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一种水溶性佐剂CS-GTA-ML对H7N9亚型禽流感灭活疫苗免疫效果评价

中国兽医学报 2023年第8期43卷 1618-1626页

作者：尹文竹许泽玉邓碧华马芳周明旭王海燕卢宇张金秋江苏省农业科学院动物免疫工程研究所国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

旨在合成一种直接溶解在生理缓冲溶剂中、可注射的功能化修饰的壳聚糖衍生物作为兽用佐剂,用于替代铝盐佐剂。壳聚糖中的氨基与环氧丙基三甲基氯化铵(GTA)中的环氧基团发生加成开环反应,偶联成CS-GTA中间体;再与4-(2-氯乙基)吗啉(ML)发... 详细信息

旨在合成一种直接溶解在生理缓冲溶剂中、可注射的功能化修饰的壳聚糖衍生物作为兽用佐剂,用于替代铝盐佐剂。壳聚糖中的氨基与环氧丙基三甲基氯化铵(GTA)中的环氧基团发生加成开环反应,偶联成CS-GTA中间体;再与4-(2-氯乙基)吗啉(ML)发生氮烷基化反应生成终产物CS-GTA-ML。产物通过FI-IR、1H NMR、Zeta电位等表征手段检测其结构及重要成分的嫁接率;通过溶血试验、细胞活性计数(CCK-8)和组织病理分析(HE)方法评估了CS-GTA-ML的生物安全性,为注射剂型的使用提供了安全保障;配伍H7N9亚型流感灭活病毒,对雌性ICR小鼠和SPF鸡进行皮下免疫,测定对其血凝抑制(HI)效价,并通过流式分析仪初步探索脾淋巴细胞活化能力。结果显示,作为抗原递送系统,CS-GTA-ML在不同pH值的水溶液中均可溶解,其中GTA和ML的嫁接率分别约为53%,15%,且带有15.8 mV的正电荷。当质量浓度在1 g/L以下时,体外脾细胞存活率在88%以上,且对机体重要组成器官无损伤;当质量浓度高达10 g/L时,体外红细胞溶血率仅0.5%左右,具有良好的生物相容性。与单一的H7N9疫苗和ISA206+H7N9疫苗对比,CS-GTA-ML有显著的血凝抑制作用。通过相关细胞因子及流式细胞分析发现CS-GTA-ML倾向于CD4^(+)T细胞分化趋势,具有体液免疫和细胞免疫双重免疫效力。

关键词：壳聚糖吗啉环水溶性 H7N9禽流感病毒佐剂

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功能化氧化石墨烯GCF的制备及其增强OVA的免疫原性评价

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中国兽医学报 2023年第3期43卷 562-570页

作者：宣德春尹文竹王海燕周明旭邓碧华马芳卢宇张金秋江苏大学药学院江苏镇江212013 江苏省农业科学院动物免疫工程研究所国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 江苏省食品质量安全重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地江苏南京210014

为制备高效负载、递送和缓释抗原的新型功能化氧化石墨烯衍生材料(GCF)作为佐剂,探索该纳米佐剂对OVA免疫原性影响。以氧化石墨烯(graphene oxide,GO)为母体,采用EDC/NHS共价嫁接壳聚糖(chitosan,CS),并静电吸附泊洛沙姆407(poloxamer,F... 详细信息

为制备高效负载、递送和缓释抗原的新型功能化氧化石墨烯衍生材料(GCF)作为佐剂,探索该纳米佐剂对OVA免疫原性影响。以氧化石墨烯(graphene oxide,GO)为母体,采用EDC/NHS共价嫁接壳聚糖(chitosan,CS),并静电吸附泊洛沙姆407(poloxamer,F127)制备出亲水性的氧化石墨烯衍生材料GO-CS-F127(简称GCF)。利用XRD、UV-vis、FI-IR、Zeta电位等多种方法对GCF进行理化特性表征,确定材料的形貌、成分及电荷分布。通过BCA法检测GCF对OVA的最大吸附量及释放率,CCK-8法鉴定GCF新材料在体外安全性评价,ELSIA方法评价小鼠血清中特异性抗体水平,并采集小鼠重要组织制备切片以观察病理变化。结果显示,GCF呈片层结构,常温放置30 d仍能稳定存放,带有17.9 mV的正电荷,能快速吸附抗原,其最大吸附量能达到1.9 g/g,且对抗原具有显著的缓释作用。GCF质量浓度在100 mg/L以下,细胞存活率达85%以上,且对心、脾、肾等组织无损伤,具有良好的生物相容性。与单独OVA组及PBS组相比,发现GCF能显著提高小鼠OVA特异性IgG抗体水平。结果表明,以功能化氧化石墨烯GCF作为佐剂,可有效提高抗原的免疫原性。

