检索结果-内蒙古大学图书馆

江苏农业学报 2015年第3期31卷 619-623页

作者：赵冬敏黄欣梅刘宇卓韩凯凯杨婧谢星星刘晓燕李银江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了实现鹅坦布苏病毒囊膜蛋白(E蛋白)结构域Ⅱ在大肠杆菌中的表达并对其进行免疫学鉴定,根据鹅坦布苏病毒JS804株囊膜蛋白基因序列,利用人工合成法获得鹅坦布苏病毒囊膜蛋白结构域Ⅱ编码基因并引入限制性酶切位点,片段大小为507 bp。... 详细信息

为了实现鹅坦布苏病毒囊膜蛋白(E蛋白)结构域Ⅱ在大肠杆菌中的表达并对其进行免疫学鉴定,根据鹅坦布苏病毒JS804株囊膜蛋白基因序列,利用人工合成法获得鹅坦布苏病毒囊膜蛋白结构域Ⅱ编码基因并引入限制性酶切位点,片段大小为507 bp。将合成的基因片段克隆入pGEX-4t-1原核表达载体中,构建重组表达载体pGEX-EII并转化至BL21(DE3)中。通过优化表达条件获得重组蛋白质并进行免疫学鉴定。结果显示,重组蛋白质分子量约为4.4×104,Western-blot和间接免疫荧光检测结果表明重组蛋白质具有良好的免疫原性。

关键词：鹅坦布苏病毒囊膜蛋白

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不同日龄猪伪狂犬抗体的检测与分析

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江苏农业科学 2015年第10期43卷 262-263页

作者：孙华伟赵永前茅爱华蒋晨慧张敬峰江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

应用猪伪狂犬病毒gp I抗体检测试剂盒和猪伪狂犬病毒g B抗体检测试剂盒对某规模猪场的2~22周龄11个阶段的110份血清同时进行上述2种抗体检测,以掌握不同日龄猪伪狂犬野毒的感染情况并制定适合本场的猪伪狂犬的免疫程序。结果显示:该场... 详细信息

应用猪伪狂犬病毒gp I抗体检测试剂盒和猪伪狂犬病毒g B抗体检测试剂盒对某规模猪场的2~22周龄11个阶段的110份血清同时进行上述2种抗体检测,以掌握不同日龄猪伪狂犬野毒的感染情况并制定适合本场的猪伪狂犬的免疫程序。结果显示:该场不同日龄猪伪狂犬gp I抗体全部为阴性,仔猪伪狂犬的母源抗体可以维持到10周以上,说明目前场内采用10周龄进行猪伪狂犬疫苗的免疫接种方法是科学的。

关键词：伪狂犬 gpI抗体 gB抗体免疫接种

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猪瘟病毒糖基化E2蛋白和E0蛋白的协同免疫保护作用

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江苏农业学报 2015年第2期31卷 357-361页

作者：李文良毛立杨蕾蕾张纹纹江杰元江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了研究杆状病毒表达的糖基化亚单位疫苗的协同免疫保护作用,将重组杆状病毒感染Sf9细胞制备猪瘟E2、E0重组蛋白,Western blot检测蛋白表达和糖基化情况。用重组蛋白单独或联合免疫家兔,检测血清中抗体水平变化。在首免后4周用猪瘟兔... 详细信息

为了研究杆状病毒表达的糖基化亚单位疫苗的协同免疫保护作用,将重组杆状病毒感染Sf9细胞制备猪瘟E2、E0重组蛋白,Western blot检测蛋白表达和糖基化情况。用重组蛋白单独或联合免疫家兔,检测血清中抗体水平变化。在首免后4周用猪瘟兔化弱毒疫苗C株攻毒家兔,监测其体温变化,并运用RT-PCR检测家兔脾脏中病毒RNA。结果表明,E2、E2+E0免疫组兔均可诱导产生高水平的抗体和中和抗体,但两组间差异不显著。攻毒后E2免疫组2/5兔出现轻热症状,1/5兔脾脏病毒阳性;E2+E0组兔均未出现发热症状,也未检测到C株病毒RNA。E0组不能诱导兔产生中和抗体,但也能提供部分保护(2/5)。可见,基于E2、E0的亚单位疫苗具有良好的免疫原性,且两者联合使用具有协同作用,有望成为新型亚单位疫苗的候选抗原。

