤红素缓释滴丸,以圆整度和质量差异为评价指标,采用正交试验考察... 详细信息

目的制备雷公藤红素缓释滴丸,考察药物的分散状态和体外释放度,优化制备工艺。方法以聚乙二醇4000(PEG4000)和单硬脂酸甘油酯(GM)为载体材料,采用固体分散体方法制备雷公藤红素缓释滴丸,以圆整度和质量差异为评价指标,采用正交试验考察滴丸成型的影响因素。结果经过优化缓释滴丸处方以雷公藤红素、GM和PEG4000按质量比1∶3∶7组成,药料温度80℃,滴速20滴/min,滴距5cm,冷凝液温度15℃。缓释滴丸中药物以非晶形存在,该缓释滴丸12h的最大累积释放率可达91.2%。结论所制得的雷公藤红素缓释滴丸具有良好的缓释效果。

关键词：雷公藤红素固体分散体缓释滴丸体外释放度圆整度制备工艺

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色谱捕获联合斑马鱼模型高效筛选补骨脂抗骨质疏松活性成分

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中国药学杂志 2018年第12期53卷 956-961页

作者：凌洁王茉王丹丹景莉君陈颖贾晓斌韦英杰南京中医药大学第三临床医学院南京210028 江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药释药系统重点研究室南京210028 解放军93318部队医院辽宁开原112300

目的采用色谱捕获联合斑马鱼模型高效筛选补骨脂抗骨质疏松活性成分。方法用高效液相色谱分析捕获补骨脂香豆素类、黄酮类及补骨脂酚等成分/组分,用25μmol·L-1泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松模型评价捕获的成分/组分、补骨脂素和... 详细信息

目的采用色谱捕获联合斑马鱼模型高效筛选补骨脂抗骨质疏松活性成分。方法用高效液相色谱分析捕获补骨脂香豆素类、黄酮类及补骨脂酚等成分/组分,用25μmol·L-1泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松模型评价捕获的成分/组分、补骨脂素和异补骨脂素的活性,同时设25μmol·L-1泼尼松龙模型药物组,0.4%二甲基亚砜(DMSO)培养基对照组。采用茜素红对培养至8 dpf的各组斑马鱼幼鱼骨骼染色,进行显微检测、数码成像,并用图像软件定量分析骨骼染色区域。结果补骨脂香豆素类和黄酮类均具显著的抗泼尼松龙诱导斑马鱼骨丢失作用,但补骨脂酚作用较弱,且毒性较大,高剂量可致斑马鱼全部死亡。结论高效液相色谱可系统分析、任意捕获补骨脂成分/组分,斑马鱼骨质疏松模型可在体评价捕获的量微成分/组分,二者有机结合同时突破了中药复杂成分获取与在体高效评价的双重瓶颈,有望实现中药全成分抗骨质疏松成分/组分的高效筛选。

关键词：斑马鱼补骨脂色谱捕获骨质疏松

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