关键词：氧化石墨烯壳聚糖共价键佐剂疫苗

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内质网分子伴侣GRP94对伪狂犬病毒增殖的调节作用

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浙江农业学报 2022年第11期34卷 2386-2394页

作者：倪敏舒陈丽鲍熹徐悦庄腾寒冯磊江苏大学药学院江苏镇江212013 江苏省农业科学院动物免疫工程研究所国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 江苏省食品质量安全重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地江苏南京210014

为探究葡萄糖调节蛋白94(GRP94)对伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)增殖的影响,以及GRP94与PRV结构蛋白之间的相互作用。利用慢病毒转染构建GRP 94基因过表达的BHK-21细胞,以及CRISPR/Cas9技术构建GRP 94基因敲除的BHK-21细胞,检测PR... 详细信息

为探究葡萄糖调节蛋白94(GRP94)对伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)增殖的影响,以及GRP94与PRV结构蛋白之间的相互作用。利用慢病毒转染构建GRP 94基因过表达的BHK-21细胞,以及CRISPR/Cas9技术构建GRP 94基因敲除的BHK-21细胞,检测PRV感染不同细胞的增殖水平,比较内质网应激相关蛋白表达水平,探索GRP94与PRV结构蛋白之间的互作关系。结果表明,GRP 94基因过表达细胞株显著有利于PRV增殖,而GRP 94基因缺失细胞株对PRV增殖无显著影响。蛋白免疫印迹结果显示,在GRP 94基因缺失细胞株中,GRP78表达水平显著上调。免疫共沉淀结果表明,GRP94与gB、gD、gL具有相互作用。GRP 94基因过表达有利于PRV增殖,检测未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)相关蛋白,研究GRP94在病毒增殖过程中的具体作用,可为PRV与内质网应激提供分子方面的研究基础,于对抗PRV病毒的感染具有重要意义。

关键词：葡萄糖调节蛋白94 葡萄糖调节蛋白78 伪狂犬病毒蛋白互作

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耐热保护剂提高鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗保存效果研究

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江苏农业科学 2021年第13期49卷 152-157页

作者：刘青涛卢凤英汪爱芬尹秀凤朱秀同何平有赵玉龙朱晓玮薛家宾张小飞江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 兆丰华生物科技(南京)有限公司江苏南京211102 瑞普(保定)生物药业有限公司河北保定071000

为提高鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗的耐热性能,根据前期研究设计了3个耐热保护剂配方,比较不同配方对疫苗的抗原冻干损失、温度耐受性和保存期的影响。结果显示,保护剂TS11、TS37、TS51所制备疫苗的抗原冻干损失均在0.5 lg以下,... 详细信息

为提高鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗的耐热性能,根据前期研究设计了3个耐热保护剂配方,比较不同配方对疫苗的抗原冻干损失、温度耐受性和保存期的影响。结果显示,保护剂TS11、TS37、TS51所制备疫苗的抗原冻干损失均在0.5 lg以下,相互之间差异不明显。但TS37所制备疫苗在37℃和45℃耐受后的抗原效价下降滴度明显低于TS11和TS51,这说明TS37具有更好的耐热保护效果。另外,25℃、2~8℃保存试验显示,配方TS37可使疫苗在室温下至少能保存1个月、冷藏条件下至少保存27个月而抗原含量和攻毒保护仍能达到质量标准要求。因此,本试验研制成功针对鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗的耐热保护剂TS37,该保护剂可使疫苗实现2~8℃下长期保存。

关键词：耐热保护剂鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗保存效果

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猪丹毒丝菌GAPDH线性B细胞表位预测与鉴定

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江苏农业科学 2021年第22期49卷 171-174页

作者：朱伟峰陈露谭凯王高杰蔡承志江苏省农业科学院兽医研究所江苏南京210014 农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014 国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

为预测并鉴定猪丹毒丝菌甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)分子线性B细胞表位,首先通过多序列比分析已经全基因组测序的10株菌株的GAPDH一级结构保守性;然后使用在线软件Bepipred-2.0预测猪丹毒丝菌GAPDH线性B细胞表位,接下来通过人工化学合... 详细信息