关键词：猪瘟亚单位疫苗 E2蛋白 E0蛋白协同作用

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鸭坦布苏病毒囊膜蛋白抗原表位的串联表达与抗原性分析

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江苏农业学报 2015年第1期31卷 112-116页

作者：韩凯凯李银黄欣梅赵冬敏刘宇卓谢星星安凤娇江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

在对鸭坦布苏病毒囊膜蛋白抗原表位分析的基础上,将已经筛选出的8条抗原性良好的多肽采用柔性肽拼接,转入T载体中。将酶切回收的串联基因(命名为TEM)克隆于表达载体p ET32a中,获得重组表达质粒p ET32a-TEM,将该质粒转化于感受态细胞BL21... 详细信息

在对鸭坦布苏病毒囊膜蛋白抗原表位分析的基础上,将已经筛选出的8条抗原性良好的多肽采用柔性肽拼接,转入T载体中。将酶切回收的串联基因(命名为TEM)克隆于表达载体p ET32a中,获得重组表达质粒p ET32a-TEM,将该质粒转化于感受态细胞BL21(DE3)中,经IPTG诱导后进行超声裂解,对融合蛋白进行可溶性分析、Western blotting分析和免疫原性分析。重组质粒p ET32a-TEM的酶切和测序结果表明,TEM串联基因已成功插入到p ET32a原核表达载体中;表达的p ET32a-TEM融合蛋白分子质量约为38 000,以包涵体形式存在。Western blotting和小鼠免疫试验结果显示,p ET32a-TEM融合蛋白与鸭坦布苏病毒阳性血清能发生特异性反应,具有良好的抗原性。串联多肽的成功表达,将为鸭坦布苏病血清学检测方法建立、新型工程疫苗的研发奠定基础。

关键词：坦布苏病毒合成多肽表达抗原性

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猪源马链球菌兽疫亚种类 M蛋白原核表达及其小鼠免疫保护力分析

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江苏农业学报 2015年第3期31卷 590-594页

作者：周俊明何孔旺倪艳秀祝昊丹俞正玉茅爱华吕立新温立斌张雪寒王小敏汪伟李彬郭容利江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了原核表达猪源马链球菌兽疫亚种去除信号肽的类M蛋白质,并分析该蛋白质对小鼠的免疫保护力,克隆了马链球菌兽疫亚种CY菌株去除信号肽的类M蛋白质基因Szp,并将Szp基因插入p ET28a表达载体,IPTG诱导,获得重组类M蛋白质,弗氏佐剂乳化重... 详细信息

为了原核表达猪源马链球菌兽疫亚种去除信号肽的类M蛋白质,并分析该蛋白质对小鼠的免疫保护力,克隆了马链球菌兽疫亚种CY菌株去除信号肽的类M蛋白质基因Szp,并将Szp基因插入p ET28a表达载体,IPTG诱导,获得重组类M蛋白质,弗氏佐剂乳化重组类M蛋白质后,3次免疫小鼠,用同源菌株CY攻击。诱导获得分子量约5.8×104的重组蛋白质,免疫印迹结果表明该重组类M蛋白质能够被马链球菌兽疫亚种猪多抗识别。类M蛋白质免疫小鼠的存活率为60%,弗氏佐剂乳化灭活CY免疫小鼠的存活率为70%,PBS对照组小鼠攻毒后6 d内全部死亡。表达的类M蛋白质可以给予ICR小鼠部分的免疫保护力,保护效果略低于CY全菌灭活苗,提示可以对马链球菌兽疫亚种多种免疫保护性抗原进行联合,从而进一步提高对动物的免疫保护力。

关键词：马链球菌兽疫亚种类M蛋白质原核表达疫苗

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副猪嗜血杆菌对豚鼠和小鼠的致病力研究

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中国兽医杂志 2015年第5期51卷 80-82页

作者：王占伟刘茂军王丽邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了验证副猪嗜血杆菌分离株FS0307株、XX0306株和标准株HS1079株的致病力,本文以豚鼠和Balb/c小鼠作为模型动物,分别腹腔接种副猪嗜血杆菌FS0307株、XX0306株和HS1079株,观察临床症状和死亡情况,并进行Hps的再分离和血清抗体检测。结... 详细信息

