检索结果-内蒙古大学图书馆

江苏农业学报 2015年第2期31卷 382-388页

作者：黄欣梅李银刘宇卓赵冬敏杨婧韩凯凯江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了解华东地区H9N2亚型禽流感病毒（AIV）的遗传特点和流行规律,利用RT-PCR方法扩增华东地区2008～2013年分离的17株H9N2亚型AIV血凝素（HA）基因片段,进行序列测定和遗传进化分析,并对HA蛋白质的裂解位点、受体结合位点和潜在的糖基... 详细信息

为了解华东地区H9N2亚型禽流感病毒（AIV）的遗传特点和流行规律,利用RT-PCR方法扩增华东地区2008～2013年分离的17株H9N2亚型AIV血凝素（HA）基因片段,进行序列测定和遗传进化分析,并对HA蛋白质的裂解位点、受体结合位点和潜在的糖基化位点进行分析。结果显示,17株H9N2亚型AIV HA基因核苷酸和推导的氨基酸同源性分别为84.6%～99.3%和86.0%～99.5%,均属于欧亚分支。其中15株鸡源病毒属于Y280-like亚系,2株鸭源病毒属于G1-like亚系。HA裂解位点都是非连续碱性氨基酸,属于低致病力毒株。HA受体结合位点149、150、191、198和234位氨基酸存在变异,尤其是234位氨基酸有14株毒株变为L,表现出人流感病毒受体结合特性。有2株毒株在145位氨基酸出现新的糖基化位点,5个毒株在218位氨基酸缺失1个糖基化位点,13个毒株在313位氨基酸增加了一个新的糖基化位点。研究结果表明华东地区近年来H9N2亚型AIV存在一定的变异,应加强对该类病毒的分子流行病学监测。

关键词： H9N2亚型禽流感病毒 HA基因进化分析

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表达IBDV AH1株VP2嵌合法氏囊素三肽基因的重组火鸡疱疹病毒的构建及免疫功能分析

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中国兽医科学 2017年第9期47卷 1073-1079页

作者：潘群兴毕振威王永山欧阳伟王晓丽孟凯夏兴霞诸玉梅江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为研究传染性法氏囊病(IBD)重组火鸡疱疹病毒(HVT)的构建策略,以HVT FC126基因组非必需区UL44~UL45为插入位点,构建带有大肠杆菌黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸转移酶基因序列(gpt)标记的HVT转移载体质粒pUAB-gpt。然后构建表达IBDVAH1株VP2嵌合法... 详细信息

为研究传染性法氏囊病(IBD)重组火鸡疱疹病毒(HVT)的构建策略,以HVT FC126基因组非必需区UL44~UL45为插入位点,构建带有大肠杆菌黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸转移酶基因序列(gpt)标记的HVT转移载体质粒pUAB-gpt。然后构建表达IBDVAH1株VP2嵌合法氏囊素三肽(BS10)表达盒并克隆入pUAB-gpt,获得转移载体质粒pUAB-Pec-BS10-VP2-Egpt。将该转移载体与HVT DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过间接免疫荧光试验(IFA)、IBDV抗体夹心ELISA检测、Western-blotting分析,结果显示,获得了表达VP2基因的重组HVT病毒rHVT-Pec-BS10-VP2。将该重组病毒免疫1日龄SPF鸡,免疫后第14天,鸡群可以检测到IBDV抗体。免疫后第21天,脾淋巴细胞增殖活性反应显著。证明IBD重组火鸡疱疹病毒构建成功。

关键词：传染性法氏囊病病毒 VP2基因法氏囊素三肽重组火鸡疱疹病毒

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检测产志贺毒素大肠杆菌抗体的间接ELISA试剂盒的研制

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西南农业学报 2016年第11期29卷 2738-2745页

作者：张雪寒张强张碧成汪伟倪艳秀温立斌李彬周俊明何孔旺周萍江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

本研究旨在研制一种以紧密素为检测靶标的间接ELISA技术,检测血清中产志贺毒素大肠杆菌（Shiga toxigenic Escherichia coli,STEC）的抗体水平。根据紧密素27个亚型的N端保守序列,体外表达390-543 aa片段制备包被抗原,通过敏感性、特异... 详细信息

