检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2016年第4期46卷 436-441页

作者：周天赐毛立李文良郝飞魏建忠江杰元安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036 江苏省农业科学院兽医研究所农业部生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为制备山羊副流感病毒3型（caprine parainfluenza virus type 3,CPIV3）HN蛋白单克隆抗体,将CPIV3 HN基因1081～1725 bp片段（编码361～574 aa）克隆入原核表达载体p ET-32a（＋）,构建重组表达质粒p ET-32a（＋）-HN361-574 aa,转化... 详细信息

为制备山羊副流感病毒3型（caprine parainfluenza virus type 3,CPIV3）HN蛋白单克隆抗体,将CPIV3 HN基因1081～1725 bp片段（编码361～574 aa）克隆入原核表达载体p ET-32a（＋）,构建重组表达质粒p ET-32a（＋）-HN361-574 aa,转化至大肠杆菌Rosetta（BL21）感受态细胞并进行诱导表达,分别用SDS-PAGE和Western-blot鉴定重组表达蛋白。结果表明,CPIV3 HN蛋白361～574 aa片段被正确表达。用两段截短的HN蛋白混合免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾与骨髓瘤细胞SP2/0融合制备单克隆抗体,分别用间接ELISA、Western-blot和IFA筛选和鉴定融合细胞上清。通过筛选获得3株杂交瘤细胞,分别命名为3F1、4A7、4H4,进一步研究表明,这3种单克隆抗体至少识别2个不同的抗原表位。本研究为CPIV3病原学检测方法的建立以及病理学诊断奠定了重要的基础。

关键词：山羊副流感病毒3型 HN蛋白单克隆抗体鉴定 IFA

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东北及华北地区猪弓形体血清学调查

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中国预防兽医学报 2016年第2期38卷 124-127,141页

作者：华利忠魏德宝王佳熊祺琰冯志新刘茂军王丽邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 拜耳(四川)动物保健有限公司四川成都610000

为研究东北及华北地区猪弓形体感染情况,本研究于2015年4月~5月采集4个省20个猪场的491份血清样品进行猪弓形体血清抗体的检测。结果表明黑龙江、辽宁、河北及山西的弓形体阳性率分别为63.24%、52.55%、50.92%及45.45%,平均为50.51%。... 详细信息

为研究东北及华北地区猪弓形体感染情况,本研究于2015年4月~5月采集4个省20个猪场的491份血清样品进行猪弓形体血清抗体的检测。结果表明黑龙江、辽宁、河北及山西的弓形体阳性率分别为63.24%、52.55%、50.92%及45.45%,平均为50.51%。分胎次统计,4省3~5次经产母猪（S3-5）及6胎次及以上经产母猪（S6＋）的弓形体抗体阳性率相比后备猪群（G）,均极显著上升（p〈0.01）,华北两省的S3-5及S6＋组相比1~2胎次经产母猪（S1-2）组,阳性率也极显著上升（p〈0.01）,但东北两省差异不显著（p〉0.05）。抗体亲和力指数检测结果显示,4省高亲和力抗体样品数比例均在70%以上,平均为77.82%,低亲和力抗体平均为6.85%。除黑龙江外,S6＋的高亲和力指数的比例（92%~100%）相比G组以及S1-2组（40%~63.64%）,均极显著上升（p〈0.01）,但与S3-5（77.78%~88.24%）相比差异均不显著（p〉0.05）。该调查结果表明猪弓形体在我国东北和华北地区的猪场依然普遍存在,对猪场进行弓形体的防治非常必要。

关键词：猪弓形体血清学东北华北

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VP60 loop区的突变对RHDV VLP功能的影响

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南京农业大学学报 2016年第2期39卷 297-304页

作者：宋艳华李珊珊王芳胡波范志宇魏后军薛家宾徐为中江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

[目的]从病毒样颗粒（VLP）的形成、血凝特性以及受体组织血型抗原（HBGA）结合特性方面,分析VP60 loop区在兔出血症病毒（RHDV）VLP功能中的作用。[方法]针对RHDV VP60蛋白的loop区411-417位氨基酸对应的基因设计引物,通过SOE法将411-... 详细信息

