检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2013年第5期44卷 767-771页

作者：姚景霆冯志新刘茂军熊祺琰白方方华利忠王海燕甘源韦艳娜邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 山西农业大学动物科技学院太谷030801

为了研究猪感染猪肺炎支原体早期,呼吸道针对病原不同功能蛋白分泌特异性IgA抗体的差异与规律,本研究通过已建立的猪肺炎支原体各蛋白的特异性IgA间接ELISA方法,分别检测7头试验猪在感染后第1、2、4、6、8、12、16和21天鼻拭子中抗P36、... 详细信息

为了研究猪感染猪肺炎支原体早期,呼吸道针对病原不同功能蛋白分泌特异性IgA抗体的差异与规律,本研究通过已建立的猪肺炎支原体各蛋白的特异性IgA间接ELISA方法,分别检测7头试验猪在感染后第1、2、4、6、8、12、16和21天鼻拭子中抗P36、P46、P97R1的特异性IgA抗体滴度,并经过样品总蛋白浓度校准后,比较3种特异性IgA抗体在感染后21d内的分泌规律。结果显示,在感染后第6天,呼吸道中抗猪肺炎支原体P36、P46、P97R1的3种特异性IgA抗体分泌量均开始上升,于感染后第12天达到高峰,并可持续到第21天,且同1d内3种特异性IgA抗体之间的分泌量差异不显著(P>0.05)。本研究说明在猪肺炎支原体感染的早期阶段,P36、P46、P97R1蛋白均可诱发猪呼吸道产生特异性IgA抗体,且分泌量与分泌规律较为相似,差异不显著。

关键词：猪肺炎支原体呼吸道 IgA 分泌规律

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兔肝细胞中与RHDV VP60 P2亚区相互作用蛋白质的筛选和初步鉴定

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畜牧兽医学报 2016年第3期47卷 549-558页

作者：李腾姜平王芳宋艳华胡波范志宇魏后军仇汝龙刘星南京农业大学动物医学院南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60P2亚区在病毒感染宿主细胞过程中可能起重要作用,为找寻RHDV靶细胞——兔肝细胞中与P2亚区相互作用的蛋白质,以原核表达的P2蛋白为诱饵蛋白质,通过免疫共沉淀试验(Co-IP)结合质谱分析筛选与之有相互作用... 详细信息

兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60P2亚区在病毒感染宿主细胞过程中可能起重要作用,为找寻RHDV靶细胞——兔肝细胞中与P2亚区相互作用的蛋白质,以原核表达的P2蛋白为诱饵蛋白质,通过免疫共沉淀试验(Co-IP)结合质谱分析筛选与之有相互作用的肝细胞蛋白质。经分析选取层黏连蛋白受体(LamR)蛋白做进一步研究。提取兔肝细胞总RNA,反转录扩增LamR基因,将其插入pGEX-6p-1载体,经IPTG诱导表达,获得GST-LamR融合蛋白,并通过GST pull-down试验验证LamR蛋白与P2蛋白的结合。结果显示,以P2蛋白为诱饵蛋白质,免疫共沉淀试验结合质谱分析共筛选到26个与P2存在相互作用的肝细胞蛋白质,其中LamR蛋白是多种病毒的受体。通过原核表达系统表达了LamR蛋白,经pull-down试验验证了LamR蛋白与P2蛋白有直接的相互作用。本研究证实兔肝细胞LamR蛋白与RHDV VP60P2蛋白的相互作用,为深入研究RHDV的感染过程、揭示RHDV的致病机制提供了线索。

关键词：兔出血症病毒(RHDV) VP60P2亚区免疫共沉淀层黏连蛋白受体(LamR)

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兔支气管败血波氏杆菌PRN基因缺失突变株的构建及特性研究

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畜牧兽医学报 2012年第2期43卷 299-305页

作者：李洪广王芳姜平范志宇胡波江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京农业大学动物医学院南京210095

利用自杀性质粒构建兔支气管败血波氏杆菌百日咳黏附素(PRN)缺失突变株以研究PRN在支气管败血波氏杆菌(Bb)致病机理中的作用,同时为支气管败血波氏杆菌病减毒活疫苗的研究提供理论依据。PCR扩增出PRN1(PRN上游基因)和PRN2(PRN下游基因)... 详细信息