本研究旨在研制一种以紧密素为检测靶标的间接ELISA技术,检测血清中产志贺毒素大肠杆菌（Shiga toxigenic Escherichia coli,STEC）的抗体水平。根据紧密素27个亚型的N端保守序列,体外表达390-543 aa片段制备包被抗原,通过敏感性、特异性、重复性和稳定性实验,建立检测STEC的抗体的间接EIISA方法。经优化筛选的间接ELISA最佳反应条件：抗原包被浓度3 ng/孔,待检血清稀释比例1∶200,HRP-兔抗羊Ig G、HRP-兔抗牛Ig G的工作浓度均为1∶15000,5%脱脂奶封闭l h,底物作用时间10min,用于牛、羊疫苗抗体检测或者STEC大肠杆菌感染的监测。

关键词：致病性大肠杆菌紧密素间接ELISA

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我国畜产品兽药残留的公共经济学分析及对策

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家畜生态学报 2016年第6期37卷 1-7页

作者：陆昌华胡肄农谭业平臧一天郁达威江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

阐述我国兽药残留现状,指出养殖业中滥用兽药现象普遍存在,已严重影响我国畜产品安全与出口贸易。为此,作者在己有畜产品安全事件的经济损失评估模型探讨的基础上,从公共经济学的角度去分析畜产品兽药残留问题,思考消除隐患的可能措施,... 详细信息

阐述我国兽药残留现状,指出养殖业中滥用兽药现象普遍存在,已严重影响我国畜产品安全与出口贸易。为此,作者在己有畜产品安全事件的经济损失评估模型探讨的基础上,从公共经济学的角度去分析畜产品兽药残留问题,思考消除隐患的可能措施,提出完善兽药残留与动物源食品安全管理的建议。建立安全生态健康产品生产体系,建议改变我国畜产品危害因素的排序。建立基于网络环境下区域性食品安全风险防控中心,建议我国食品安全必须由单一部门来监管,以推动我国兽药残留与动物源食品安全管理的法制化、科学化与现代化。

关键词：食品安全畜产品兽药残留公共经济学

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基于Arc GIS的江苏省猪粮比价风险等级评估

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江苏农业学报 2013年第6期29卷 1478-1483页

作者：郁达威胡肄农谭业平陆昌华江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为建立猪粮比价评估系统,以江苏省宿迁市为例,分析猪粮比价与生猪价格、玉米价格和豆粕价格相关性,通过建立GM(1,1)模型,分别对生猪价格、玉米价格和豆粕价格进行趋势预测,采用灰色关联度建立猪粮比价与其影响因素的关系模型,利用地理... 详细信息

为建立猪粮比价评估系统,以江苏省宿迁市为例,分析猪粮比价与生猪价格、玉米价格和豆粕价格相关性,通过建立GM(1,1)模型,分别对生猪价格、玉米价格和豆粕价格进行趋势预测,采用灰色关联度建立猪粮比价与其影响因素的关系模型,利用地理信息系统技术(Arc GIS软件)进行猪粮比价风险等级评估。结果显示,豆粕价格可作为猪粮比价的计算因素,GM(1,1)模型可实现各因素价格预测,灰色关联法可以较为准确预测猪粮比价,同时利用地理信息系统技术能够实现猪粮比价数据管理和风险等级评估的可视化。

关键词：猪粮比价趋势预测 Arc GIS

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肠出血性大肠杆菌O157∶H7 toxB基因缺失株的构建