[目的]从病毒样颗粒（VLP）的形成、血凝特性以及受体组织血型抗原（HBGA）结合特性方面,分析VP60 loop区在兔出血症病毒（RHDV）VLP功能中的作用。[方法]针对RHDV VP60蛋白的loop区411-417位氨基酸对应的基因设计引物,通过SOE法将411-417位氨基酸等量替换成柔性氨基酸GSGGSGG,获得重组基因VP60-411-417,利用杆状病毒表达系统获得重组病毒r Ac-VP60-411-417。将重组病毒接种Sf9细胞,通过IFA、SDS-PAGE和Western blot等方法证明嵌合蛋白P411-417的表达。通过负染透射电镜观察嵌合蛋白VLP的形成,利用血凝试验分析嵌合蛋白的血凝特性,利用合成多糖结合试验分析嵌合蛋白的受体结合特性。[结果]Western blot、IFA和负染透射电镜试验结果显示,嵌合蛋白P411-417得到有效表达,且能够形成完整的VLP;合成多糖结合试验结果显示,嵌合蛋白能够特异性结合HBGA,但其血凝特性消失。[结论]411-417位氨基酸的突变显著影响RHDV的血凝特性,不影响VLP的形成以及结合HBGA的能力,说明该区域是血凝特性的相关位点,但不是HBGA受体结合的关键位点。

关键词：兔出血症病毒VP60 重叠延伸PCR 嵌合蛋白血凝特性 HBGA受体结合

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江苏羊群各型流感病毒抗体的血清学检测与分析

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中国兽医学报 2016年第11期36卷 1858-1863页

作者：王钟毓李文良毛立郝飞杨蕾蕾张纹纹姜平江杰元江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学学院江苏南京210095

为了解羊群是否存在流感病毒的感染,采用血凝抑制试验对江苏省7个县市不同羊场的2012—2014年323份羊血清中不同亚型(H1、H5、H7、H9)流感病毒抗体进行检测。结果显示,羊的H9亚型和H5亚型(Re-4株)抗体阳性率分别为95%和71.7%;H7亚型抗... 详细信息

为了解羊群是否存在流感病毒的感染,采用血凝抑制试验对江苏省7个县市不同羊场的2012—2014年323份羊血清中不同亚型(H1、H5、H7、H9)流感病毒抗体进行检测。结果显示,羊的H9亚型和H5亚型(Re-4株)抗体阳性率分别为95%和71.7%;H7亚型抗体阳性率为25.5%;甲型H1N1流感病毒抗体阳性率为14.7%;H5亚型(Re-5株和Re-6株)抗体阳性率均为0。结果表明,不同亚型流感病毒在羊群中均普遍存在,流行情况各有不同,应对其流行病学和公共卫生意义给予重视。

关键词：羊流感病毒血清流行病学血凝抑制试验

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江苏省及周边地区猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)分子流行病学调查

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江苏农业学报 2016年第2期32卷 390-398页

作者：曹东阳王小敏钱爱东何孔旺茅爱华吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了解中国江苏省及周边地区猪圆环病毒Ⅱ型（ PCV2）的分子流行病学以及毒株的遗传变异情况，本研究运用PCR技术对来源于不同地区、不同猪场且PCV2检测为阳性的样品进行全基因组序列的扩增和测序，共获得18株PCV2全基因序列，并对所得... 详细信息

为了解中国江苏省及周边地区猪圆环病毒Ⅱ型（ PCV2）的分子流行病学以及毒株的遗传变异情况，本研究运用PCR技术对来源于不同地区、不同猪场且PCV2检测为阳性的样品进行全基因组序列的扩增和测序，共获得18株PCV2全基因序列，并对所得到的毒株进行遗传变异分析。结果表明，18株毒株与国内外的参考毒株同源性为93．5％～99？7％，而ORF2核苷酸及其推导的氨基酸序列同源性分别为87．1％～99？9％和84．2％～99？6％，说明毒株存在一定程度的变异。系统进化树分析结果显示18株毒株中有5株PCV2a，7株PCV2b，6株PCV2d，其中20150429YC全长为1766 bp，与（HM038031．1 PCV2d等）参考毒株的同源性为100？0％，未发现PCV2c。同时，Cap蛋白的抗原表位和抗原性也发生了变化。说明，目前江苏省及周边地区猪群中PCV2感染较为普遍，PCV2的流行毒株以PCV2b基因型为主，PCV2d次之。

关键词：猪圆环病毒Ⅱ型分子流行病学遗传变异

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大肠杆菌O157∶H7独有基因z3276的表达及初步鉴定

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中国兽医学报 2016年第8期36卷 1354-1357页

作者：张碧成张雪寒何孔旺范红结南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

经BLAST分析表明,开放阅读框z3276是大肠杆菌O157∶H7独有的遗传标志性基因,编码氨基酸与大肠杆菌Ⅰ型菌毛有较高的同源性,但z3276基因编码蛋白的生物学特性尚不明确。为了明确z3276基因编码蛋白的抗原性,进一步研究其在大肠杆菌O157∶H... 详细信息

