检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2016年第4期32卷 338-343页

作者：纪燕熊祺琰王佳张必雄倪博马庆红冯志新刘茂军邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 金宇保灵生物药品有限公司呼和浩特010030

目的本研究以猪鼻支原体表面的可变脂蛋白(vlp)家族为研究对象,鉴定其各成员对宿主细胞的黏附能力。方法根据已公布的猪鼻支原体vlp家族7种成员的基因序列设计引物,构建重组表达质粒pET-32a(+)/vlp,筛选获得阳性克隆。重组工程菌经IPTG... 详细信息

目的本研究以猪鼻支原体表面的可变脂蛋白(vlp)家族为研究对象,鉴定其各成员对宿主细胞的黏附能力。方法根据已公布的猪鼻支原体vlp家族7种成员的基因序列设计引物,构建重组表达质粒pET-32a(+)/vlp,筛选获得阳性克隆。重组工程菌经IPTG诱导表达目的蛋白,经镍柱亲和层析获得7种纯化的vlp重组蛋白。利用间接免疫荧光法及微孔板定量法分别对vlp各个成员的黏附功能进行鉴定。结果成功构建了7种重组表达质粒pET-32a(+)/vlp,获得阳性重组工程菌。经IPTG诱导及镍柱亲和层析纯化,获得了较纯的7种vlp重组蛋白。间接免疫荧光及微孔板黏附定量试验检测结果显示,重组蛋白vlpA、vlpB、vlpC、vlpE、vlpG可黏附PK细胞,而重组vlpD和vlpF蛋白黏附能力不明显。结论本研究成功构建了猪鼻支原体7种vlp的重组蛋白,并对其黏附功能进行了初步鉴定,证明部分vlp属于猪鼻支原体的黏附因子。

关键词：猪鼻支原体可变脂蛋白细胞黏附

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猪圆环病毒2型体外刺激3D4/21猪肺泡巨噬细胞的炎症相关细胞因子mRNA转录分析

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西南农业学报 2016年第5期29卷 1225-1228页

作者：汪伟王小敏何孔旺温立斌倪艳秀江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

通过PCV2病毒感染3D4/21猪肺泡巨噬细胞后炎症相关细胞因子mRNA转录水平变化,探讨PCV2感染后可能的致病途径。通过PCV2病毒体外接种3D4/21细胞,感染不同时间后,收集样品,采用荧光定量PCR方法检测细胞因子IL-1β、IL-8及IL-18mRNA转录水... 详细信息

通过PCV2病毒感染3D4/21猪肺泡巨噬细胞后炎症相关细胞因子mRNA转录水平变化,探讨PCV2感染后可能的致病途径。通过PCV2病毒体外接种3D4/21细胞,感染不同时间后,收集样品,采用荧光定量PCR方法检测细胞因子IL-1β、IL-8及IL-18mRNA转录水平的变化。结果显示PCV2对3D4/21细胞的IL-1β、IL-8转录主要起抑制作用,对IL-8转录起促进作用。推测其在体内的综合效应导致感染早期机体抗病毒能力降低,引起机体免疫抑制,影响机体特异性免疫应答的正常运转,为PCVD的发病创造了条件。

关键词：猪圆环病毒2型猪肺泡巨噬细胞炎症相关细胞因子荧光定量PCR

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山羊副流感病毒3型人工感染山羊的致病性

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中国兽医学报 2016年第12期36卷 2101-2105页

作者：郝飞李文良毛立杨蕾蕾张纹纹江杰元江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了明确新分离的山羊副流感病毒3型（CPIV3）JS2013株的致病性，本试验采用动物感染试验的方式研究该病毒在本属动物体内的复制、排毒以及组织病理损伤等情况。通过病毒血症、临床症状、病理组织学检测、HI抗体及中和抗体检测综合分析... 详细信息

为了明确新分离的山羊副流感病毒3型（CPIV3）JS2013株的致病性，本试验采用动物感染试验的方式研究该病毒在本属动物体内的复制、排毒以及组织病理损伤等情况。通过病毒血症、临床症状、病理组织学检测、HI抗体及中和抗体检测综合分析病毒对山羊的致病性。结果表明，攻毒后的山羊出现以喷嚏、咳嗽、流鼻涕、眼分泌物增多以及呼吸困难为主的临床症状；攻毒后1d即可检出病毒血症，持续到攻毒后7d，且从攻毒后1～7d可以从鼻拭子中检测到排毒。剖检观察攻毒组山羊肺组织出现增生实变、肿大，组织病理学检测发现肺组织出现肺泡间隔增宽、肺泡结构消失、炎性细胞浸润等变化。HI和中和试验表明，山羊感染后7d开始出现血凝抑制抗体，14d出现中和抗体，并持续升高至28d。以上结果证实CPIV3JS2013株对山羊具有较强的致病性，为后续研究奠定基础。