利用自杀性质粒构建兔支气管败血波氏杆菌百日咳黏附素(PRN)缺失突变株以研究PRN在支气管败血波氏杆菌(Bb)致病机理中的作用,同时为支气管败血波氏杆菌病减毒活疫苗的研究提供理论依据。PCR扩增出PRN1(PRN上游基因)和PRN2(PRN下游基因)2个目的基因片段,运用基因重组技术将庆大霉素抗性基因(GM)连接到PRN1和PRN2之间,将连接好的基因片段克隆到pMEG-375自杀性载体中,构建自杀性载体pMEG375-PRN1-GM-PRN2,将其转化到宿主菌SM-10中,通过宿主菌SM-10与受体菌Bb固相滤膜交配,自杀性载体转移到受体菌,根据同源重组原理,抗性筛选得到基因缺失突变株,命名为Bb(△PRN)。对突变株Bb(△PRN)与野生株WT进行了遗传稳定性、生长特性、溶血特性、细胞黏附特性、毒力、免疫保护性等比较研究。结果表明:Bb(△PRN)具有遗传稳定性;与野生株相比,突变株生长速度较慢,毒力有所下降,溶血活性及对Hep-2细胞的黏附能力没有明显变化;小鼠免疫原性试验结果显示,突变株免疫小鼠后可以产生强有力的免疫力,能够抵抗野生株的攻击。Bb(△PRN)突变株构建成功并具有良好的免疫原性,为支气管败血波氏杆菌病减毒活疫苗的研究奠定了基础。

关键词：兔支气管败血波氏杆菌百日咳杆菌黏附素基因缺失生物学特性免疫原性

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猪圆环病毒2型重组病毒ZJ-R感染性克隆的构建

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华中农业大学学报 2016年第2期35卷 97-100页

作者：温立斌张丹何孔旺解建平董美响江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 河北省饲料工业协会石家庄050021

利用无缝克隆方法构建ZJ-R全长基因组的单拷贝分子克隆以及双拷贝串联分子克隆;通过生物信息学技术预测ZJ-R病毒结构蛋白的B细胞抗原表位,人工合成选定的表位肽,然后偶联KLH免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体;免疫组化试验证实该多抗与转... 详细信息

利用无缝克隆方法构建ZJ-R全长基因组的单拷贝分子克隆以及双拷贝串联分子克隆;通过生物信息学技术预测ZJ-R病毒结构蛋白的B细胞抗原表位,人工合成选定的表位肽,然后偶联KLH免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体;免疫组化试验证实该多抗与转染PK15细胞的ZJ-R双拷贝串联分子克隆具有反应性。结果表明构建的ZJ-R双拷贝串联分子克隆具有感染性。

关键词：猪圆环病毒2型重组病毒ZJ-R 无缝克隆 B细胞表位肽抗体感染性克隆

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应用噬菌体展示技术筛选兔出血症病毒抗原模拟表位

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畜牧兽医学报 2012年第8期43卷 1281-1286页

作者：杨廷亚王芳姜平胡波范志宇魏后军薛家宾江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京农业大学动物医学院南京210095

以抗兔出血症病毒(RHDV)的单克隆抗体A3c作为靶物质,应用噬菌体展示技术筛选RHDV抗原表位。将纯化的单抗A3c包被固相载体,经3轮亲和筛选后,挑取25株噬菌体单克隆并扩增,用ELISA测定后,提取阳性克隆单链DNA并测序,用阳性噬菌体克隆免疫... 详细信息

以抗兔出血症病毒(RHDV)的单克隆抗体A3c作为靶物质,应用噬菌体展示技术筛选RHDV抗原表位。将纯化的单抗A3c包被固相载体,经3轮亲和筛选后,挑取25株噬菌体单克隆并扩增,用ELISA测定后,提取阳性克隆单链DNA并测序,用阳性噬菌体克隆免疫小鼠制备高免血清,检测筛选抗原表位的免疫原性。结果表明:3轮亲和筛选后,特异性噬菌体克隆得到了有效富集,25株噬菌体单克隆中有19株为阳性克隆;测序结果表明,获得了与抗原高度同源的序列GTDDMDPGTTAA,即抗原的模拟表位,其中,氨基酸基序DXXDP为表位中的核心氨基酸;制备的小鼠高免血清与抗原具有较好的反应性,阳性噬菌体克隆与兔RHDV高免血清也具有较好的反应性。因此,该表位具有良好的免疫原性和反应原性。该研究为RHDV抗原表位的研究和新型疫苗的探索积累了资料。

关键词：兔出血症病毒单克隆抗体噬菌体展示技术模拟表位

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猪肺炎支原体P65基因原核表达及免疫原性分析

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畜牧兽医学报 2014年第2期45卷 262-267页

作者：刘茂军张悦杜改梅白昀王海燕姜平邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京农业大学动物医学院南京210095