为了验证副猪嗜血杆菌分离株FS0307株、XX0306株和标准株HS1079株的致病力,本文以豚鼠和Balb/c小鼠作为模型动物,分别腹腔接种副猪嗜血杆菌FS0307株、XX0306株和HS1079株,观察临床症状和死亡情况,并进行Hps的再分离和血清抗体检测。结果显示,2株副猪嗜血杆菌分离株均能引起豚鼠和Balb/c小鼠100%发病,以及对豚鼠和小鼠的致死率均分别达到100%和20%;标准株HS1079株能引起豚鼠和Balb/c小鼠100%发病,并对豚鼠有80%的致死率,而不致死小鼠。可见,副猪嗜血杆菌FS0307株、XX0306株和HS1079株的致病力均较强,这为副猪嗜血杆菌病疫苗的研究提供了可靠的技术参数。

关键词：副猪嗜血杆菌致病力豚鼠 Balb/c小鼠

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后备母猪入群前的抗体筛查在某规模化猪场的应用

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江苏农业科学 2015年第12期43卷 249-250页

作者：赵永前孙华伟何孔旺茅爱华蒋晨慧张敬峰江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了探索后备猪入群前进行猪瘟和猪伪狂犬病毒gp I(野毒)抗体的筛查在猪场实际生产中对初产母猪生产成绩的影响,2014年5月对安徽省和县某规模化猪场的36头后备母猪随机等分为2组,试验组在入群前进行上述2种抗体的检测,对猪瘟抗体不合格... 详细信息

为了探索后备猪入群前进行猪瘟和猪伪狂犬病毒gp I(野毒)抗体的筛查在猪场实际生产中对初产母猪生产成绩的影响,2014年5月对安徽省和县某规模化猪场的36头后备母猪随机等分为2组,试验组在入群前进行上述2种抗体的检测,对猪瘟抗体不合格、猪伪狂犬gp I抗体阳性的后备猪不予入群,试验组不进行检测直接入群。待此批后备母猪妊娠结束,试验组和对照组的窝平活健仔数分别为10.42、9.78头;28日龄平均断奶质量分别为6.94、6.49 kg,差异显著;断奶育成率分别为98.63%、96.02%,差异不显著。在后备母猪入群前进行猪瘟和猪伪狂犬gp I的抗体筛查能显著提高初产母猪的窝平活健仔数、平均断奶质量。

关键词：猪瘟抗体伪狂犬病病毒初产母猪

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1株猪源乙型脑炎病毒株的免疫原性研究

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江苏农业科学 2015年第11期43卷 306-308页

作者：唐波张道华张雪花常晨刘国阳华涛侯继波江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心/江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014

将从江苏地区筛选出的1株增殖性能稳定猪源JEV JS01毒株作为疫苗,用毒株制备灭活疫苗进行免疫原性研究。试验采用经过细胞传代获得JEV JS01病毒液(1×10^(7.5)TCID50/m L),以甲醛灭活后加入油佐剂,制备猪源乙型脑炎灭活疫苗。腹腔免... 详细信息

将从江苏地区筛选出的1株增殖性能稳定猪源JEV JS01毒株作为疫苗,用毒株制备灭活疫苗进行免疫原性研究。试验采用经过细胞传代获得JEV JS01病毒液(1×10^(7.5)TCID50/m L),以甲醛灭活后加入油佐剂,制备猪源乙型脑炎灭活疫苗。腹腔免疫9~12 g小鼠,攻毒保护结果显示对照组小鼠全部死亡,免疫组90%以上健活。分别肌肉注射免疫仔猪及后备母猪,不同时间采集血清测定JEV ELISA抗体。检测结果显示,免疫后试验猪血清抗体效价较免疫前均有显著提高,后备母猪免疫8个月后抗体仍全部为阳性,抗体水平与免疫剂量呈正相关性。试验表明该猪源乙脑病毒JS01毒株具有良好的免疫原性,可以用作疫苗用毒株。

