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藏药镰形棘豆总黄酮对SMMC-7721肝癌细胞凋亡及Bcl-2，Bax蛋白表达的影响

中国药学杂志 2013年第24期48卷 2113-2116页

作者：杨光明燕珂顾青李俊松潘扬蔡宝昌南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心南京210023 南京中医药大学药用菌与中药生物技术研究所南京210023

目的研究藏药镰形棘豆对SMMC-7721人肝癌细胞的凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法镰形棘豆总黄酮不同剂量作用于SMMC-7721细胞后,Annexin V-FITC/PI双染法检测SMMC-7721细胞的凋亡;蛋白质印迹法检测对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的... 详细信息

目的研究藏药镰形棘豆对SMMC-7721人肝癌细胞的凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法镰形棘豆总黄酮不同剂量作用于SMMC-7721细胞后,Annexin V-FITC/PI双染法检测SMMC-7721细胞的凋亡;蛋白质印迹法检测对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。结果镰形棘豆总黄酮作用SMMC-7721细胞后可观察到凋亡细胞的比例明显升高;Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达与对照组相比虽有所降低,但Bcl-2/Bax比值显著减小。结论镰形棘豆总黄酮可明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,其分子机制可能与下调Bcl-2基因表达和降低Bcl-2/Bax的比值有关。

关键词：镰形棘豆 SMMC-7721 凋亡蛋白表达抗肿瘤

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自然铜煅制过程物相动态变化规律

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中国实验方剂学杂志 2015年第18期21卷 1-4页

作者：赵根华翁泽斌高倩倩陈志鹏蔡宝昌李伟东南京中医药大学药学院江苏省中药炮制重点实验室国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心南京210023

目的:探讨自然铜在煅制过程中煅制温度、煅制时间及醋淬次数对物相变化的影响,分析其物相变化规律。方法:采用X射线衍射法定性和半定量分析煅制温度、煅制时间及醋淬次数对自然铜物相变化的影响。结果:煅制温度、煅制时间及醋淬次数对... 详细信息

目的:探讨自然铜在煅制过程中煅制温度、煅制时间及醋淬次数对物相变化的影响,分析其物相变化规律。方法:采用X射线衍射法定性和半定量分析煅制温度、煅制时间及醋淬次数对自然铜物相变化的影响。结果:煅制温度、煅制时间及醋淬次数对自然铜炮制过程中物相变化均有一定影响,以煅制温度的影响最大,醋淬次数对于物相转化为氧化物影响大于炮制时间。自然铜在煅制过程中主要物相变化规律是Fe S2先分解为Fe7S8,至600℃分解为以Fe7S8为主的混合物相,在600℃下煅制4 h醋淬3次,自然铜将被氧化成以Fe2O3为主要物相,煅制温度为800℃时自然铜从Fe7S8氧化为Fe2O3。结论:煅制温度、煅制时间及醋淬次数对自然铜的物相组成和变化均存在不同程度影响,且自然铜在煅制过程中物相呈规律性变化。

关键词：自然铜煅制温度煅制时间醋淬次数 X射线粉末衍射物相变化

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镰形棘豆总生物碱对S180荷瘤小鼠的抗肿瘤作用研究

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中华中医药杂志 2011年第11期26卷 2540-2542页

作者：陈醒杨光明何媛媛蔡宝昌南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心南京210029

目的:研究镰形棘豆总生物碱的体内抗肿瘤作用并探讨其作用机制。方法:采用S180荷瘤小鼠模型,将生理盐水和总生物碱灌胃给药,阳性药环磷酰胺腹腔注射,给药后检测小鼠的体质量、抑瘤率、胸腺指数以及脾指数,并通过HE染色,光镜下观察肿瘤... 详细信息

