检索结果-内蒙古大学图书馆

江苏农业科学 2014年第6期42卷 166-169页

作者：韩凯凯李银黄欣梅赵冬敏刘宇卓谢星星游园江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

以鹅坦布苏病毒（ goose Tembusu virus ， GTMUV ）的囊膜蛋白基因序列为基础，采用 Chou -Fasman 法、Garnier-Robson法和Karplus-Schulz法预测蛋白质的二级结构，采用Kyte -Doolittle 方案、Emini 方案和Jameson -Wolf方案预测鹅坦... 详细信息

以鹅坦布苏病毒（ goose Tembusu virus ， GTMUV ）的囊膜蛋白基因序列为基础，采用 Chou -Fasman 法、Garnier-Robson法和Karplus-Schulz法预测蛋白质的二级结构，采用Kyte -Doolittle 方案、Emini 方案和Jameson -Wolf方案预测鹅坦布苏病毒囊膜蛋白的B细胞表位。结果表明，鹅坦布苏病毒囊膜蛋白肽链的35～41、80～89、148～159、245～251、314～320、392～402和475～482区段为预测的B细胞表位优势区。综合研究结果，利用多参数方案综合预测E蛋白的B细胞抗原表位为进一步鉴定表位及设计疫苗奠定了基础。

关键词：坦布苏病毒囊膜蛋白二级结构 B细胞表位

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流行病学模型及建模步骤

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动物医学进展 2012年第7期33卷 104-108页

作者：谭业平臧一天胡肄农陆昌华江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

流行病学模型可作为动物疫病风险评估及防控策略制定的有力工具。论文介绍了流行病学模型的定义及其在动物疫病管理决策中的应用,讨论了模型的分类及建模的方法,重点阐述了动物疫病流行病学模型的构建步骤,包括建模系统和研究目标的确... 详细信息

流行病学模型可作为动物疫病风险评估及防控策略制定的有力工具。论文介绍了流行病学模型的定义及其在动物疫病管理决策中的应用,讨论了模型的分类及建模的方法,重点阐述了动物疫病流行病学模型的构建步骤,包括建模系统和研究目标的确定、动物群体和疫病流行病学数据信息的收集、概念模型的构建、概念模型的确认、概念模型的公式化或编程、模型的验证、运行有效性的评估、敏感性分析、执行研究、输出结果的解释和交流。提出了一些建模的基本准则和应该着重考虑的问题,以期为动物疫病流行病学模型和风险评估预警研究提供参考。

关键词：动物疫病流行病学模型

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鹅坦布苏病毒E蛋白质结构域I和Ⅱ在大肠杆菌中的表达及鉴定

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江苏农业学报 2014年第3期30卷 590-594页

作者：赵冬敏黄欣梅刘宇卓韩凯凯谢星星刘晓燕李银江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了实现鹅坦布苏病毒E蛋白质结构域I和II在大肠杆菌中的表达。利用PCR方法扩增得到目的片段,并引入FLAG标签序列(DYKDDDDK),构建重组表达质粒pET28a-E-I/II。转化至BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达目的蛋白质,并对其进行SDS-PAGE分析和West... 详细信息

为了实现鹅坦布苏病毒E蛋白质结构域I和II在大肠杆菌中的表达。利用PCR方法扩增得到目的片段,并引入FLAG标签序列(DYKDDDDK),构建重组表达质粒pET28a-E-I/II。转化至BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达目的蛋白质,并对其进行SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定。结果显示,PCR扩增得到约900 bp的目的片段,经鉴定成功构建重组表达载体pET28a-E-I/II。重组菌在IPTG诱导4 h后在37 000处出现目的蛋白质并且表达量达到高峰。经超声波破碎后SDS-PAGE分析显示,融合蛋白质以包涵体形式存在。Western-blot结果显示,重组蛋白质与FLAG单抗和E蛋白质阳性血清均可发生特异性反应。表明鹅坦布苏病毒E蛋白质结构域Ⅰ和Ⅱ在大肠杆菌中成功表达,经鉴定重组蛋白质具有良好的免疫反应性。

关键词：鹅坦布苏病毒 E蛋白质结构域Ⅰ和Ⅱ 大肠杆菌 domains Ⅰ and Ⅱ

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PEDV、TGEV、PARV多重RT-PCR检测方法的建立及其应用

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江苏农业学报 2013年第5期29卷 1065-1069页

作者：郭容利何孔旺倪艳秀茅爱华温立斌李彬王小敏俞正玉江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

建立了一种同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪A群轮状病毒(PARV)的三重RT-PCR方法,并对其进行特异性与敏感性试验。在实验室检测中,此方法能检测约50 TCID50的混合病毒,能够扩增出3条长度为750 bp(PEDV)、5... 详细信息

