检索结果-内蒙古大学图书馆

中国动物传染病学报 2019年第6期27卷 10-15页

作者：陈露朱伟峰魏后军仇汝龙胡波范志宇陈萌萌王芳江苏省农业科学院兽医研究所南京210014 农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室南京210014 国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

多杀性巴氏杆菌是危害多种畜禽和野生动物的重要病原并可造成人类发病。OmpH(包括OmpH1和OmpH2)是巴氏杆菌细胞壁中的一种主要外膜蛋白,过去对OmpH致病作用的研究主要集中于OmpH1,而有关OmpH2的报道较少。本研究对OmpH1和OmpH2一级结构... 详细信息

多杀性巴氏杆菌是危害多种畜禽和野生动物的重要病原并可造成人类发病。OmpH(包括OmpH1和OmpH2)是巴氏杆菌细胞壁中的一种主要外膜蛋白,过去对OmpH致病作用的研究主要集中于OmpH1,而有关OmpH2的报道较少。本研究对OmpH1和OmpH2一级结构进行了比较,发现OmpH2一级结构上具有多个与OmpH1高度相似的局部区域。采用原核表达系统表达了rOmpH2,进而开展了Western blot、Far Western blot和招募抑制实验。OmpH2与巴氏杆菌感染康复血清发生了特异性反应。OmpH2能够结合宿主Fn和Plg,而且OmpH2多克隆抗体能够显著抑制多杀性巴氏杆菌对Fn和Plg的黏附。本研究表明OmpH2能够在多杀性巴氏杆菌结合宿主Fn和Plg的过程中发挥作用,增加了多杀性巴氏杆菌毒力因子和分子致病机制的认识,对巴氏杆菌病防控具有重要意义。

关键词：多杀性巴氏杆菌 OmpH2 纤维连接蛋白血浆纤维溶解酶原

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黏膜抗体在疫苗免疫效力评价中的前景

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生物技术通报 2012年第2期28卷 41-47页

作者：张亚冯志新张道华刘茂军白方方王海燕邵国青江苏省农业科学院兽医研究所、农业部兽用生物制品工程技术重点实验室、国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京农业大学南京210095

简单介绍目前疫苗效力检验的方法、黏膜抗体的功能及其在实验室疫苗效果效力评价中的应用,提出了黏膜抗体作为疫苗免疫效力试验的替代指标或免疫监测的主要抗体的建议。

关键词：黏膜抗体 sIgA 免疫效力免疫监测

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猪弓形虫重组MIC3蛋白单克隆抗体的制备及其初步应用

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畜牧兽医学报 2013年第10期44卷 1622-1628页

作者：白昀王海燕王占伟纪燕吴叙苏刘冬霞邵国青江苏省农业科学院兽医研究所.农业部兽用生物制品工程技术重点实验室.国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京天邦生物科技有限公司南京211102 南京农业大学南京210095

为获得针对猪弓形虫MIC3蛋白的单克隆抗体,为进一步研制免疫金标试纸条提供材料,作者以纯化的重组MIC3蛋白免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备单克隆抗体(McAb)。经ELISA筛选阳性克隆和亚克隆建株,体内诱生腹水法制备McAb,测定其亚类、... 详细信息

为获得针对猪弓形虫MIC3蛋白的单克隆抗体,为进一步研制免疫金标试纸条提供材料,作者以纯化的重组MIC3蛋白免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备单克隆抗体(McAb)。经ELISA筛选阳性克隆和亚克隆建株,体内诱生腹水法制备McAb,测定其亚类、效价,进行Western blot分析,并利用胶体金颗粒标记的McAb制备免疫金标试纸条。成功制备了2株稳定分泌抗MIC3蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株B7和D3,2株McAb的免疫球蛋白亚类均为IgG2a,其ELISA腹水效价分别为1∶64万和1∶192万,Western blot结果表明,2株McAbs腹水均能分别与纯化的重组MIC3蛋白和猪弓形虫全虫蛋白中大小为56和38ku左右的蛋白发生特异性反应;用纯化后McAb标记的胶体金颗粒制备的免疫金标试纸条可以检测到最低浓度为4×104 CFU·mL-1的弓形虫速殖子。本研究为猪弓形虫病的现场诊断提供了有效的方法,显示出很好的临床应用前景。