目的:研究镰形棘豆总生物碱的体内抗肿瘤作用并探讨其作用机制。方法:采用S180荷瘤小鼠模型,将生理盐水和总生物碱灌胃给药,阳性药环磷酰胺腹腔注射,给药后检测小鼠的体质量、抑瘤率、胸腺指数以及脾指数,并通过HE染色,光镜下观察肿瘤细胞的形态变化。结果:镰形棘豆总生物碱高、中、低剂量组对S180荷瘤小鼠的抑瘤率分别为74.8%、79.3%、69.4%,总生物碱各剂量组对S180荷瘤小鼠的胸腺指数和脾指数均高于环磷酰胺组和生理盐水组,但无显著性差异。实验过程中,小鼠体质量没有降低,未显示任何毒性反应。HE染色发现,给药组肿瘤间质可见炎细胞浸润。结论:镰形棘豆总生物碱具有明显的抗肿瘤作用,其机制可能是通过增强小鼠的免疫调节功能来实现的。

关键词：镰形棘豆生物碱抗肿瘤

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商陆总皂苷对癌性腹水模型小鼠的祛腹水作用及机制初探

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中国中药杂志 2022年第16期47卷 4411-4417页

作者：王彩霞郁红礼吴皓陶兴宝谢雨薇程砚秋曾平王贺鹏张萍崔小兵南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 中国食品药品检定研究院北京100050

为研究商陆皂苷类成分祛腹水药效作用及其机制,采用H22腹水小鼠模型,取ICR雄性小鼠腹腔注射H22细胞混悬液,将造模成功小鼠随机分为模型组、阳性药组(呋塞米,6 mg·kg^(-1))、商陆总提物组和总皂苷组(1.29 g·kg^(-1)),另取雄性... 详细信息

为研究商陆皂苷类成分祛腹水药效作用及其机制,采用H22腹水小鼠模型,取ICR雄性小鼠腹腔注射H22细胞混悬液,将造模成功小鼠随机分为模型组、阳性药组(呋塞米,6 mg·kg^(-1))、商陆总提物组和总皂苷组(1.29 g·kg^(-1)),另取雄性小鼠10只作为空白组。空白组和模型组小鼠灌胃给予含0.5%CMC-Na的生理盐水,阳性药组、商陆总提物组和总皂苷组小鼠灌胃给予相应剂量药物,每日1次,连续给药8 d,考察商陆总皂苷对模型小鼠腹水量、给药后5 h内尿量和粪便含水量的影响,同时以血清抗利尿激素(ADH)、肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)相关激素肾素(renin)、血管紧张素2(AngⅡ)和醛固酮(ALD)含量,肾脏组织中水通道蛋白(aquaporin,AQP)1~AQP4表达量,结肠AQP1、AQP3表达量及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路相关蛋白的表达量为指标,探索商陆总皂苷祛腹水作用的机制。结果表明,商陆总皂苷可以增加腹水模型小鼠尿量和粪便含水量,减少腹水量;显著降低肾脏AQP1~AQP4和结肠AQP1、AQP3的表达;显著降低血清ADH、renin、AngⅡ和ALD水平;同时可显著降低腹水模型小鼠肾脏p-PI3K和p-Akt蛋白的表达。商陆总皂苷通过利尿和泻下作用发挥祛腹水功效,其作用机制可能与抑制RAAS、ADH活性;抑制PI3K/Akt信号通路磷酸化从而抑制肾脏和结肠AQPs表达有关。

关键词：商陆总皂苷腹水水通道蛋白 PI3K/Akt 肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)

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半夏凝集素蛋白单克隆抗体的制备及双抗夹心ELISA的建立

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中国中药杂志 2022年第22期47卷 6076-6081页

作者：谢雨薇郁红礼吴皓陶兴宝王贺鹏程砚秋王彩霞曾平刘冰冰张萍崔小兵南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 中国食品药品检定研究院北京100050

为测定半夏及其炮制品中内源性毒性物质半夏凝集素蛋白(Pinellia ternata lectin, PTL)的含量,该文采用杂交瘤细胞技术制备PTL特异性单克隆抗体,并建立了PTL抗原定量双抗夹心ELISA检测方法,检测条件为:捕获抗体工作浓度为2.5μg·mL... 详细信息