P65蛋白是猪肺炎支原体的主要免疫优势蛋白,与其他支原体无交叉反应,常作为猪肺炎支原体检测的靶蛋白。本研究通过基因合成获得P65基因中含有3个稀有密码子的前922bp,利用PCR从Mhp168株扩增获得P65基因后段,然后通过重叠延伸PCR(SOE-PCR... 详细信息

P65蛋白是猪肺炎支原体的主要免疫优势蛋白,与其他支原体无交叉反应,常作为猪肺炎支原体检测的靶蛋白。本研究通过基因合成获得P65基因中含有3个稀有密码子的前922bp,利用PCR从Mhp168株扩增获得P65基因后段,然后通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)将前后段连接后,克隆入pET-32a(+)中,获得重组质粒pET-32a(+)/mhp P65,经IPTG诱导获得87ku的重组融合蛋白,Western blot分析表明其与Mhp血清呈强阳性反应。将该重组蛋白免疫小鼠获得了高滴度的特异性抗体,表明该蛋白具有良好的免疫原性。本研究成功表达了可溶性的Mhp P65融合蛋白,其具有较好的免疫原性,这为猪肺炎支原体P65蛋白的功能研究以及诊断学方法的建立和亚单位疫苗的研制提供了帮助。

关键词：猪肺炎支原体 P65基因原核表达免疫原性

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1株猪源乙型脑炎病毒株的免疫原性研究

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江苏农业科学 2015年第11期43卷 306-308页

作者：唐波张道华张雪花常晨刘国阳华涛侯继波江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心/江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014

将从江苏地区筛选出的1株增殖性能稳定猪源JEV JS01毒株作为疫苗,用毒株制备灭活疫苗进行免疫原性研究。试验采用经过细胞传代获得JEV JS01病毒液(1×10^(7.5)TCID50/m L),以甲醛灭活后加入油佐剂,制备猪源乙型脑炎灭活疫苗。腹腔免... 详细信息

将从江苏地区筛选出的1株增殖性能稳定猪源JEV JS01毒株作为疫苗,用毒株制备灭活疫苗进行免疫原性研究。试验采用经过细胞传代获得JEV JS01病毒液(1×10^(7.5)TCID50/m L),以甲醛灭活后加入油佐剂,制备猪源乙型脑炎灭活疫苗。腹腔免疫9~12 g小鼠,攻毒保护结果显示对照组小鼠全部死亡,免疫组90%以上健活。分别肌肉注射免疫仔猪及后备母猪,不同时间采集血清测定JEV ELISA抗体。检测结果显示,免疫后试验猪血清抗体效价较免疫前均有显著提高,后备母猪免疫8个月后抗体仍全部为阳性,抗体水平与免疫剂量呈正相关性。试验表明该猪源乙脑病毒JS01毒株具有良好的免疫原性,可以用作疫苗用毒株。

关键词：猪源乙型脑炎病毒免疫原性灭活疫苗

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猪肺炎支原体P216基因片段的表达及黏附活性研究

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畜牧兽医学报 2012年第8期43卷 1324-1329页

作者：杜海霞刘茂军冯志新熊祺琰白方方王海燕邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京农业大学动物医学院南京210095

本研究旨在研究猪肺炎支原体P216蛋白的黏附活性并初步建立猪肺炎支原体蛋白黏附模型。根据软件分析和文献报道从P216全基因中选取亲水性、抗原性、黏附性较好的目的片段,利用PCR从Mhp NJ株扩增P216基因片段,克隆到表达载体pET-32a(+)中... 详细信息

本研究旨在研究猪肺炎支原体P216蛋白的黏附活性并初步建立猪肺炎支原体蛋白黏附模型。根据软件分析和文献报道从P216全基因中选取亲水性、抗原性、黏附性较好的目的片段,利用PCR从Mhp NJ株扩增P216基因片段,克隆到表达载体pET-32a(+)中,获得重组质粒pET-32a(+)/P216,经IPTG诱导获得重组蛋白,通过Western blot和间接免疫荧光试验检测重组蛋白的免疫原性及黏附活性。结果表明,PCR扩增的目的基因大小为l 636bp;SDS-PAGE检测重组蛋白相对分子质量为80.1ku;Western blot检测表明重组蛋白能与Mhp阳性血清发生特异性反应;间接免疫荧光试验表明该蛋白对猪肺炎支原体黏附SJPL细胞产生占位抑制作用。结果提示,P216蛋白具有良好的黏附活性,能黏附SJPL细胞,从而为猪肺炎支原体其他黏附因子的研究奠定基础。