关键词：山羊副流感病毒3型(CPIV3) JS2013株人工感染山羊

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稳定表达猪Viperin的PK-15细胞系的构建与鉴定

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江苏农业学报 2016年第1期32卷 128-132页

作者：李文良毛立杨蕾蕾郝飞张纹纹江杰元江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了探讨先天免疫效应因子Viperin的抗病毒作用,从猪外周血单核细胞中成功扩增了猪Viperin基因完整阅读框,克隆到真核表达载体p EGFP-C1中构建重组表达质粒p EGFP-Vi。阳性质粒经PCR、酶切和测序鉴定后通过脂质体Lipofectamine 2000介... 详细信息

为了探讨先天免疫效应因子Viperin的抗病毒作用,从猪外周血单核细胞中成功扩增了猪Viperin基因完整阅读框,克隆到真核表达载体p EGFP-C1中构建重组表达质粒p EGFP-Vi。阳性质粒经PCR、酶切和测序鉴定后通过脂质体Lipofectamine 2000介导转染PK-15细胞,荧光显微镜观察发现融合蛋白质EGFP-Viperin定位于细胞质中,不同于对照质粒EGFP在细胞中的均匀分布。共聚焦检测结果表明,重组蛋白质主要定位于细胞的内质网上。Western blot检测结果表明,猪Viperin蛋白质在PK-15细胞中以融合蛋白质的形式稳定表达,分子量约为7.0×104。

关键词：猪 Viperin PK-15细胞系表达

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某进口原种猪场仔猪猪瘟首免日龄的确定与分析

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江苏农业科学 2016年第6期44卷 354-356页

作者：赵永前孙华伟张敬峰茅爱华江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为探索适合于猪场实际需要的仔猪猪瘟首免日龄,利用IDEXX公司的试剂盒,对安徽省某进口原种猪场第1批产仔母猪所产的6窝仔猪进行猪瘟抗体消退规律的跟踪监测。结果显示:仔猪45日龄时的猪瘟水平符合IDEXX公司推荐的"在仔猪猪瘟抗体... 详细信息

为探索适合于猪场实际需要的仔猪猪瘟首免日龄,利用IDEXX公司的试剂盒,对安徽省某进口原种猪场第1批产仔母猪所产的6窝仔猪进行猪瘟抗体消退规律的跟踪监测。结果显示:仔猪45日龄时的猪瘟水平符合IDEXX公司推荐的"在仔猪猪瘟抗体阳性率降至50%~60%、阻断率平均值降至40%~50%时对仔猪进行猪瘟疫苗的首免,在首免后4周进行二免"的仔猪猪瘟免疫方案中的猪瘟首免的条件,遂按上述方案对此批仔猪进行猪瘟疫苗的免疫。此批仔猪105日龄时的猪瘟抗体阳性率为93.8%,阻断率平均值为73%,抗体离散度为15.1%;同时,该猪场育种中心的记录显示:此批仔猪从出生到出栏全程育成率为97.1%,100 kg体质量时的日龄为143~157 d,2个指标均明显高于国内的平均水平。表明本次确定的仔猪猪瘟首免日龄是科学的,但仍有进一步提升的空间。试验为国内进口种猪场仔猪猪瘟免疫程序的制定提供了科学参考。

关键词：进口原种猪猪瘟抗体首免日龄检测分析

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兔肝细胞中与RHDV VP60 P2亚区相互作用蛋白质的筛选和初步鉴定

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畜牧兽医学报 2016年第3期47卷 549-558页

作者：李腾姜平王芳宋艳华胡波范志宇魏后军仇汝龙刘星南京农业大学动物医学院南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60P2亚区在病毒感染宿主细胞过程中可能起重要作用,为找寻RHDV靶细胞——兔肝细胞中与P2亚区相互作用的蛋白质,以原核表达的P2蛋白为诱饵蛋白质,通过免疫共沉淀试验(Co-IP)结合质谱分析筛选与之有相互作用... 详细信息

兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60P2亚区在病毒感染宿主细胞过程中可能起重要作用,为找寻RHDV靶细胞——兔肝细胞中与P2亚区相互作用的蛋白质,以原核表达的P2蛋白为诱饵蛋白质,通过免疫共沉淀试验(Co-IP)结合质谱分析筛选与之有相互作用的肝细胞蛋白质。经分析选取层黏连蛋白受体(LamR)蛋白做进一步研究。提取兔肝细胞总RNA,反转录扩增LamR基因,将其插入pGEX-6p-1载体,经IPTG诱导表达,获得GST-LamR融合蛋白,并通过GST pull-down试验验证LamR蛋白与P2蛋白的结合。结果显示,以P2蛋白为诱饵蛋白质,免疫共沉淀试验结合质谱分析共筛选到26个与P2存在相互作用的肝细胞蛋白质,其中LamR蛋白是多种病毒的受体。通过原核表达系统表达了LamR蛋白,经pull-down试验验证了LamR蛋白与P2蛋白有直接的相互作用。本研究证实兔肝细胞LamR蛋白与RHDV VP60P2蛋白的相互作用,为深入研究RHDV的感染过程、揭示RHDV的致病机制提供了线索。

关键词：兔出血症病毒(RHDV) VP60P2亚区免疫共沉淀层黏连蛋白受体(LamR)

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猪圆环病毒2型重组病毒ZJ-R感染性克隆的构建

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华中农业大学学报 2016年第2期35卷 97-100页

作者：温立斌张丹何孔旺解建平董美响江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 河北省饲料工业协会石家庄050021

利用无缝克隆方法构建ZJ-R全长基因组的单拷贝分子克隆以及双拷贝串联分子克隆;通过生物信息学技术预测ZJ-R病毒结构蛋白的B细胞抗原表位,人工合成选定的表位肽,然后偶联KLH免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体;免疫组化试验证实该多抗与转... 详细信息

利用无缝克隆方法构建ZJ-R全长基因组的单拷贝分子克隆以及双拷贝串联分子克隆;通过生物信息学技术预测ZJ-R病毒结构蛋白的B细胞抗原表位,人工合成选定的表位肽,然后偶联KLH免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体;免疫组化试验证实该多抗与转染PK15细胞的ZJ-R双拷贝串联分子克隆具有反应性。结果表明构建的ZJ-R双拷贝串联分子克隆具有感染性。

关键词：猪圆环病毒2型重组病毒ZJ-R 无缝克隆 B细胞表位肽抗体感染性克隆

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家兔出血症病毒VP60基因特异性噬菌体展示肽库的构建及鉴定

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中国兽医科学 2016年第12期46卷 1511-1517页

作者：左园园宋艳华姜平王芳胡波范志宇魏后军薛家宾仇汝龙徐为中南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

本研究旨在构建家兔出血症病毒VP60基因特异性噬菌体展示肽库,并选用已知表位序列的单克隆抗体对VP60基因特异性肽库进行鉴定,以确定所构建肽库的特异性和丰富性。利用DNA酶Ⅰ随机消化法构建VP60基因噬菌体随机肽库。采用生物淘选和噬... 详细信息

本研究旨在构建家兔出血症病毒VP60基因特异性噬菌体展示肽库,并选用已知表位序列的单克隆抗体对VP60基因特异性肽库进行鉴定,以确定所构建肽库的特异性和丰富性。利用DNA酶Ⅰ随机消化法构建VP60基因噬菌体随机肽库。采用生物淘选和噬菌体原位杂交技术,选用1B8、1D4、5H3和A3C 4株纯化的单克隆抗体对该肽库进行抗原表位的鉴定。结果显示,所构建多肽库的滴度约为2.6×1012 PFU/m L,能够满足鉴定VP60蛋白的抗原表位的要求,同时鉴定到4条与VP60蛋白高度同源的序列,分别为N(326)PISQV(331)、D(338)MSFV(342)、K(562)STLVFNL(569)和G(25)TTTDGMDPGVVAA(38),与已知单抗所对应的表位序列高度同源。本研究成功构建了家兔出血症病毒VP60基因特异性随机肽库,选用已知表位序列的单克隆抗体对构建的肽库进行鉴定,鉴定到的表位与目前已经报道的单抗针对的表位序列高度同源,表明所构建肽库的特异性和丰富性良好,为进一步筛选和丰富VP60抗原表位奠定基础,还可用于VP60与受体结合域的鉴定,对阐述RHDV的感染、致病和免疫保护机制具有重要意义。