为测定半夏及其炮制品中内源性毒性物质半夏凝集素蛋白(Pinellia ternata lectin, PTL)的含量,该文采用杂交瘤细胞技术制备PTL特异性单克隆抗体,并建立了PTL抗原定量双抗夹心ELISA检测方法,检测条件为:捕获抗体工作浓度为2.5μg·mL-1,检测抗体稀释倍数为1∶450,包被条件为4℃过夜,封闭时间、抗原及检测抗体孵育时间均为90 min,辣根过氧化物酶标记链霉亲和素(streptavidin-horseradish peroxidase, SA-HRP)孵育时间为15 min。该方法对PTL抗原的定量限为0.375 ng·mL-1;线性范围为75.000~4 800.000 pg·mL-1,R~2=0.997 1;加样回收率在90.0%~110.0%;试验内和试验间精密性变异系数分别在2.0%~3.0%、2.0%~8.5%。采用该方法测定3批半夏及其炮制品中PTL含量,测得半夏中PTL质量分数均值为35.42 mg·g^(-1),其炮制品清半夏、法半夏、姜半夏中PTL质量分数均值分别为1.15 mg·g^(-1)、16.53μg·g^(-1)和122.63 ng·g^(-1),表明炮制后PTL含量显著下降。该文建立的PTL抗原定量双抗夹心ELISA检测方法线性较好,反应灵敏,准确度高,为半夏炮制过程中PTL含量检测提供一种简便有效的监测方法。

关键词：半夏凝集素蛋白单克隆抗体双抗夹心ELISA

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基于FXR-SULT1E1通路探究盐补骨脂致小鼠胆汁淤积性肝损伤的性别差异

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中草药 2023年第9期54卷 2802-2811页

作者：吴育周浓梅春梅石芸华政颖李伟东南京中医药大学南通附属医院江苏南通226000 南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室、国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 重庆三峡学院重庆404120

目的从法尼醇受体(farnesoid X receptor,FXR)-硫酸基转移酶1E1(sulfotransferase 1E1,SULT1E1)通路探讨盐补骨脂致小鼠胆汁淤积性肝损伤性别差异的潜在机制。方法ICR雌性和雄性小鼠连续ig不同剂量(5、10、20 g/kg)的盐补骨脂水煎液30 d... 详细信息

目的从法尼醇受体(farnesoid X receptor,FXR)-硫酸基转移酶1E1(sulfotransferase 1E1,SULT1E1)通路探讨盐补骨脂致小鼠胆汁淤积性肝损伤性别差异的潜在机制。方法ICR雌性和雄性小鼠连续ig不同剂量(5、10、20 g/kg)的盐补骨脂水煎液30 d,采用HPLC仪检测补骨脂炮制后化学成分含量;采用全自动生化仪检测肝损伤相关指标;取肝脏、脾脏、肾脏、肺脏以及卵巢、睾丸,称定质量并计算脏器指数;采用苏木素-伊红(HE)染色法进行肝脏病理组织学检查;采用透射电镜观察盐补骨脂致胆汁淤积性肝损伤的显微结构变化;采用ELISA法检测血清中雌二醇(estradiol,E_(2))、促卵泡激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、对氧磷酶1(paraoxonase 1,PON1)及FXR含量;采用免疫荧光染色法检测肝脏胆盐输出泵(bile salt export pump,Bsep)、多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance protein 2,Mrp2)和SULT1E1的表达;采用Western blotting检测肝脏FXR、Mrp2、胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7a1)、Bsep、SULT1E1、肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α,HNF4α)和核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)蛋白表达。结果盐补骨脂给药后小鼠肝脏出现明显的肝细胞肿胀、胆管扩张、血清生化指标升高等病理变化,其中雌鼠更为严重(P<0.05、0.01、0.001)。免疫荧光实验显示给药后肝脏Bsep和Mrp2荧光强度均显著降低(P<0.05、0.001),但雌鼠更为明显;雌鼠肝脏中SULT1E1表达水平显著降低(P<0.001),而在雄鼠的肝脏中没有差异。ELISA结果显示雌鼠和雄鼠血清中E2、FSH和LH水平均显著升高(P<0.05、0.01、0.001),雌鼠更为明显。Western blotting结果显示,雌鼠给药后肝脏FXR、Mrp2、Bsep、SULT1E1、HNF4α和Nrf2表达明显降低(P<0.05、0.01、0.001),CYP7a1表达显著升高(P<0.01);雄鼠给药后FXR和Bsep表达明显降低(P<0.05、0.01)。结论盐补骨脂通过HNF4α调控FXR-SULT1E1信号通路,补骨脂下调了胆固醇和胆汁酸生物合成的关键酶SULT1E1,增加了胆汁淤积性肝损伤的风险,这可能是肝损伤性别差异的主要原因。