为预测并鉴定猪丹毒丝菌甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)分子线性B细胞表位,首先通过多序列比分析已经全基因组测序的10株菌株的GAPDH一级结构保守性;然后使用在线软件Bepipred-2.0预测猪丹毒丝菌GAPDH线性B细胞表位,接下来通过人工化学合方式合成GAPDH表位对应的多肽;最后使用间接ELISA法检测这些多肽与猪丹毒丝菌GAPDH高免血清之间的反应。研究发现已经完成全基因组测序的10株菌株的GAPDH一级结构高度保守。通过软件预测,找到了猪丹毒丝菌GAPDH的3个潜在的表位。ELISA检测结果表明74VLSERDPKNLPWKELGV90和178HAYTNDQNTLDGPHAKGDLRRGRAAAQSIIPNSTGA213与GAPDH高免血清反应明显,是猪丹毒丝菌GAPDH的表位。成功预测并鉴定到2个猪丹毒丝菌的抗原表位,这些表位将为以后基于猪丹毒丝菌GAPDH表位的诊断、疫苗设计及致病机制研究提供技术基础。

关键词：猪丹毒丝菌甘油醛-3-磷酸脱氢酶保护性抗原表位预测表位鉴定

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猪病防控的经济学评估

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猪业科学 2022年第9期39卷 24-29页

作者：陆昌华谭业平胡肄农江苏省农业科学院兽医研究所农业农村部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

随着生猪产业的迅猛发展,我国已成为世界第一猪肉生产大国。与此同时,疫病发生传播机制、病原生态学,生物安全程序评估等制订科学的动物卫生管理决策,以及重大疫病防控净化技术的集成,维护公共卫生与畜产品安全,已成为当前亟待解决的问题。

关键词：畜产品安全猪肉生产重大疫病生猪产业猪病防控病原生态学公共卫生防控净化

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疫苗气溶胶免疫技术研究进展

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中国兽药杂志 2021年第6期55卷 53-60页

作者：冯志新江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

气溶胶免疫是一种潜在的替代传统注射免疫的新方法,围绕气溶胶免疫的特征、机理、实施方法、影响因素、应用情况及前景作以综述,以期为人类和动物新型疫苗研制及免疫技术创新提供参考。

关键词：气溶胶疫苗免疫技术

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自制ISCOMATRIX与CpG联合的HCA587蛋白疫苗的制备及其免疫效应评估

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南昌大学学报（医学版） 2023年第5期63卷 1-7,F0003页

作者：谭媛芳陈惠媛焦薇范秋颖邵国青熊祺琰陈娟娟南昌大学第二附属医院检验科江西省检验医学重点实验室南昌330006 江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

目的确定自制免疫刺激复合物(ISCOMATRIX)作为HCA587蛋白疫苗佐剂的有效剂量,并探讨其与CpG联合作为HCA587蛋白疫苗佐剂的免疫效力和肿瘤治疗效果。方法应用透析法将Quil A、胆固醇和磷脂制备成ISCOMATRIX,经磷钨酸负染并采用透射电子... 详细信息

目的确定自制免疫刺激复合物(ISCOMATRIX)作为HCA587蛋白疫苗佐剂的有效剂量,并探讨其与CpG联合作为HCA587蛋白疫苗佐剂的免疫效力和肿瘤治疗效果。方法应用透析法将Quil A、胆固醇和磷脂制备成ISCOMATRIX,经磷钨酸负染并采用透射电子显微镜观察自制ISCOMATRIX的结构。建立小鼠免疫模型,将联合CpG的HCA587蛋白疫苗与不同剂量的自制ISCOMATRIX佐剂混合,经尾根部皮下免疫小鼠;采用酶联免疫斑点试验(ELISpot)检测产生IFN-γ的脾细胞频数,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清HCA587特异性抗体水平。在小鼠右侧胁腹部皮下接种B16-HCA587肿瘤细胞建立荷瘤小鼠模型,按照处理方式不同将小鼠分为HCA587蛋白疫苗治疗组(接种100μL包含CpG与最佳剂量的自制ISCOMATRIX的HCA587蛋白疫苗)与PBS对照组(注射100μL的无菌PBS),使用游标卡尺测量肿瘤大小。结果自制ISCOMATRIX佐剂呈典型的蜂窝状结构,直径20~30 nm,大小均一。12、36μg(QuilA浓度分别为0.012%、0.036%)的自制ISCOMATRIX组小鼠脾细胞分泌IFN-γ的频数与商品化ISCOMATRIX阳性对照组比较,差异无统计学意义(均P>0.05),且显著高于CpG+36μg ISCOM对照组与PBS组(均P<0.0001);5μg与18μg自制ISCOMATRIX组小鼠分泌IFN-γ的脾细胞频数,高于CpG+36μg ISCOM对照组与PBS组(均P<0.0001),但低于商品化ISCOM组(P=0.004)。12、18与36μg自制ISCOMATRIX组的血清HCA587抗体水平与商品化ISCOM阳性对照组比较,差异无统计学意义(均P>0.05);与PBS组相比,12μg自制ISCOMATRIX组1×10^(4)倍稀释血清的抗体滴度显著升高(P=0.0062)。与PBS对照组相比,HCA587蛋白疫苗治疗组肿瘤生长速度减缓,且第35天测量时肿瘤大小显著较小(P=0.0181)。结论以12μg自制ISCOMATRIX作为佐剂联合CpG制备的HCA587蛋白疫苗能诱导有效的免疫应答,并抑制荷瘤小鼠的肿瘤的生长,具有一定的肿瘤治疗作用。

