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13 篇 传染性法氏囊病病...
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9 篇 猪

机构

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107 篇 江苏省农业科学院...
105 篇 江苏省农业科学院...
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25 篇 江苏省农业科学院...
21 篇 江苏省农业科学院...
19 篇 山西农业大学
14 篇 国家兽用生物制品...
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12 篇 江苏省动物重要疫...
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9 篇 江苏省农业科学院...
9 篇 南京师范大学
8 篇 江苏省农业科学院...
7 篇 农业农村部兽用生...
6 篇 江苏省农业科学院...
6 篇 中国农业科学院哈...
5 篇 江苏省农业科学院...
5 篇 江苏省农业科学院...

作者

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55 篇 刘宇卓
55 篇 茅爱华
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50 篇 李文良
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49 篇 江杰元
47 篇 李彬
47 篇 韩凯凯

语言

497 篇 中文

检索条件"机构=江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心"

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兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗(BAC-VP60株)的研制

兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗(BAC-VP60株)的研制

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：王芳薛家宾范志宇胡波魏后军宋艳华江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

引言目前,兔出血症组织灭活疫苗生产面临非免兔来源不足的问题,这严重地制约着疫苗的生产及养兔业的发展。我们通过分子生物学等技术构建了重组兔出血症病毒VP60杆状病毒(BAC-VP60株)。将该重组毒作为生产用毒种,进行了兔出血症病毒杆... 详细信息

引言目前,兔出血症组织灭活疫苗生产面临非免兔来源不足的问题,这严重地制约着疫苗的生产及养兔业的发展。我们通过分子生物学等技术构建了重组兔出血症病毒VP60杆状病毒(BAC-VP60株)。将该重组毒作为生产用毒种,进行了兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗(BAC-VP60株)的研制。材料与方法(1)毒种:制苗用重组兔出血症病毒VP60杆状病毒(BAC-VP60株)、检验用兔出血症病毒皖阜株由江苏省农业科学院兽医研究所构建及保存。(2)细胞:Sf9昆虫细胞由江苏省农业科学院兽医研究所保存。(3)毒种及细胞的鉴定及研究:对重组兔出血症病毒VP60杆状病毒(BAC-VP60株)、兔出血症病毒皖阜株以及生产用Sf9昆虫细胞进行传代,对它们进行全面的鉴定和研究。(4)实验室产品质量研究:实验室制备5批次疫苗,并对疫苗的安全性、免疫效力、免疫期、保存期等进行研究。(5)中试生产:按照疫苗的试行规程(草案)和质量标准,在疫苗生产企业进行中试生产。(6)临床试验:使用6批中间试制产品在6个规模化养兔场,对不同品种、不同日龄的家兔进行临床试验,通过疫苗注射后的临床观察、生产性能测定、攻毒保护等方法评估该疫苗的安全性及免疫效力。(7)新兽药注册申报:整理以上试验结果,撰写并递交兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗(BAC-VP60株)新兽药注册申请材料。结果与讨论(1)毒种及细胞的鉴定及研究:结果显示,疫苗毒传代稳定、免疫原性良好;检验用毒种传代、毒力均稳定;生产用Sf9细胞传代稳定、无致瘤性。(2)实验室产品质量研究:结果显示,实验室产品对所有品种的家兔均安全;疫苗具有较好的免疫效力,免疫期可达7个月;产品在2～8℃保存,保存期至少为24个月。(3)中试生产:在疫苗生产企业进行中试生产,连续生产10批,共计约110万头份。(4)临床试验:结果显示,该产品对不同品种、不同日龄的家兔均安全;试验期间,将家兔取回实验室进行攻毒。结果显示,疫苗免疫7个月后,免疫家兔能抵抗强毒的攻击,达到100%的保护,对照兔至少死亡4只。(5)新兽药注册申报:递交兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗(BAC-VP60株)新兽药注册申请材料。目前,该疫苗已通过初审。结论兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗(BAC-VP60株)安全性好、免疫效力确实。由于采用细胞培养的方式获得抗原,生物安全性比组织灭活苗好,同时有利于规模化生产,产品质量易于控制。