关键词：盐补骨脂法尼醇受体-硫酸基转移酶1E1通路肝细胞核因子4α 胆汁淤积性肝损伤雌激素性别差异

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大戟属根类有毒中药醋制前后的毒性比较研究

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中国中药杂志 2012年第6期37卷 796-799页

作者：邱韵萦郁红礼吴皓朱法根陶文婷徐秋香南京中医药大学药学院江苏南京210029 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210029 国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室江苏南京210029 江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210029

目的:研究京大戟、甘遂、狼毒炮制前后的毒性变化并比较三者的毒性强弱。方法:采用肠推进运动模型及巨噬细胞炎症模型,评价3种大戟属根类有毒中药炮制前后的毒性。结果:京大戟、甘遂、狼毒生品及醋品均可明显促进小鼠小肠推进运动及巨... 详细信息

目的:研究京大戟、甘遂、狼毒炮制前后的毒性变化并比较三者的毒性强弱。方法:采用肠推进运动模型及巨噬细胞炎症模型,评价3种大戟属根类有毒中药炮制前后的毒性。结果:京大戟、甘遂、狼毒生品及醋品均可明显促进小鼠小肠推进运动及巨噬细胞释放NO的能力,强弱顺序为甘遂>京大戟>狼毒,醋制后三者均可明显缓和这一作用。结论:京大戟、甘遂、狼毒可诱导炎症反应的发生并促进肠推进运动,产生强烈的泻下作用,醋制后致炎及肠推进作用显著减弱,表明醋制可缓和京大戟、甘遂、狼毒的泻下作用。

关键词：大戟属京大戟甘遂狼毒醋制毒性

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盐炙对青娥丸主要成分溶出的影响

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中成药 2018年第12期40卷 2714-2718页

作者：刘玲朱星宇陆金兰陈志鹏吴丽李伟东南京中医药大学药学院国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210046

目的探讨盐炙对青娥丸中主要成分溶出的影响。方法采用HPLC法测定了青娥丸生品、清炒品、盐润品、盐炙品中15种指标性成分含有量。结果补骨脂酚经过炮制后含有量均呈显著性降低。与青娥丸生品相比,清炒后补骨脂苷、异补骨脂苷含有量显... 详细信息

目的探讨盐炙对青娥丸中主要成分溶出的影响。方法采用HPLC法测定了青娥丸生品、清炒品、盐润品、盐炙品中15种指标性成分含有量。结果补骨脂酚经过炮制后含有量均呈显著性降低。与青娥丸生品相比,清炒后补骨脂苷、异补骨脂苷含有量显著升高,京尼平苷酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷含有量无显著变化,其他成分含有量均下降;盐水闷润后,补骨脂苷和异补骨脂苷含有量下降,补骨脂素与异补骨脂素含有量显著升高;盐炙后补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂二氢黄酮、补骨脂二氢黄酮甲醚含有量明显下降,补骨脂苷、异补骨脂苷、异补骨脂二氢黄酮含有量明显升高,其他成分无显著性变化。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于青娥丸的质量控制。