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江苏农业学报 2012年第2期28卷 337-343页

作者：张雪寒何孔旺赵攀登栾晓婷叶青温立斌倪艳秀李彬郭容利王小敏周俊明俞正玉茅爱华吕立新江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了明确肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157∶H7大质粒pO157编码的蛋白质ToxB与O157∶H7在肠道黏附、定殖的关系,构建含有toxB基因同源臂的重组自杀性质粒pMEG375-BN-Kan-BC,转化SM10宿主菌获得重组SM10(pMEG375-BN-Kan-BC)。将SM10(pMEG375-BN-Kan-BC)与O157∶H7进行混合培养,通过同源重组,获得杂交toxB基因缺失株。用体外接种的HEp-2细胞和体内感染链霉素处理的小鼠,明确缺失株黏附定殖能力。经PCR和Western blot鉴定,toxB基因被卡那霉素(Kan+)选择标记基因表达盒所代替。O157∶H7(△toxB)生长特性与亲本株相比无明显差异。O157∶H7(△toxB)与亲本株相比,对HEp-2细胞的黏附能力降低了2倍。口服感染小鼠后,O157∶H7(△toxB)第3 d粪便排菌量仅为3.1×105 CFU,持续排菌11 d;而亲本株排菌量高达4.03×107 CFU,持续排菌时间超过14 d。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157∶H7 toxB基因缺失株小鼠黏附

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猪链球菌2型粘附相关因子荧光定量PCR检测方法的建立

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江苏农业学报 2014年第3期30卷 560-566页

作者：汪伟何孔旺倪艳秀周俊明张雪寒俞正玉吕立新茅爱华温立斌王小敏李彬郭容利江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了建立定量检测猪链球菌2型(SS2)粘附相关因子mRNA转录水平的荧光定量PCR方法,根据已报导的SS2粘附相关因子甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、分选酶A(SrtA)、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGD)及其管家基因aroA,用GenBank登录的核苷酸序列,设... 详细信息

为了建立定量检测猪链球菌2型(SS2)粘附相关因子mRNA转录水平的荧光定量PCR方法,根据已报导的SS2粘附相关因子甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、分选酶A(SrtA)、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGD)及其管家基因aroA,用GenBank登录的核苷酸序列,设计特异性引物,提取SS2总RNA,经RT-PCR扩增和克隆了各粘附相关因子的核苷酸片段,以构建含有各自引物扩增序列的重组质粒,建立检测各粘附相关因子SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。该方法起始模板数的对数与荧光信号达到所设定荧光阈值所经历的循环数(Ct)之间线性关系好,相关系数均达到0.995以上;扩增产物形成单一的特异性熔解峰;初始模板的检出下限达到了1μl 1.0×102拷贝数;组内变异系数小于2%,说明该方法特异性强、敏感性高、重复性好。

关键词：猪链球菌2型粘附相关因子 Streptococcus suis 2

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猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立与应用

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动物医学进展 2012年第5期33卷 8-13页

作者：李文良毛立江杰元李彬茅爱华甘源江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

采用RT-PCR方法扩增猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白主要抗原区基因,克隆入原核表达载体pET32a(+),转化大肠埃希菌BL21构建重组表达菌,经SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白得到成功表达。利用纯化的重组蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化,建立... 详细信息

采用RT-PCR方法扩增猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白主要抗原区基因,克隆入原核表达载体pET32a(+),转化大肠埃希菌BL21构建重组表达菌,经SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白得到成功表达。利用纯化的重组蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化,建立了间接ELISA抗体检测方法。ELISA抗原最适包被浓度为0.5μg/mL(0.05μg/孔),最佳封闭液为5g/L BSA,待检血清最适稀释度为1∶100,作用时间为1h,酶标抗体最适稀释度为1∶2 000,最适作用时间为45min,室温显色10min。用该方法检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)阳性血清结果均为阴性;批内和批间重复试验变异系数分别<5%和<8%,表明本方法具有较好的特异性和重复性。应用△E2-ELISA对350份血清样品进行检测,阳性率为77.71%,高于IDEXX试剂盒检测阳性率(67.14%),与IDEXX试剂盒阳性符合率91.06%,阴性符合率50%,总符合率77.43%。表明本试验建立的间接ELISA方法适于临床CSFV血清抗体的检测。

关键词：猪瘟病毒 E2 原核表达间接ELISA

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猪链球菌2型体外刺激3D4/21猪肺泡巨噬细胞的炎症相关细胞因子mRNA转录分析