建立了一种同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪A群轮状病毒(PARV)的三重RT-PCR方法,并对其进行特异性与敏感性试验。在实验室检测中,此方法能检测约50 TCID50的混合病毒,能够扩增出3条长度为750 bp(PEDV)、544 bp(TGEV)、275 bp(PARV)特异性片段,而其他病毒无特异性条带。应用该方法对江苏省及周边地区154份临床疑似病毒性腹泻病料进行检测,结果表明:PEDV、TGEV、PARV阳性率分别为53.2%、8.4%、5.2%。PEDV与TGEV混合感染率为5.2%,PEDV与PARV混合感染率为4.5%。该方法的建立对临床上进行这3种疾病混合感染的检测具有重要意义。

关键词：猪流行性腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒猪A群猪轮状病毒多重RT-PCR

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不同日龄猪伪狂犬抗体的检测与分析

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江苏农业科学 2015年第10期43卷 262-263页

作者：孙华伟赵永前茅爱华蒋晨慧张敬峰江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

应用猪伪狂犬病毒gp I抗体检测试剂盒和猪伪狂犬病毒g B抗体检测试剂盒对某规模猪场的2~22周龄11个阶段的110份血清同时进行上述2种抗体检测,以掌握不同日龄猪伪狂犬野毒的感染情况并制定适合本场的猪伪狂犬的免疫程序。结果显示:该场... 详细信息

应用猪伪狂犬病毒gp I抗体检测试剂盒和猪伪狂犬病毒g B抗体检测试剂盒对某规模猪场的2~22周龄11个阶段的110份血清同时进行上述2种抗体检测,以掌握不同日龄猪伪狂犬野毒的感染情况并制定适合本场的猪伪狂犬的免疫程序。结果显示:该场不同日龄猪伪狂犬gp I抗体全部为阴性,仔猪伪狂犬的母源抗体可以维持到10周以上,说明目前场内采用10周龄进行猪伪狂犬疫苗的免疫接种方法是科学的。

关键词：伪狂犬 gpI抗体 gB抗体免疫接种

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从山羊持续性腹泻病例中分离到边界病病毒(BDV)

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江苏农业学报 2013年第1期29卷 222-224页

作者：李文良毛立张纹纹张则斌赵永前何孔旺江杰元江苏省农业科学院兽医研究所、农业部兽用生物制品工程技术重点实验室、国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

边界病（Border disease）是由边界病病毒（Border disease virus，BDV）引起的以新生羔羊发生震颤和被毛异常为特征的一种疾病，最早发现于英格兰与威尔士边界地区，故名。该病在临床上以繁殖障碍和羔羊畸形为特征，如不孕、流产、死... 详细信息

边界病（Border disease）是由边界病病毒（Border disease virus，BDV）引起的以新生羔羊发生震颤和被毛异常为特征的一种疾病，最早发现于英格兰与威尔士边界地区，故名。该病在临床上以繁殖障碍和羔羊畸形为特征，如不孕、流产、死产、产出弱小胎儿、羔羊先天震颤、骨骼异常和多毛[1]。

关键词：边界病山羊腹泻进化分析

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鹅坦布苏病毒囊膜蛋白结构域Ⅱ在大肠杆菌中的表达及免疫学鉴定

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江苏农业学报 2015年第3期31卷 619-623页

作者：赵冬敏黄欣梅刘宇卓韩凯凯杨婧谢星星刘晓燕李银江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了实现鹅坦布苏病毒囊膜蛋白(E蛋白)结构域Ⅱ在大肠杆菌中的表达并对其进行免疫学鉴定,根据鹅坦布苏病毒JS804株囊膜蛋白基因序列,利用人工合成法获得鹅坦布苏病毒囊膜蛋白结构域Ⅱ编码基因并引入限制性酶切位点,片段大小为507 bp。... 详细信息

为了实现鹅坦布苏病毒囊膜蛋白(E蛋白)结构域Ⅱ在大肠杆菌中的表达并对其进行免疫学鉴定,根据鹅坦布苏病毒JS804株囊膜蛋白基因序列,利用人工合成法获得鹅坦布苏病毒囊膜蛋白结构域Ⅱ编码基因并引入限制性酶切位点,片段大小为507 bp。将合成的基因片段克隆入pGEX-4t-1原核表达载体中,构建重组表达载体pGEX-EII并转化至BL21(DE3)中。通过优化表达条件获得重组蛋白质并进行免疫学鉴定。结果显示,重组蛋白质分子量约为4.4×104,Western-blot和间接免疫荧光检测结果表明重组蛋白质具有良好的免疫原性。