关键词：杆状病毒载体兔出血症病毒灭活疫苗 BAC-VP60

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鹅坦布苏病毒非结构蛋白NS5的原核表达及特性分析

鹅坦布苏病毒非结构蛋白NS5的原核表达及特性分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：韩凯凯李银黄欣梅赵冬敏刘宇卓刘青涛谢星星安凤娇江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

本试验通过在大肠杆菌中表达鹅坦布苏病毒非结构蛋白NS5,对其纯化并进行特性分析。根据鹅坦布苏病毒JS804株非结构蛋白NS5基因序列,设计1对特异性引物,利用PCR技术扩增得到全长NS5基因序列,并将其定向克隆至原核表达载体pET32a中,获得... 详细信息

本试验通过在大肠杆菌中表达鹅坦布苏病毒非结构蛋白NS5,对其纯化并进行特性分析。根据鹅坦布苏病毒JS804株非结构蛋白NS5基因序列,设计1对特异性引物,利用PCR技术扩增得到全长NS5基因序列,并将其定向克隆至原核表达载体pET32a中,获得重组表达质粒pET32a-NS5,经双酶切鉴定及测序正确后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,获得NS5蛋白大肠杆菌表达株。经IPTG诱导表达,表达的重组融合蛋白最终经SDS-PAGE及westem-blotting鉴定。结果显示,NS5融合蛋白分子质量约为120kDa,在诱导后5 h达到表达量高峰,融合蛋白以包涵体形式存在,wester-blotting显示原核表达的蛋白可被鹅坦布苏病毒抗兔血清特异性识别,以NS5蛋白为抗原制备的多克隆抗体具有较高的敏感性与特异性。这些都为进一步开展关于鹅坦布苏病毒NS5蛋白的研究奠定了基础。

关键词：鹅坦布苏病毒 NS5蛋白原核表达

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RHDV VLPs单克隆抗体的制备及其识别表位的初步定位

RHDV VLPs单克隆抗体的制备及其识别表位的初步定位

引用

中国畜牧兽医学会养兔学分会成立大会暨第一届学术交流大会

作者：宋艳华胡波范志宇彭伟魏后军薛家宾徐为中王芳江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

为了筛选兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白(VP60)的特异性单抗,并进一步分析单抗识别表位的分布情况,本研究将重组杆状病毒rAcV-Bac-VP60接种Sf9昆虫细胞,收获细胞培养物,电镜观察显示重组VP60蛋白获得有效表达,并可组装成病毒样粒子(VLPs)。... 详细信息

为了筛选兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白(VP60)的特异性单抗,并进一步分析单抗识别表位的分布情况,本研究将重组杆状病毒rAcV-Bac-VP60接种Sf9昆虫细胞,收获细胞培养物,电镜观察显示重组VP60蛋白获得有效表达,并可组装成病毒样粒子(VLPs)。将RHDV VLPs作为免疫原与等量弗氏佐剂乳化,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经3次亚克隆后,获得11株能稳定分泌抗RHDV VLPs抗体的阳性杂交瘤细胞株。间接ELISA、IFA和Western blot鉴定结果表明,这11株单克隆抗体均能够特异地识别RHDV VLPs和天然RHDV。11株单抗均为IgG1,其中1D4和3F7的轻链为Lambda型,其余均为Kappa型。为鉴定单抗识别表位所针对的VP60蛋白的功能区,根据VP60功能区的划分,设计3个截短蛋白片段VP60-NTA、VP60-S和VP60-P,将编码3个功能区蛋白的基因序列克隆至pET-32a载体中,利用IPTG诱导融合的截短蛋白进行表达。将11株单抗分别与截短蛋白进行间接ELISA以及Western blot检测,结果显示,单抗5A3与VP60-NTA蛋白具有特异性反应,该单抗所识别的表位位于RHDVVP60的NTA区,单抗5F3与VP60-S蛋白具有特异性反应,该单抗所识别的表位位于RHDV VP60的S区,单抗1B8、1D4、3D11、3F7、4C2、4G2、5G2、5H3和632与VP60-P蛋白具有特异性反应,这9株单抗所识别的表位位于RHDV VP60的P区。本研究获得分别针对VP60 3个不同功能区的单抗,为RHDV VLPs抗原表位的鉴定和RHDV结构功能的研究奠定了基础,同时为PHDV的检测和新型疫苗研究提供物质基础。