关键词：猪源乙型脑炎病毒免疫原性灭活疫苗

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山羊源副流感病毒3型JS2013株HN基因的原核表达与抗原性分析

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中国兽医科学 2015年第6期45卷 596-601页

作者：邓加武李文良毛立杨蕾蕾张纹纹魏建忠江杰元安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

参考GenBank中牛副流感病毒3型(BPIV3)内蒙古09株(NM09)全基因组序列(GenBank登录号:JQ063064),设计了1对特异性引物以扩增山羊源副流感病毒3型(PIV3)JS2013株HN基因部分序列;将扩增到的基因测序后进行同源性分析。同源性分析结果表明,... 详细信息

参考GenBank中牛副流感病毒3型(BPIV3)内蒙古09株(NM09)全基因组序列(GenBank登录号:JQ063064),设计了1对特异性引物以扩增山羊源副流感病毒3型(PIV3)JS2013株HN基因部分序列;将扩增到的基因测序后进行同源性分析。同源性分析结果表明,它与已报道的HPIV3、BPIV3 HN基因的序列同源性最高,分别为74.3%、79.8%。进化树分析表明,JS2013株并不属于HPIV3与BPIV3,形成一个独立的分支。将HN基因片段克隆至原核表达载体pET-32a(+),获得原核重组质粒pET-32a(+)-HN。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态菌株中,经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE与Western-blot试验分析表明,重组蛋白诱导表达成功,并以包涵体形式存在,大小为46ku。经Western-blot试验验证,重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备的超免疫血清能够与重组蛋白反应;把病毒接种给MDBK细胞后,间接免疫荧光试验表明重组蛋白的多克隆抗体与病毒产生特异性荧光反应,表明该重组蛋白具有很好的免疫原性和反应原性。本试验结果为山羊源副流感病毒3型感染诊断方法的建立和疫苗的研制奠定了基础。

关键词：山羊副流感病毒3型 HN基因原核表达抗原性分析

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携带口蹄疫病毒B细胞表位的兔出血症病毒样颗粒的表达及其免疫原性研究

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华北农学报 2015年第1期30卷 142-149页

作者：盛蓉宋艳华胡波范志宇姜平薛家宾魏后军王芳江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为了研究RHDV病毒样粒子作为载体提呈外源B细胞表位的能力，以兔出血症病毒（ RHDV ）衣壳蛋白VP60为载体，构建携带FMDV B细胞表位（ FMDV VP1 B细胞表位200～213 aa ）的VP60嵌合蛋白，研究外源基因对VP60蛋白的表达、病毒样颗粒（ V... 详细信息

为了研究RHDV病毒样粒子作为载体提呈外源B细胞表位的能力，以兔出血症病毒（ RHDV ）衣壳蛋白VP60为载体，构建携带FMDV B细胞表位（ FMDV VP1 B细胞表位200～213 aa ）的VP60嵌合蛋白，研究外源基因对VP60蛋白的表达、病毒样颗粒（ VLPs）的装配及免疫原性的影响。分别在RHDV衣壳蛋白的C端、N端、306和307位氨基酸之间插入外源B细胞表位（ FMDV VP1 B细胞表位200～213 aa ），得到嵌合VP60基因。利用杆状病毒表达系统表达嵌合蛋白，分别命名为VP60-2F、VP60-306F和VP60-578F。经IFA、SDS-PAGE和Western Blot方法鉴定嵌合蛋白的表达，通过电镜观察嵌合蛋白自聚为病毒样颗粒的能力，通过动物试验研究其免疫原性。结果显示，嵌合VP60蛋白在杆状病毒表达系统中得到高效表达，可自聚形成病毒样颗粒，免疫小鼠后可以产生针对VP60和B细胞表位特异的免疫应答。该研究为嵌合VP60 VLPs的形成及结构功能的研究奠定基础，同时为RHDV-VLPs作为外源B细胞表位展示载体的可行性提供依据。

关键词：兔出血症病毒病毒样颗粒口蹄疫病毒 B细胞表位载体

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