关键词：鹅坦布苏病毒囊膜蛋白

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快速检测志贺毒素2基因的LAMP方法的建立

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江苏农业学报 2013年第2期29卷 455-457页

作者：张雪寒何孔旺叶青李彬倪艳秀温立斌王小敏周俊明江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

志贺毒素（Shigatoxin，Stx）又称Vero毒素，是产志贺毒素大肠杆菌（Shiga toxin-producing Ecoli，STEC）重要毒力因子之一，具有细胞毒性、肠毒性、神经毒性作用，是导致被感染者出现严重症状甚至死亡的主要原因，因此，有必要建立敏... 详细信息

志贺毒素（Shigatoxin，Stx）又称Vero毒素，是产志贺毒素大肠杆菌（Shiga toxin-producing Ecoli，STEC）重要毒力因子之一，具有细胞毒性、肠毒性、神经毒性作用，是导致被感染者出现严重症状甚至死亡的主要原因，因此，有必要建立敏感而快速的检测Stx方法。细菌培养方法需要耗费3d，而快速检测方法如ELISA需要高浓度的病原菌才能检测到。

关键词：环介导恒温扩增技术 stx2基因快速检测

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猪瘟病毒糖基化E2蛋白在重组杆状病毒中的表达与鉴定

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江苏农业学报 2013年第2期29卷 341-345页

作者：李文良毛立张纹纹杨蕾蕾王小敏江杰元江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为获得糖基化的重组猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白,通过PCR扩增出去除C端跨膜区的猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)E2蛋白基因,前面包含糖基化信号肽,末端引入StrepⅡ标签序列,将其克隆到Bac-to-Bac杆状病毒表达系统pFastBacTMHT B载体中,筛选获得阳性... 详细信息

为获得糖基化的重组猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白,通过PCR扩增出去除C端跨膜区的猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)E2蛋白基因,前面包含糖基化信号肽,末端引入StrepⅡ标签序列,将其克隆到Bac-to-Bac杆状病毒表达系统pFastBacTMHT B载体中,筛选获得阳性重组质粒pF-ge2,转化至含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态大肠杆菌中,经蓝白菌落筛选和PCR鉴定,获得重组表达载体rBac-ge2。在脂质体介导下转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rAc-gE2。Western-blot试验结果表明,重组蛋白得到正确表达,具有良好的抗原性;用糖苷酶PNGase F处理后重组蛋白分子量减小到40 000,证明重组蛋白为糖基化蛋白。这为进一步研究E2蛋白的功能及CSFV新型亚单位疫苗的开发奠定了基础。

关键词：猪瘟病毒 E2蛋白糖基化杆状病毒表达系统

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猪瘟病毒糖基化E2蛋白和E0蛋白的协同免疫保护作用

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江苏农业学报 2015年第2期31卷 357-361页

作者：李文良毛立杨蕾蕾张纹纹江杰元江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了研究杆状病毒表达的糖基化亚单位疫苗的协同免疫保护作用,将重组杆状病毒感染Sf9细胞制备猪瘟E2、E0重组蛋白,Western blot检测蛋白表达和糖基化情况。用重组蛋白单独或联合免疫家兔,检测血清中抗体水平变化。在首免后4周用猪瘟兔... 详细信息

为了研究杆状病毒表达的糖基化亚单位疫苗的协同免疫保护作用,将重组杆状病毒感染Sf9细胞制备猪瘟E2、E0重组蛋白,Western blot检测蛋白表达和糖基化情况。用重组蛋白单独或联合免疫家兔,检测血清中抗体水平变化。在首免后4周用猪瘟兔化弱毒疫苗C株攻毒家兔,监测其体温变化,并运用RT-PCR检测家兔脾脏中病毒RNA。结果表明,E2、E2+E0免疫组兔均可诱导产生高水平的抗体和中和抗体,但两组间差异不显著。攻毒后E2免疫组2/5兔出现轻热症状,1/5兔脾脏病毒阳性;E2+E0组兔均未出现发热症状,也未检测到C株病毒RNA。E0组不能诱导兔产生中和抗体,但也能提供部分保护(2/5)。可见,基于E2、E0的亚单位疫苗具有良好的免疫原性,且两者联合使用具有协同作用,有望成为新型亚单位疫苗的候选抗原。

关键词：猪瘟亚单位疫苗 E2蛋白 E0蛋白协同作用

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