关键词：岗地弓形虫 MIC3蛋白单克隆抗体胶体金

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鸭副粘病毒与H9亚型禽流感病毒双重PCR检测方法的初步建立

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东北农业大学学报 2011年第12期42卷 55-59页

作者：刘宇卓魏雪涛李银张敬峰江苏省农业科学院兽医研究所南京210014 农业部兽用生物制品工程技术重点实验室南京210014 国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

通过对GenBank发表的鸭副粘病毒(DPV)和鸭H9亚型禽流感病毒(AIV,H9)基因序列分析,针对保守区分别设计并合成2对特异性引物。通过对扩增条件的优化,建立了检测两种病毒的快速双重PCR方法。结果表明,该检测方法可同时扩增出DPV(363 bp)和H... 详细信息

通过对GenBank发表的鸭副粘病毒(DPV)和鸭H9亚型禽流感病毒(AIV,H9)基因序列分析,针对保守区分别设计并合成2对特异性引物。通过对扩增条件的优化,建立了检测两种病毒的快速双重PCR方法。结果表明,该检测方法可同时扩增出DPV(363 bp)和H9亚型AIV(732 bp)的特异性片段,而对照DHV、IBV、IBDV及SPF鸡胚尿囊液均未见条带。该方法具敏感性,对鸡胚感染尿囊液中两种病原核酸的检出率均为2 ng.μL。对保存不同时间的两种病毒及临床可疑病料均可检测到阳性条带。试验证明该方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性,可以用于临床样品的早期快速检测和鉴别诊断。

关键词：鸭副粘病毒 H9亚型禽流感双重RT—PCR 检测

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携带口蹄疫病毒B细胞表位的兔出血症病毒样颗粒的表达及其免疫原性研究

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华北农学报 2015年第1期30卷 142-149页

作者：盛蓉宋艳华胡波范志宇姜平薛家宾魏后军王芳江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为了研究RHDV病毒样粒子作为载体提呈外源B细胞表位的能力，以兔出血症病毒（ RHDV ）衣壳蛋白VP60为载体，构建携带FMDV B细胞表位（ FMDV VP1 B细胞表位200～213 aa ）的VP60嵌合蛋白，研究外源基因对VP60蛋白的表达、病毒样颗粒（ V... 详细信息

为了研究RHDV病毒样粒子作为载体提呈外源B细胞表位的能力，以兔出血症病毒（ RHDV ）衣壳蛋白VP60为载体，构建携带FMDV B细胞表位（ FMDV VP1 B细胞表位200～213 aa ）的VP60嵌合蛋白，研究外源基因对VP60蛋白的表达、病毒样颗粒（ VLPs）的装配及免疫原性的影响。分别在RHDV衣壳蛋白的C端、N端、306和307位氨基酸之间插入外源B细胞表位（ FMDV VP1 B细胞表位200～213 aa ），得到嵌合VP60基因。利用杆状病毒表达系统表达嵌合蛋白，分别命名为VP60-2F、VP60-306F和VP60-578F。经IFA、SDS-PAGE和Western Blot方法鉴定嵌合蛋白的表达，通过电镜观察嵌合蛋白自聚为病毒样颗粒的能力，通过动物试验研究其免疫原性。结果显示，嵌合VP60蛋白在杆状病毒表达系统中得到高效表达，可自聚形成病毒样颗粒，免疫小鼠后可以产生针对VP60和B细胞表位特异的免疫应答。该研究为嵌合VP60 VLPs的形成及结构功能的研究奠定基础，同时为RHDV-VLPs作为外源B细胞表位展示载体的可行性提供依据。

关键词：兔出血症病毒病毒样颗粒口蹄疫病毒 B细胞表位载体

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鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因密码子的优化及其在大肠杆菌中的表达