经BLAST分析表明,开放阅读框z3276是大肠杆菌O157∶H7独有的遗传标志性基因,编码氨基酸与大肠杆菌Ⅰ型菌毛有较高的同源性,但z3276基因编码蛋白的生物学特性尚不明确。为了明确z3276基因编码蛋白的抗原性,进一步研究其在大肠杆菌O157∶H7致病过程中的作用。采用PCR方法扩增z3276基因,去除其信号肽序列,克隆到原核表达载体pColdⅠ,转化感受态细胞BL21获得阳性重组菌,IPTG诱导表达重组蛋白,以大肠杆菌O157∶H7全菌抗血清为一抗,Western blot方法检测重组z3276蛋白抗原性。结果显示,成功构建重组菌BL21(pColdⅠ-z3276),并获得高效表达;相对分子质量33 000,占菌体总蛋白30%以上,主要以包涵体形式存在于菌体沉淀中;且与兔源全菌多克隆抗血清发生特异性反应,条带明显。

关键词：大肠杆菌O157:H7 标签基因 z3276基因原核表达

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ETEC F4-F5融合基因表达及间接ELISA方法建立

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中国兽医学报 2016年第8期36卷 1312-1317页

作者：张强张雪寒何孔旺王春凤吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

表达产肠毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)黏附素F4和F5融合蛋白,建立间接ELISA方法,旨在监测猪场ETEC感染以及疫苗免疫情况。根据GenBank中登录F4和F5基因序列,分析保守区,优化密码子,合成F4-F5串联基因,克隆入... 详细信息

表达产肠毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)黏附素F4和F5融合蛋白,建立间接ELISA方法,旨在监测猪场ETEC感染以及疫苗免疫情况。根据GenBank中登录F4和F5基因序列,分析保守区,优化密码子,合成F4-F5串联基因,克隆入原核表达载体,表达重组蛋白His-F4-F5。以纯化的His-F4-F5蛋白作为检测抗原,建立检测ETEC抗体的间接EIISA方法。经酶切和DNA序列分析,成功构建重组菌BL21(pCold I-F4-F5),SDS-PAGE和Western blot分析,融合表达F4-F5相对分子质量为29 000,与ETEC高免血清发生特异性反应,条带单一。经优化筛选的间接ELISA最佳反应条件:抗原包被浓度6ng/孔,待检血清稀释比例1∶200,HRP-羊抗猪二抗的工作浓度1∶15 000,5%脱脂奶封闭l h,底物作用时间15min。本研究建立F4-F5间接ELISA方法具有特异性好、敏感性高、重复性好、稳定性强的特点,是猪场ETEC感染和疫苗免疫效果检测的有效工具,进而指导疫苗使用和新型疫苗研发。

关键词：产肠毒索性大肠杆菌 F4菌毛 F5菌毛间接酶联免疫吸附试验

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猪鼻支原体表面可变脂蛋白vlpA黏附宿主细胞功能研究

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畜牧兽医学报 2016年第9期47卷 1897-1904页

作者：张必雄熊祺琰王佳纪燕倪博韦艳娜冯志新刘茂军邵国青江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 山西农业大学动物科技学院太谷0308003 江苏省肉类生产与加工质量安全控制协同创新中心南京210095

猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis)可引起猪的多发性浆膜炎、关节炎、肺炎及中耳炎等多种慢性炎症,感染率极高,且与人类肿瘤的发生有关,对人类健康构成威胁。已有研究表明猪鼻支原体表面可变脂蛋白(vlp)家族参与支原体黏附宿主细胞的过... 详细信息

猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis)可引起猪的多发性浆膜炎、关节炎、肺炎及中耳炎等多种慢性炎症,感染率极高,且与人类肿瘤的发生有关,对人类健康构成威胁。已有研究表明猪鼻支原体表面可变脂蛋白(vlp)家族参与支原体黏附宿主细胞的过程,本试验主要详细研究vlp家族成员之一vlpA的黏附细胞功能,特别是其Ⅲ区重复片段重复次数变化对其黏附能力的影响。根据GenBank中已公布的vlpA的基因序列,设计引物,从菌体DNA中扩增获得vlpA基因,或者人工合成Ⅲ区重复片段重复次数不等的一系列vlpA基因,均克隆至pET-32a(+)质粒中进行表达,获得目的蛋白质。同时利用固相合成法制备含两段Ⅲ区重复片段的多肽。利用间接免疫荧光试验和微孔板黏附试验检测所制备的各种重组vlpA蛋白和多肽的黏附功能。通过诱导表达和镍柱亲和层析纯化,成功获得纯度较高的各个目的蛋白质。利用间接免疫荧光试验证实vlpA可以黏附宿主细胞;利用微孔板黏附试验定量检测不含Ⅲ区的重组vlpA0蛋白及Ⅲ区重复片段多肽的黏附能力,结果发现vlpA0可黏附细胞,而Ⅲ区重复片段多肽无明显黏附能力;进一步利用微孔板黏附试验检测含Ⅲ区重复片段次数分别为3、6、9、12次的重组蛋白vlpA3、vlpA6、vlpA9、vlpA12的黏附能力,结果显示四种重组蛋白质均可黏附细胞,但黏附水平均低于不含Ⅲ区的重组vlpA0蛋白,且随着Ⅲ区重复片段重复次数的增加黏附能力下降。本研究结果提示vlpA为猪鼻支原体黏附因子之一,其Ⅱ区含有黏附位点,而整体分子的黏附能力随着Ⅲ区重复片段重复次数的增加明显减弱。本研究结果有助于进一步研究猪鼻支原体的黏附及致病机制。