关键词：猪肺炎支原体 P216基因片段黏附活性

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山羊源副流感病毒3型JS2013株HN基因的原核表达与抗原性分析

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中国兽医科学 2015年第6期45卷 596-601页

作者：邓加武李文良毛立杨蕾蕾张纹纹魏建忠江杰元安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

参考GenBank中牛副流感病毒3型(BPIV3)内蒙古09株(NM09)全基因组序列(GenBank登录号:JQ063064),设计了1对特异性引物以扩增山羊源副流感病毒3型(PIV3)JS2013株HN基因部分序列;将扩增到的基因测序后进行同源性分析。同源性分析结果表明,... 详细信息

参考GenBank中牛副流感病毒3型(BPIV3)内蒙古09株(NM09)全基因组序列(GenBank登录号:JQ063064),设计了1对特异性引物以扩增山羊源副流感病毒3型(PIV3)JS2013株HN基因部分序列;将扩增到的基因测序后进行同源性分析。同源性分析结果表明,它与已报道的HPIV3、BPIV3 HN基因的序列同源性最高,分别为74.3%、79.8%。进化树分析表明,JS2013株并不属于HPIV3与BPIV3,形成一个独立的分支。将HN基因片段克隆至原核表达载体pET-32a(+),获得原核重组质粒pET-32a(+)-HN。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态菌株中,经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE与Western-blot试验分析表明,重组蛋白诱导表达成功,并以包涵体形式存在,大小为46ku。经Western-blot试验验证,重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备的超免疫血清能够与重组蛋白反应;把病毒接种给MDBK细胞后,间接免疫荧光试验表明重组蛋白的多克隆抗体与病毒产生特异性荧光反应,表明该重组蛋白具有很好的免疫原性和反应原性。本试验结果为山羊源副流感病毒3型感染诊断方法的建立和疫苗的研制奠定了基础。

关键词：山羊副流感病毒3型 HN基因原核表达抗原性分析

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巴氏杆菌糖酵解酶的免疫保护效应研究

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中国畜牧兽医 2021年第6期48卷 2188-2195页

作者：朱伟峰陈露王芳胡波阮智杨王高杰江苏省农业科学院兽医研究所南京210014 农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室南京210014 国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

本研究旨在评估巴氏杆菌糖酵解酶全部9个成员作为抗原对巴氏杆菌的免疫保护效应。通过PCR扩增出多杀性巴氏杆菌C51-17株糖酵解酶的基因并将其连接到pET-28a(+)质粒上。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)工程菌后进行过夜诱导表达,收集菌体... 详细信息

本研究旨在评估巴氏杆菌糖酵解酶全部9个成员作为抗原对巴氏杆菌的免疫保护效应。通过PCR扩增出多杀性巴氏杆菌C51-17株糖酵解酶的基因并将其连接到pET-28a(+)质粒上。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)工程菌后进行过夜诱导表达,收集菌体,超声破碎后取上清,纯化出巴氏杆菌糖酵解酶的重组蛋白。将巴氏杆菌糖酵解酶进行SDS-PAGE后转入PVDF膜上,孵育C51-17株感染康复血清,孵育二抗后进行ECL显色。将糖酵解酶免疫C57BL/6小鼠,待免疫组均产生高水平特异性抗体后使用C51-17株攻毒,比较各组存活率。测序结果显示,本研究成功将巴氏杆菌糖酵解酶全部9个成员的基因克隆到pET-28a(+)质粒上,经诱导表达和纯化成功获得了巴氏杆菌糖酵解酶的重组蛋白。Western blotting结果显示,磷酸葡萄糖异构酶(PGI)、丙糖磷酸异构酶(TPI)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GPD)、磷酸甘油激酶(PGK)、丙酮酸激酶(PYK)能与巴氏杆菌C51-17株感染康复血清反应。免疫保护力试验显示,PGI、醛缩酶(ALD)、GPD、PGK、磷酸甘油酸变位酶(PGM)、烯醇化酶(ENO)具有一定的免疫保护作用。本研究结果表明,巴氏杆菌糖酵解酶部分成员具有一定程度的免疫保护作用,为巴氏杆菌病防控研究提供了新的依据。

关键词：巴氏杆菌病多杀性巴氏杆菌糖酵解酶保护性抗原亚单位疫苗

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