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中国兽医科学 2013年第3期43卷 271-276页

作者：潘群兴朱向东欧阳伟王晓丽夏兴霞毕振威诸玉梅董晨红王永山江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为了提高鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因在大肠杆菌中的表达量,分析近期引起安徽免疫失败IBD病例中分离的强毒分离株AH1株的VP2基因,发现有49个稀有密码子,其中编码Arg(R)的有16个,编码Gly(G)的有6个。编码精氨酸的AGG(AGA)2个稀有... 详细信息

为了提高鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因在大肠杆菌中的表达量,分析近期引起安徽免疫失败IBD病例中分离的强毒分离株AH1株的VP2基因,发现有49个稀有密码子,其中编码Arg(R)的有16个,编码Gly(G)的有6个。编码精氨酸的AGG(AGA)2个稀有密码子紧密相连(R区),另外还有2个相对比较集中的GGG密集区(G区)。根据大肠杆菌密码子使用频率对IBD强毒分离株(AH1株)VP2基因进行改造并合成优化基因,命名为mVP2。将mVP2基因分别克隆到pET-32a及pBV220原核表达质粒,构建了含密码子优化型IBDV VP2基因的原核表达质粒pET32-VP2和pBV220-VP2。SDS-PAGE结果显示,优化基因mVP2在大肠杆菌中的表达较野生型基因有十分显著的提高。Western-blot检测到目的蛋白能够与鸡抗IBDV超免疫血清反应。本研究为开展VP2基因结构与功能的深入研究及IBD免疫预防和快速诊断奠定了理论基础。

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒 VP2 密码子优化表达

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牛源大肠杆菌O157:H7的分离及毒力基因鉴定

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中国兽医学报 2012年第8期32卷 1148-1153页

作者：叶青张雪寒何孔旺费荣梅赵攀登栾晓婷江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

从2个牛场采集新鲜粪便,增菌后,免疫磁珠富集,涂布筛选性培养基,挑取可疑菌落用rfbE/fliC二重PCR和血清学方法鉴定。设计毒力基因stx1、stx2、eae、hlyA和tccp相应引物,针对O157:H7对分离株进行PCR鉴定。口服攻毒链霉素处理的BALB/c小... 详细信息

从2个牛场采集新鲜粪便,增菌后,免疫磁珠富集,涂布筛选性培养基,挑取可疑菌落用rfbE/fliC二重PCR和血清学方法鉴定。设计毒力基因stx1、stx2、eae、hlyA和tccp相应引物,针对O157:H7对分离株进行PCR鉴定。口服攻毒链霉素处理的BALB/c小鼠明确分离株致病性。结果显示,成功分离到7株出血性大肠杆菌O157:H7,并且有1株迟缓性发酵山梨醇麦康凯培养基。毒力基因检测显示,其中6株毒力因子表型为stx1-stx2+eae+hlyA+tccp+,另有1株表现型为stx1+stx2+eae+hlyA+tccp+,各分离株tccp基因均为阳性,但携带的重复片段数量有差异。所采集样品中肠出血性大肠杆菌O157:H7的检出率高达12%。1×1010 CFU同剂量口服接种经PBS洗涤的5株O157:H7分离株全菌,小鼠存活率有差异分别为40%,50%,60%,20%,50%,各分离株在小鼠体内排菌时间也有差异分别为攻毒后7,9,13,13,15d。

关键词：牛肠出血性大肠杆菌O157:H7 毒力基因致病性

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携带双串联卵清蛋白T细胞表位的嵌合兔出血症病毒衣壳蛋白自聚能力的研究

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华北农学报 2014年第1期29卷 55-61页

作者：张燕胡波宋艳华范志宇魏后军姜平王芳江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

以兔出血症病毒（ RHDV）衣壳蛋白VP60为载体,构建VP60携带双串联OVA T细胞表位（ Ovalbumin,卵清蛋白第257-264位氨基酸）的嵌合蛋白,研究外源基因对VP60蛋白表达及病毒样颗粒（ VLPs ）装配的影响,分析VP60作为载体对外源基因长度的... 详细信息