关键词： RHDV VLPs 单克隆抗体表位初步定位

来源：评论

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RHDV VP60蛋白与受体HBGAs结合位点的初步分析

RHDV VP60蛋白与受体HBGAs结合位点的初步分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：李珊珊胡波宋艳华范志宇魏后军王芳江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

引言兔出血症是由免出血症病毒(RHDV)引起的高度致死性传染病。VP60是RHDV的主要结构蛋白,真核表达VP60能够形成与天然病毒类似的病毒样颗粒(VLPs),可作为研究该病毒的模型。组织血型抗原(HBGAs)是由O-或N-末端连接到蛋白或糖脂上的多糖... 详细信息

引言兔出血症是由免出血症病毒(RHDV)引起的高度致死性传染病。VP60是RHDV的主要结构蛋白,真核表达VP60能够形成与天然病毒类似的病毒样颗粒(VLPs),可作为研究该病毒的模型。组织血型抗原(HBGAs)是由O-或N-末端连接到蛋白或糖脂上的多糖,研究证实RHDV侵染机体时能够特异性识别HBGAs受体。本文通过VP60截短蛋白与HBGAs结合试验,分析受体的结合位点。材料与方法(1)蛋白样品:杆状病毒表达的VP60蛋白、大肠杆菌表达的VP60截短蛋白P250-350、P330-440、P470-579、P330-350和P559-579,均由本实验室表达。(2)H型HBGAs的检测:采集O型血志愿者的唾液并进行处理。利用血凝抑制试验筛选含H型HBGAs个体的唾液样品。(3)VP60与HBGAs结合试验:筛选最佳唾液包被浓度、VP60蛋白浓度、mAbs稀释度及酶标二抗稀释度。结合试验步骤:PBS稀释的唾液包被于酶标板上;封闭后加入VP60,mAbs 3D11为一抗;HRP标记羊抗鼠IgG为二抗;TMB显色,测定OD450nn。(4)截短蛋白与HBGAs结合试验:将VP60和截短蛋白进行SDS-PAGE,转印于NC膜上,以3D11为一抗,HRP标记羊抗鼠IgG为二抗,ECL显色。HBGAs结合试验:将VP60及截短蛋白分别按终浓度10μg/mL4μg/mL、2μg/mL、1μg/mL、0.5μg/mL稀释。HBGAs结合试验步骤按2.3操作。结果与讨论(1)唾液中HBGAs的测定:采集的O型人唾液原液能够完全抑制红细胞与抗H试剂的凝集,表明唾液样品为分泌O型。(2)SDS-PAGE和Westem-blot:VP60及截短蛋白SDS-PAGE电泳显示,在60ku、30ku、28ku左右处有明显条带,与预期大小一致。Westem-blot表明,VP60及截短蛋白均与相应的mAbs有特异性反应。(3)HBGAs结合试验:试验显示,VP60、截短蛋白P250-350、P330-440、P330-350与HBGAs结合反应均为阳性,且随蛋白浓度升高结合值升高;而P470-579、P559-579与HBGAs结合的值与空白对照无差异,说明不与HBGAs结合。结论本研究成功建立了VP60与唾液中HBGAs受体结合的方法,并对VP60截短蛋白进行分析,最终获得330-350aa是VP60与HBGAs受体结合的关键区域之一。该研究有助于了解病毒与宿主相互作用的机制,为病毒的吸附、感染及抗病毒药物的研究奠定基础。

关键词： RHDV VP60 HBGAs 受体结合结合位点初步分析

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智能化生猪及产品安全质量管理创新体系构建

智能化生猪及产品安全质量管理创新体系构建

引用

中国猪业科技大会暨中国畜牧兽医学会2015年学术年会

作者：陆昌华胡肄农谭业平郁达威江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

利用智能感知、无线传感、智能控制等现代信息技术,进行现代养猪场"电子标识+自动饲喂+自动称重"及其产品的信息化管理,以保障生猪及其产品安全。即通过RFID耳标识别与自动称重,可查询该种猪生产性能,是高产、中产、低产、还... 详细信息