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江苏农业学报 2013年第3期29卷 559-564页

作者：汪伟何孔旺倪艳秀吕立新周俊明张雪寒俞正玉茅爱华温立斌王小敏李彬郭容利江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为探明猪链球菌2型(SS2)感染的致病机制,利用荧光定量PCR方法,分析不同SS2菌株对3D4/21猪肺泡巨噬细胞各炎症相关细胞因子mRNA体外转录水平的影响。结果显示强毒菌株ZY05719刺激细胞因子转录水平高于其impdh缺失株ZY05719(Δimpdh)和无... 详细信息

为探明猪链球菌2型(SS2)感染的致病机制,利用荧光定量PCR方法,分析不同SS2菌株对3D4/21猪肺泡巨噬细胞各炎症相关细胞因子mRNA体外转录水平的影响。结果显示强毒菌株ZY05719刺激细胞因子转录水平高于其impdh缺失株ZY05719(Δimpdh)和无毒菌株HA0609及低毒菌株CS100322-1。ZY05719诱导多个细胞因子mRNA过度转录,包括IL-18、IL-8和IL-12等。除IL-10外,HA0609诱导其他细胞因子mRNA上调转录;而CS100322-1刺激后,绝大部分细胞因子mRNA处于稳定状态。不同毒力SS2菌株影响细胞因子mRNA转录,且这种影响具有时间上的依赖性。SS2具有调节炎性细胞因子转录的能力,其结果介导炎症反应及白细胞趋集于感染部位,这可能是SS2引起脑膜炎炎症特征的机制之一。

关键词：猪链球菌2型猪肺泡巨噬细胞炎症相关细胞因子荧光定量PCR

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鸭胚成纤维细胞上坦布苏病毒受体蛋白的鉴定

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南方农业学报 2019年第1期50卷 173-178页

作者：赵冬敏韩凯凯刘青涛黄欣梅杨婧刘宇卓章丽娇田宇杰王梦瑶李银江苏省农业科学院兽医研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室南京210014

【目的】拓展对坦布苏病毒受体的认知,为研究其在鸭体内的感染机制打下基础。【方法】取9日龄SPF鸭胚制备鸭胚成纤维细胞(DEF),待细胞长成单层后提取DEF膜蛋白,利用免疫共沉淀试验筛选出DEF膜蛋白中可与坦布苏病毒结合的蛋白,经病毒辅... 详细信息

【目的】拓展对坦布苏病毒受体的认知,为研究其在鸭体内的感染机制打下基础。【方法】取9日龄SPF鸭胚制备鸭胚成纤维细胞(DEF),待细胞长成单层后提取DEF膜蛋白,利用免疫共沉淀试验筛选出DEF膜蛋白中可与坦布苏病毒结合的蛋白,经病毒辅覆蛋白结合分析(VOPBA)验证后通过LC-MSMS质谱分析进行鉴定;同时人工合成鸭热休克蛋白70基因(HSP70)序列的开放阅读框(1905 bp),构建重组质粒pET32a-HSP70并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,以重组蛋白免疫小鼠制备抗鸭HSP70血清,与DEF细胞共孵育后接种坦布苏病毒,并采用实时荧光定量PCR检测抗血清对病毒感染的抑制作用。【结果】DEF膜蛋白中分子量约70 kD的蛋白可与坦布苏病毒结合,经LC-MSMS质谱分析和序列比对可确定该蛋白即为鸭热休克蛋白70(HSP70)。含重组质粒pET32aHSP70的BL21(DE3)感受态细胞经IPTG诱导4 h后,SDS-PAGE检测发现在分子量约85 kD处出现目的蛋白条带,获得的重组鸭HSP70蛋白主要以包涵体形式进行表达,且能与His标签抗体发生特异性反应。以重组鸭HSP70蛋白免疫小鼠获得的抗鸭HSP70血清可封闭DEF细胞上的HSP70,而竞争性抑制坦布苏病毒感染。【结论】HSP70是坦布苏病毒感染DEF细胞的受体,可作为新的靶点用于抗坦布苏病毒药物设计。

关键词：坦布苏病毒鸭胚成纤维细胞热休克蛋白70 受体免疫共沉淀病毒辅覆蛋白结合分析(VOPBA)

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