以兔出血症病毒（ RHDV）衣壳蛋白VP60为载体,构建VP60携带双串联OVA T细胞表位（ Ovalbumin,卵清蛋白第257-264位氨基酸）的嵌合蛋白,研究外源基因对VP60蛋白表达及病毒样颗粒（ VLPs ）装配的影响,分析VP60作为载体对外源基因长度的耐受性。运用基因克隆和重组技术,通过2次SOE法（ Splicing by overlap extension,重叠延伸剪接术）,将双串联OVA T细胞表位（257-264位氨基酸）的基因序列取代VP60第302-309位氨基酸的基因序列,得到嵌合VP60基因。利用杆状病毒表达系统表达嵌合蛋白,命名为DC。经 IFA、SDS-PAGE、Western Blot、RT-PCR方法鉴定嵌合蛋白的表达,并通过电镜观察嵌合蛋白自聚为病毒样颗粒的能力。嵌合VP60蛋白在杆状病毒表达系统中得到高效表达,且可自聚形成病毒样颗粒。携带双串联外源表位的嵌合VP60蛋白得到有效表达,并可形成VLPs。该研究为嵌合VP60 VLPs的形成、结构功能的研究奠定基础,同时扩展了VP60作为载体可携带的外源基因耐受性的研究资料。

关键词：兔出血症病毒 VP60 双串联OVAT细胞表位病毒样颗粒

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类猪圆环病毒P1的感染及其分子特征

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华北农学报 2013年第5期28卷 34-37页

作者：温立斌何孔旺王凤芝俞正玉茅爱华解建平江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学江苏南京210095

类猪圆环病毒P1是新发现的一种病原,能引起仔猪出现类似猪断奶后多系统衰竭综合征症状,是目前所知的具有最小基因组的病毒。为了解P1感染范围和基因组分子特征,采用PCR方法扩增P1全基因组,克隆测序后,应用生物信息学进行序列同源性比较... 详细信息

类猪圆环病毒P1是新发现的一种病原,能引起仔猪出现类似猪断奶后多系统衰竭综合征症状,是目前所知的具有最小基因组的病毒。为了解P1感染范围和基因组分子特征,采用PCR方法扩增P1全基因组,克隆测序后,应用生物信息学进行序列同源性比较及遗传进化分析。结果显示,P1已在我国猪场流行,分离株之间的核苷酸序列同源性为99.1%～100%,可分为2个亚分支;同时免疫组化结果也证实了P1在样品中的分布。

关键词：类猪圆环病毒P1 PCR 免疫组化分子特征

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猪肺炎支原体显色原位杂交研究方法的建立

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中国预防兽医学报 2012年第3期34卷 214-218页

作者：王占伟熊褀琰刘茂军冯志新白方方邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京天邦生物科技有限公司江苏南京210012

为建立猪肺炎支原体(Mhp)显色原位杂交(CISH)定位检测方法,本研究利用地高辛标记的Mhp P36核酸探针和DAB/H2O2显色系统,对人工Mhp感染组、自然感染组和健康对照组的实验猪肺组织样品和临床样品进行显色原位杂交检测。结果显示,设计的地... 详细信息

为建立猪肺炎支原体(Mhp)显色原位杂交(CISH)定位检测方法,本研究利用地高辛标记的Mhp P36核酸探针和DAB/H2O2显色系统,对人工Mhp感染组、自然感染组和健康对照组的实验猪肺组织样品和临床样品进行显色原位杂交检测。结果显示,设计的地高辛标记探针针对Mhp具有特异性,而与其他的猪病原菌无交叉反应;检测结果可以通过显微镜观测到Mhp定位在支气管/细支气管黏膜表面。人工感染组、自然感染组和健康对照组的CISH结果与PCR检测结果一致,临床样品的CISH检测结果低于PCR检测结果。本研究建立的Mhp显色原位杂交法是一种集直观和敏感为一体的检测方法,可以用于Mhp的定位检测和致病机理研究。

关键词：猪肺炎支原体显色原位杂交斑点杂交检测定位

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