利用智能感知、无线传感、智能控制等现代信息技术,进行现代养猪场"电子标识+自动饲喂+自动称重"及其产品的信息化管理,以保障生猪及其产品安全。即通过RFID耳标识别与自动称重,可查询该种猪生产性能,是高产、中产、低产、还是空怀?因个体差别而提供不同的饲喂量,既可满足个体需要,又能降低生产成本。一旦种猪离开食槽时,将在屏幕上显示食槽中还剩有的饲料?是否吃完?如

关键词：安全质量管理养猪场二维码体系构建

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一株H3N2亚型犬流感病毒的分离及其分子变异性分析

一株H3N2亚型犬流感病毒的分离及其分子变异性分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：王晓丽毕振威王永山潘群兴欧阳伟夏兴霞诸玉梅董晨红江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

为了解近期犬流感病毒的病原学特性及分子变异情况,2012年从南京地区宠物医院采集的20份犬鼻拭子中分离到1株犬流感病毒,命名为A/Canine/Nanjing/11/2012（H3N2）。该病毒分离株的血凝（HA）效价为2～8,鸡胚半数感染量(EID)和最小致死... 详细信息

为了解近期犬流感病毒的病原学特性及分子变异情况,2012年从南京地区宠物医院采集的20份犬鼻拭子中分离到1株犬流感病毒,命名为A/Canine/Nanjing/11/2012（H3N2）。该病毒分离株的血凝（HA）效价为2～8,鸡胚半数感染量(EID)和最小致死量平均死亡时间（MDT）分别为10/0.1mL和69.6 h/10。血凝素（HA）基因、神经氨酸酶（NA）基因和核蛋白基因（NP）的系统发育进化树均显示该病毒分离株位于禽流感病毒亚群中,并与H3N2亚型犬流感病毒辽宁分离株和黑龙江分离株位于同一分支上,具有最近的亲缘关系（HA基因的同源性为99.5%9.6%,NA基因的同源性为99.0%9.2%,NP基因的同源性为99.1%9.3%）。氨基酸序列分析显示,该病毒分离株与其他犬流感病毒分离株在HA基因、NA基因和NP基因氨基酸序列存在个别位点的突变。

关键词：犬流感病毒 H3N2亚型分离变异系统发育进化树

来源：评论

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动物及其产品风险预警系统的研发与应用

动物及其产品风险预警系统的研发与应用

引用

中国畜牧兽医学会信息技术分会第十届学术研讨会

作者：郁达威胡肄农谭业平陆昌华江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

针对我国动物源性产品质量安全问题,本文概述动物及其产品风险预警的重要作用。作者采用Visual *** 2008,面向对象程序设计思想的编程语言C#和.NET Framework3.5编程环境,研发了动物及其产品风险预警系统。系统利用计算机对不同的动物... 详细信息

针对我国动物源性产品质量安全问题,本文概述动物及其产品风险预警的重要作用。作者采用Visual *** 2008,面向对象程序设计思想的编程语言C#和.NET Framework3.5编程环境,研发了动物及其产品风险预警系统。系统利用计算机对不同的动物的养殖环境、疫病发生及动物产品在实际生产中的数据进行风险评估。通过3个实例的演示,将风险评估应用于畜牧生产实际。结果表明,系统简单易操作,覆盖面较广,数据采集较简易。可利用风险评估模型在养殖等相关环节控制动物及其产品的风险,减少经济损失,保障公众健康。

关键词：动物畜产品风险评估系统

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猪鼻支原体vlp家族重组蛋白的构建表达及黏附宿主细胞功能检测

猪鼻支原体vlp家族重组蛋白的构建表达及黏附宿主细胞功能检测

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：王佳熊祺琰纪燕倪博张必雄马庆红刘茂军冯志新邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

目的猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis)在临床猪场的感染率极高,可引起猪的多种慢性炎症,同时其与多种人类肿瘤具有相关性,属人兽共患性病原。目前对猪鼻支原体的黏附因子及致病机制等尚不清楚。本研究以猪鼻支原体表面的可变脂蛋白(vlp... 详细信息