关键词：猪鼻支原体可变脂蛋白vlpA 细胞黏附重复次数

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鸡p53抑制传染性法氏囊病病毒复制及gga-miR-2127对其调控的分子机制

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中国预防兽医学报 2016年第10期38卷 759-766页

作者：欧阳伟王永山孟凯潘群兴王晓丽夏兴霞诸玉梅毕振威董晨红张海彬江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

传染性法氏囊病(IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的一种高度危害养鸡业的传染病。肿瘤抑制蛋白p53能够抑制多种病毒的复制,但对IBDV复制的影响仍然不清楚。本研究以IBDV为模式病毒,采用体外感染模式,在IBDV感染的DF-1细胞中,p53... 详细信息

传染性法氏囊病(IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的一种高度危害养鸡业的传染病。肿瘤抑制蛋白p53能够抑制多种病毒的复制,但对IBDV复制的影响仍然不清楚。本研究以IBDV为模式病毒,采用体外感染模式,在IBDV感染的DF-1细胞中,p53的表达水平和活性均显著升高。p53过表达可以抑制IBDV的复制,并激活鸡体抗病毒天然免疫基因(IPS-1、IRF3、PKR、OAS、Mx)的表达水平上调;抑制p53的表达则得到相反的结果;表明p53可以激活鸡体的抗病毒天然免疫反应发挥抗IBDV感染作用。利用生物信息学方法和双荧光素酶报告系统分析发现,gga-miR-2127可以作用于p53 mRNA的3'UTR;荧光定量RT-PCR和免疫印迹分析表明gga-miR-2127可以使p53的蛋白水平表达降低,但mRNA水平没有变化;gga-miR-2127过表达可以使鸡体的抗病毒天然免疫基因表达降低,IBDV复制水平升高。本研究表明:gga-miR-2127可以作用于p53 mRNA的3'UTR调控p53的表达从而影响其下游抗病毒天然免疫基因的表达来发挥抗IBDV感染的作用。

关键词：传染性法氏囊病病毒 p53 miRNA gga-miR-2127 天然免疫

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坦布苏病毒对小鼠的神经致病力

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江苏农业学报 2016年第3期32卷 619-625页

作者：刘青涛李银黄欣梅韩凯凯赵冬敏刘宇卓杨婧江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为评价坦布苏病毒(TMUV)对哺乳动物和人类健康的潜在危害,测定TMUV的增殖能力、神经毒力和神经侵袭力,并对小鼠脑组织进行病理学观察和炎性细胞因子测定,研究TMUV对小鼠的神经致病力。结果显示,TMUV可以在小鼠的脑内进行有效的复制;3日... 详细信息

为评价坦布苏病毒(TMUV)对哺乳动物和人类健康的潜在危害,测定TMUV的增殖能力、神经毒力和神经侵袭力,并对小鼠脑组织进行病理学观察和炎性细胞因子测定,研究TMUV对小鼠的神经致病力。结果显示,TMUV可以在小鼠的脑内进行有效的复制;3日龄和3周龄的小鼠经脑内注射TMUV后,可以导致小鼠的发病和死亡,其半致死剂量分别为1×10^(0.5)ELD_(50)和1×10^(2.5)ELD_(50);3周龄的小鼠经腹腔注射TMUV后,同样可以引起小鼠的死亡,并且可以在脑内检测到病毒;此外,TMUV还在小鼠脑内引起了神经原的变性、炎性细胞的侵润和过度的炎性细胞因子应答。以上结果说明,TMUV可以在小鼠脑内进行有效复制并导致强烈的炎性应答,对小鼠具有较强的神经毒力和侵袭力。因此应该加强TMUV的流行病学监测和防控,防止该病毒的跨种间传播。

关键词：坦布苏病毒小鼠神经致病力

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