关键词：家兔出血症病毒 VP60基因特异性噬菌体展示肽库

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华东地区传染性法氏囊病病毒流行株的分离及其生物学特性分析

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中国兽医科学 2016年第5期46卷 550-557页

作者：梅永杰王永山欧阳伟潘群兴孟凯王晓丽夏兴霞诸玉梅董晨红毕振威王晶宇吴红玲姚火春南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了解华东地区近年来传染性法氏囊病病毒(IBDV)的遗传变异现状,从该地区近三年来IBD疫苗免疫失败鸡群中分离到7株IBDV,遂被命名为J3、A4、S8、S9、A11、S14和J17。这7株IBDV均能直接适应于鸡胚培养,但对CEF、DF-1以及DF-EGFP-mi R-9三... 详细信息

为了解华东地区近年来传染性法氏囊病病毒(IBDV)的遗传变异现状,从该地区近三年来IBD疫苗免疫失败鸡群中分离到7株IBDV,遂被命名为J3、A4、S8、S9、A11、S14和J17。这7株IBDV均能直接适应于鸡胚培养,但对CEF、DF-1以及DF-EGFP-mi R-9三种细胞的适应性和细胞培养中的病毒效价有显著差异,较易适应于DF-EGFP-mi R-9细胞,A11毒株在DF-EGFP-miR-9细胞中的TCID_(50)高达1×10^(11)/0.1m L。用第3代鸡胚毒分别感染6周龄SPF雏鸡,均表现出临床症状和死亡情况,发病率为100%,死亡率在50%~70%之间,而用第20代细胞毒感染的SPF雏鸡,均未出现临床症状和死亡情况。将这7株IBDV分离毒VP2基因全长序列进行同源性分析,核苷酸和编码氨基酸序列的同源性分别为97.4%~99.6%和98.7%~99.8%。遗传进化分析显示,这7株IBDV分离毒均属于血清Ⅰ型,分布在三个相对独立的超强毒力IBDV(vvIBDV)分枝中。VP2特征性氨基酸位点分析,在第222、242、253、256、279、284、299、330、451位的氨基酸残基分别是A(S14毒株为L)、I、Q、I、D、A、S、S和L,位于第326~332位的七肽基序为SWSASGS,均具有IBDV强毒株的特征性氨基酸序列。在VP2基因高变区的第一个亲水区,J17毒株有212N,S14毒株有222L,不同于其他强毒株或弱毒株。上述研究结果表明,近年来在华东地区IBD免疫失败的鸡群中流行着超强毒力vv IBDV,毒株的生物学特性有明显差异,毒株的来源比较复杂,这对于IBD的防控面临着新挑战。

关键词：传染性法氏囊病病毒(IBDV) 超强毒力传染性法氏囊病病毒(vv IBDV) 病毒分离生物学特性 VP2基因序列分析

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山羊副流感病毒3型HN蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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中国兽医科学 2016年第4期46卷 436-441页

作者：周天赐毛立李文良郝飞魏建忠江杰元安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036 江苏省农业科学院兽医研究所农业部生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为制备山羊副流感病毒3型（caprine parainfluenza virus type 3,CPIV3）HN蛋白单克隆抗体,将CPIV3 HN基因1081～1725 bp片段（编码361～574 aa）克隆入原核表达载体p ET-32a（＋）,构建重组表达质粒p ET-32a（＋）-HN361-574 aa,转化... 详细信息

为制备山羊副流感病毒3型（caprine parainfluenza virus type 3,CPIV3）HN蛋白单克隆抗体,将CPIV3 HN基因1081～1725 bp片段（编码361～574 aa）克隆入原核表达载体p ET-32a（＋）,构建重组表达质粒p ET-32a（＋）-HN361-574 aa,转化至大肠杆菌Rosetta（BL21）感受态细胞并进行诱导表达,分别用SDS-PAGE和Western-blot鉴定重组表达蛋白。结果表明,CPIV3 HN蛋白361～574 aa片段被正确表达。用两段截短的HN蛋白混合免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾与骨髓瘤细胞SP2/0融合制备单克隆抗体,分别用间接ELISA、Western-blot和IFA筛选和鉴定融合细胞上清。通过筛选获得3株杂交瘤细胞,分别命名为3F1、4A7、4H4,进一步研究表明,这3种单克隆抗体至少识别2个不同的抗原表位。本研究为CPIV3病原学检测方法的建立以及病理学诊断奠定了重要的基础。

关键词：山羊副流感病毒3型 HN蛋白单克隆抗体鉴定 IFA

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