目的猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis)在临床猪场的感染率极高,可引起猪的多种慢性炎症,同时其与多种人类肿瘤具有相关性,属人兽共患性病原。目前对猪鼻支原体的黏附因子及致病机制等尚不清楚。本研究以猪鼻支原体表面的可变脂蛋白(vlp)家族为研究对象,鉴定其对宿主细胞的黏附能力。材料与方法根据已公布的猪鼻支原体vlp家族7种成员的基因序列设计引物,扩增目的基因,并将该基因片段装入pET-32a(+)原核表达载体中构建重组表达质粒pET-32a(+)/vlp,质粒转化大肠杆菌,筛选获得阳性克隆。重组工程菌经IPTG诱导表达目的蛋白,经镍柱亲和层析获得7种纯化的vlp重组蛋白。利用间接免疫荧光法及微孔板定量法分别对vlp各个成员的黏附功能进行鉴定。结果与讨论成功构建了7种重组表达质粒pET-32a(+)/vlp,获得阳性重组工程菌。经IPTG诱导及镍柱亲和层析纯化,获得了较纯的7种vlp重组蛋白。间接免疫荧光检测结果显示,vlpA、vlpB、vlpC蛋白黏附PK细胞最为明显;vlpE和vlpG蛋白亦有黏附,但荧光密度稍弱;vlpD及vlpF蛋白孵育孔与阴性对照孔及空白载体蛋白对照孔相比,无明显差异。微孔板黏附定量试验检测结果显示,重组蛋白vlpA、vlpB、vlpC、vlpE、vlpG可明显黏附PK细胞并呈现剂量依赖性;重组蛋白vlpD粘附力较低,但在蛋白浓度12.5～50μg/ml之间,粘附强度有所上升,具有统计学差异;重组蛋白vlpF与空白载体蛋白对照相比粘附能力不明显,该结果与间接免疫荧光检测结果基本一致;在STEC细胞中,7种Vlp重组蛋白对细胞的黏附均有统计学差异,并有明显剂量依赖性。重组vlpD和vlpF对STEC细胞的粘附强于其对PK细胞的粘附。结论本研究成功构建了猪鼻支原体7种vlp的重组蛋白,并对其黏附功能进行了初步鉴定,证明vlp为猪鼻支原体的黏附因子之一。

关键词：猪鼻支原体重组蛋白宿主细胞 vlp 功能检测

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山羊副流感病毒3型JS2013株对豚鼠的致病性

山羊副流感病毒3型JS2013株对豚鼠的致病性

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：郝飞王鈡毓李文良毛立杨蕾蕾张纹纹江杰元江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

引言/目的呼吸道疾病是危害养羊业尤其是圈舍养羊的重要疫病之一,给养羊业带来巨大的经济损失。副流感病毒3型（PIV3）属于副黏病毒科呼吸道病毒属,是人和动物呼吸道重要病原。2014年本实验室从表现为严重呼吸道症状的山羊临床病料中首... 详细信息

引言/目的呼吸道疾病是危害养羊业尤其是圈舍养羊的重要疫病之一,给养羊业带来巨大的经济损失。副流感病毒3型（PIV3）属于副黏病毒科呼吸道病毒属,是人和动物呼吸道重要病原。2014年本实验室从表现为严重呼吸道症状的山羊临床病料中首次成功分离鉴定出山羊副流感病毒3型（Caprine parainfluenza virus type 3,CPIV3）,通过基因组测序,病原学特性研究证实其不同于其他PIV3,随后通过人工感染试验证明了该病毒对山羊的致病性。PIV3广泛存在于自然界,可引起各年龄阶段儿童或幼龄哺乳动物发病,导致小儿或幼龄动物轻重不等的呼吸道感染,如感冒、咳嗽、重症喉气管支气管炎、毛细支气管炎和肺炎。已有研究报道豚鼠作为动物模型研究人副流感病毒3型和牛副流感病毒3型感染后呼吸道反应性和气道炎症,因此本研究使用豚鼠研究CPTV3 JS2013株的致病性。材料方法通过豚鼠鼻内接种CPIV3(10TCID只),观察接毒后豚鼠产生的临床症状,通过病毒血症、病理组织学变化及HI抗体检测综合分析CPIV3 JS2013在豚鼠体内的复制及机体组织病理损伤等情况,借此评价此病毒对豚鼠的致病性。结果与讨论滴鼻感染阴性豚鼠后,普遍出现精神倦怠、食欲减退和不喜走动的症状,在3-7天检出病毒血症,在2-14天表现明显的流鼻涕、打喷嚏和眼分泌物增多及腹式呼吸的临床症状,并伴有较高的死亡率。感染后可从3-14天的肺组织中检出病毒。剖检观察感染组豚鼠,豚鼠肺出现实变和肿大的症状,病理组织学观察鉴定发现感染组豚鼠肺组织出现肺泡间隔增宽、肺泡融合、炎性细胞浸润等变化,但随着感染时间的增长,感染组实验豚鼠的肺部组织病变逐渐减轻。HI试验表明豚鼠感染此病毒后第3天开始出现血凝抑制抗体,21天后血凝抑制抗体仍保持较高的水平,血凝抑制效价集中在1/16～1/64。结论本研究首次证明了CPIV3 JS2013株对豚鼠具有致病性,豚鼠感染后,可产生明显的呼吸道症状,死亡率很高。并导致肺组织出现严重的病理变化,同时产生病毒血症,刺激机体的特异性免疫反应。本研究证明豚鼠可作为山羊副流感病毒3型理想的实验动物感染模型,为今后进一步研究CPIV3感染过程和致病性提供依据。