关键词：免疫刺激复合物(ISCOMATRIX) 自行制备 CpG HCA587蛋白疫苗免疫效应

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猪肺炎支原体无细胞培养用优质猪血清的制备

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当代畜牧 2021年第6期50卷 21-24页

作者：袁厅华利忠张磊孙叶茂邵国青熊祺琰韦艳娜王丽刘蓓蓓王海燕冯志新江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京洲邦生物科技有限公司江苏南京210014

猪血清是细胞和微生物培养基的重要成分。笔者拟研究一种高质量猪血清生产工艺。筛选96头Mhp、PRV、PRRSV、PCV2等阴性育肥猪,随机分成2组,每组48头,分别采用无菌采血和屠宰场采血方式采血,优化血清分离和灭菌条件,通过比对2组血清采集... 详细信息

猪血清是细胞和微生物培养基的重要成分。笔者拟研究一种高质量猪血清生产工艺。筛选96头Mhp、PRV、PRRSV、PCV2等阴性育肥猪,随机分成2组,每组48头,分别采用无菌采血和屠宰场采血方式采血,优化血清分离和灭菌条件,通过比对2组血清采集量﹑溶血程度﹑无菌程度以及培养猪肺炎支原体的效果,对上述2种采血方式制备的血清进行评价。无菌技术共采集了129.6 L的血清量,远高于屠宰场采集的量(96.0 L),且前者外观为半透明淡黄色,无溶血现象出现,后者每批均有不同程度的溶血。无菌方式采集的血清细菌污染鉴定均为阴性,而屠宰场采集的全部为阳性。无菌技术采集血清配置的培养基,培养Mhp 168株和NJ株的利用率均在95%以上,屠宰场采集的血清培养上述2种支原体的利用率仅在30%左右。此优质猪血清的制备工艺为支原体培养提供了保障。

关键词：猪肺炎支原体猪血清无菌采血

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鸭坦布苏病毒病-H9亚型禽流感二联灭活疫苗免疫佐剂筛选

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动物医学进展 2021年第5期42卷 26-29页

作者：田宇杰嵇辛勤章丽娇刘青涛韩凯凯杨婧刘宇卓赵冬敏刘娜王梦瑶李银贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 贵州省农业科学院畜牧兽医研究所贵州贵阳550025

为筛选出理想的鸭TMUV-AIV(H9亚型)二联灭活疫苗免疫佐剂,将灭活的坦布苏病毒液和禽流感病毒(H9亚型)尿囊液分别与白油佐剂、卡波姆佐剂、铝胶佐剂、蜂胶佐剂制成抗原含量相同的TMUV-AIV二联灭活疫苗。应用阻断ELISA方法和血凝抑制方法... 详细信息

为筛选出理想的鸭TMUV-AIV(H9亚型)二联灭活疫苗免疫佐剂,将灭活的坦布苏病毒液和禽流感病毒(H9亚型)尿囊液分别与白油佐剂、卡波姆佐剂、铝胶佐剂、蜂胶佐剂制成抗原含量相同的TMUV-AIV二联灭活疫苗。应用阻断ELISA方法和血凝抑制方法测定免疫鸭血清中坦布苏病毒和禽流感病毒抗体,比较不同佐剂疫苗对试验鸭的免疫效力。结果表明,以白油作为佐剂的灭活疫苗组免疫效果最好,抗体产生快、抗体水平优于其他各组,免疫2周后60%(6/10)血清样品HI抗体可达1∶8以上,80%血清样品呈TMUV抗体阳性,是制备鸭TMUV-AIV(H9亚型)二联灭活疫苗的理想佐剂。

关键词：坦布苏病毒禽流感病毒(H9亚型) 佐剂筛选灭活疫苗

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