关键词：青娥丸盐炙补骨脂素/苷异补骨脂素/苷

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基于ROS/NF-κB信号通路的天南星凝集素致炎机制及炮制对蛋白的影响

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中华中医药杂志 2018年第5期33卷 1740-1746页

作者：王卫毛善虎单雪莲程梓烨陈云郁红礼吴皓南京中医药大学药学院南京210023 江苏省中药炮制重点实验室南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心南京210023 国家中医药管理局中药炮制传承基地南京210023

目的:研究天南星科有毒中药天南星凝集素蛋白(AEL)的致炎机制及炮制对蛋白的影响。方法:通过体外培养RAW264.7巨噬细胞,经不同浓度AEL刺激1h后,ELISA法检测炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的释放,Western blot... 详细信息

目的:研究天南星科有毒中药天南星凝集素蛋白(AEL)的致炎机制及炮制对蛋白的影响。方法:通过体外培养RAW264.7巨噬细胞,经不同浓度AEL刺激1h后,ELISA法检测炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的释放,Western blot法检测p-IκB、IκB、p-p65、p65蛋白的表达,倒置荧光显微镜及荧光酶标仪检测细胞内活性氧(ROS)、线粒体膜电位及胞内游离钙离子水平;加入ROS的阻断剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)后,采用ELISA和Western blot法检测TNF-α、IL-1β及p-IκB、IκB、p-p65、p65蛋白表达的变化。采用8%白矾溶液炮制AEL,ELISA法检测炮制前后炎性因子TNF-α、IL-1β释放的变化。结果:AEL刺激巨噬细胞可导致炎性因子TNF-α、IL-1β大量释放,促进p-IκB、p-p65水平升高,导致巨噬细胞中ROS水平升高,线粒体膜电位降低以及胞内游离钙离子水平升高。当加入ROS的阻断剂NAC后,可明显降低ROS的生成,同时抑制了IκB、p65的磷酸化以及炎性因子TNF-α、IL-1β的大量释放。AEL经8%白矾溶液炮制后,能显著降低巨噬细胞炎性因子TNF-α、IL-1β的大量释放。结论:AEL刺激巨噬细胞后可诱导氧化应激,生成过量ROS,进而激活NF-κB炎性信号通路并导致炎性因子大量释放。AEL经白矾炮制后毒性降低,推测凝集素蛋白在白矾溶液中发生变性或降解,这可能是矾制天南星减毒的机制之一。

关键词：天南星凝集素炮制减毒炎性反应活性氧核因子-κB

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马钱子碱血药浓度测定方法的优化与应用

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中国中药杂志 2013年第7期38卷 1075-1078页

作者：王冬月陈军蔡宝昌南京中医药大学药学院江苏南京210046 江苏省中药炮制重点实验室南京中医药大学国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心国家中医药管理局中药炮制标准重点研究实验室江苏南京210046 南京海昌中药集团江苏南京210061

借助考察萃取溶剂、萃取次数、萃取剂体积对马钱子碱提取回收率的影响,马钱子碱血药浓度的HPLC测定方法得到了优化。筛选得到最优的血浆处理方法,即用氨水碱化后,用4mL的萃取剂正己烷-二氯甲烷-异丙醇65:30:5萃取2次。将马钱子碱血药浓... 详细信息

借助考察萃取溶剂、萃取次数、萃取剂体积对马钱子碱提取回收率的影响,马钱子碱血药浓度的HPLC测定方法得到了优化。筛选得到最优的血浆处理方法,即用氨水碱化后,用4mL的萃取剂正己烷-二氯甲烷-异丙醇65:30:5萃取2次。将马钱子碱血药浓度的测定方法应用于药动学研究,比较了静脉注射5mg·kg-1与经皮给药40mg·kg-1马钱子碱溶液后的药动学性质,结果得到马钱子碱静脉注射和经皮给药后的药动学均符合二室模型,经皮给药后的绝对生物利用度为18.72%。可见优化后的血药浓度分析方法可以满足马钱子碱药动学研究的需要。

关键词：马钱子碱 HPLC 药动学

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