关键词：病毒血症临床症状 PIV 副流感病毒呼吸道症状 JS2013

来源：评论

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兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗(BAC-VP60株)的研制

兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗(BAC-VP60株)的研制

引用

第五届（2015）中国兔业发展大会

作者：王芳薛家宾范志宇胡波魏后军宋艳华江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

目前,兔出血症组织灭活疫苗生产面临着非免兔来源不足的问题,这严重地制约着疫苗的生产及养兔业的发展。我们通过分子生物学等技术构建了重组兔出血症病毒VP60杆状病毒(BAC-VP60株)。将该重组毒作为生产用毒种,以兔出血症病毒皖阜株作... 详细信息

目前,兔出血症组织灭活疫苗生产面临着非免兔来源不足的问题,这严重地制约着疫苗的生产及养兔业的发展。我们通过分子生物学等技术构建了重组兔出血症病毒VP60杆状病毒(BAC-VP60株)。将该重组毒作为生产用毒种,以兔出血症病毒皖阜株作为检验用毒种,进行了兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗(BAC-VP60株)的研制。首先,我们对重组兔出血症病毒VP60杆状病毒(BAC-VP60株)、兔出血症病毒皖阜株以及生产用Sf9昆虫细胞进行了传代,并对它们进行了全面的鉴定和研究。结果显示,疫苗毒传代稳定、免疫原性良好;检验用毒种传代、毒力均稳定;生产用Sf9细胞传代稳定、无致瘤性。其次,通过生产工艺研究,确定了细胞的适用培养基、初始浓度、接毒剂量、收获时间以及培养方式。在以上研究基础上,实验室制备了5批次疫苗,并对疫苗产品的安全性、免疫效力、免疫期、保存期等进行了研究。结果显示,实验室产品对所有品种的家兔均安全;疫苗具有较好的免疫效力,免疫期(免疫持续期)可达7个月;产品在2～8℃保存,保存期至少为24个月。接下来,在疫苗生产企业进行中试生产,连续生产10批,共计约110万头份。使用6批中间试制产品在江苏、山东、浙江省内的6个规模化养兔场,对不同品种、不同日龄的家兔进行临床试验,通过疫苗注射后的临床观察、生产性能测定、攻毒保护等方法评估该疫苗的安全性及免疫效力。试验结果显示,该产品对不同品种、不同日龄的家兔均安全;在使用该疫苗期间,所有养殖场均未发生兔出血症疫情,实验结束后,将家兔取回实验室进行攻毒。结果显示,疫苗免疫7个月后,免疫家兔能抵抗强毒的攻击,达到100%的保护,对照兔至少死亡4只。临床试验结束后,我们递交了兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗(BAC-VP60株)新兽药注册申请材料。目前,该疫苗已通过初审。

关键词：兔出血症病毒杆状病毒生产工艺安全性免疫效力、免疫期、保存期

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