检索结果-内蒙古大学图书馆

江苏农业学报 2013年第2期29卷 341-345页

作者：李文良毛立张纹纹杨蕾蕾王小敏江杰元江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为获得糖基化的重组猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白,通过PCR扩增出去除C端跨膜区的猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)E2蛋白基因,前面包含糖基化信号肽,末端引入StrepⅡ标签序列,将其克隆到Bac-to-Bac杆状病毒表达系统pFastBacTMHT B载体中,筛选获得阳性... 详细信息

为获得糖基化的重组猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白,通过PCR扩增出去除C端跨膜区的猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)E2蛋白基因,前面包含糖基化信号肽,末端引入StrepⅡ标签序列,将其克隆到Bac-to-Bac杆状病毒表达系统pFastBacTMHT B载体中,筛选获得阳性重组质粒pF-ge2,转化至含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态大肠杆菌中,经蓝白菌落筛选和PCR鉴定,获得重组表达载体rBac-ge2。在脂质体介导下转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rAc-gE2。Western-blot试验结果表明,重组蛋白得到正确表达,具有良好的抗原性;用糖苷酶PNGase F处理后重组蛋白分子量减小到40 000,证明重组蛋白为糖基化蛋白。这为进一步研究E2蛋白的功能及CSFV新型亚单位疫苗的开发奠定了基础。

关键词：猪瘟病毒 E2蛋白糖基化杆状病毒表达系统

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快速检测志贺毒素2基因的LAMP方法的建立

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江苏农业学报 2013年第2期29卷 455-457页

作者：张雪寒何孔旺叶青李彬倪艳秀温立斌王小敏周俊明江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

志贺毒素（Shigatoxin，Stx）又称Vero毒素，是产志贺毒素大肠杆菌（Shiga toxin-producing Ecoli，STEC）重要毒力因子之一，具有细胞毒性、肠毒性、神经毒性作用，是导致被感染者出现严重症状甚至死亡的主要原因，因此，有必要建立敏... 详细信息

志贺毒素（Shigatoxin，Stx）又称Vero毒素，是产志贺毒素大肠杆菌（Shiga toxin-producing Ecoli，STEC）重要毒力因子之一，具有细胞毒性、肠毒性、神经毒性作用，是导致被感染者出现严重症状甚至死亡的主要原因，因此，有必要建立敏感而快速的检测Stx方法。细菌培养方法需要耗费3d，而快速检测方法如ELISA需要高浓度的病原菌才能检测到。

关键词：环介导恒温扩增技术 stx2基因快速检测

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鸡源坦布苏病毒(SN01株)的分离与鉴定

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浙江农业学报 2013年第5期25卷 957-960页

作者：张敬峰李银赵冬敏黄欣梅刘宇卓钮惠敏江苏省农业科学院兽医研究所.农业部兽用生物制品工程技术重点实验室.国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

采用SPF鸡胚与vero细胞传代接种法,从江苏某蛋鸡场临床表现为产蛋下降、卵泡萎缩、全身多器官出血为主要特征的发病鸡肝脏、卵巢病料组织中分离一株病毒。该分离毒不能凝集鸡和鹅红细胞,并对乙醚、氯仿敏感;病毒核酸为RNA;PCR结果排除... 详细信息

采用SPF鸡胚与vero细胞传代接种法,从江苏某蛋鸡场临床表现为产蛋下降、卵泡萎缩、全身多器官出血为主要特征的发病鸡肝脏、卵巢病料组织中分离一株病毒。该分离毒不能凝集鸡和鹅红细胞,并对乙醚、氯仿敏感;病毒核酸为RNA;PCR结果排除了分离毒为禽流感病毒、新城疫病毒、产蛋下降综合征病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒;用坦布苏病毒特异引物扩增为阳性,序列测定与分析结果显示分离毒与GenBank上登录和实验室保存的坦布苏病毒E基因序列同源性在99%以上。上述结果表明分离毒(SN01)可能是一种新的坦布苏病毒,属于黄病毒科坦布苏病毒属,暂称为鸡源坦布苏病毒。

关键词：鸡坦布苏病毒 SN01株鉴定

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猪博卡病毒VP2基因的克隆与原核表达

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江苏农业学报 2013年第4期29卷 796-799页

作者：李彬杜露平何孔旺温立斌茅爱华张雪寒倪艳秀郭容利王小敏周俊明吕立新俞正玉胡屹屹于洋江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为研究猪博卡病毒VP2蛋白的功能及其在疫病诊断中的作用,对其基因进行了克隆和原核表达。根据猪博卡病毒基因组序列(GenBank登录号GU902967-GU902971)设计了1对引物,采用PCR方法扩增猪博卡病毒的VP2基因,并将其克隆到表达载体pET32a(+)... 详细信息

为研究猪博卡病毒VP2蛋白的功能及其在疫病诊断中的作用,对其基因进行了克隆和原核表达。根据猪博卡病毒基因组序列(GenBank登录号GU902967-GU902971)设计了1对引物,采用PCR方法扩增猪博卡病毒的VP2基因,并将其克隆到表达载体pET32a(+)中,构建重组质粒pET32a-VP2,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),并进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌可表达分子量为49 000的融合蛋白,蛋白质表达量较高,且以可溶性形式存在于菌体中。表达产物经纯化后,目的蛋白纯度较好。Western blot结果显示,表达的VP2蛋白能与His抗体发生特异性免疫反应。说明该试验成功克隆了猪博卡病毒的VP2基因并进行了原核表达,为研究该蛋白的功能及建立血清学诊断方法奠定了基础。

关键词：猪博卡病毒 VP2 基因克隆原核表达

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4株猪肺炎支原体脂膜蛋白对猪肺泡上皮细胞生长抑制作用的比较

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畜牧兽医学报 2013年第8期44卷 1283-1287页

作者：倪博白方方韦艳娜刘茂军冯志新熊祺琰魏建忠邵国青安徽农业大学动物科技学院合肥230036 江苏省农业科学院兽医研究所.农业部兽用生物制品工程技术重点实验室.国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

比较不同毒力猪肺炎支原体的脂膜蛋白(LAMPs)对猪肺泡上皮细胞生长抑制作用的差异。使用Trion-X114从猪肺炎支原体培养物中提取LAMPs,采用MTT法检测LAMPs对细胞生长的抑制率,观察其对细胞生长状况的影响,并使用Griess试剂对细胞培养物... 详细信息

比较不同毒力猪肺炎支原体的脂膜蛋白(LAMPs)对猪肺泡上皮细胞生长抑制作用的差异。使用Trion-X114从猪肺炎支原体培养物中提取LAMPs,采用MTT法检测LAMPs对细胞生长的抑制率,观察其对细胞生长状况的影响,并使用Griess试剂对细胞培养物中NO的浓度变化进行测定。结果表明,4株猪肺炎支原体的LAMPs均对猪肺泡上皮细胞SJPL有抑制作用,其抑制作用的强度与猪肺炎支原体的毒力强弱基本相符,即NJ株与168株的抑制作用较强,而168致弱株及J株对SJPL细胞的抑制作用较弱。其中,NJ株的IC50最低,为0.13mg·mL-1;而J株的IC50最高,为0.56mg·mL-1,并且LAMPs可以诱导细胞产生NO。猪肺炎支原体LAMPs对猪肺泡上皮细胞的抑制作用与支原体的毒力相关,强毒株LAMPs的抑制作用较大,而弱毒株的抑制作用较小。

关键词：猪肺炎支原体 LAMPs 细胞抑制 NO

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弓形虫重组MIC3蛋白间接ELISA检测方法的建立

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中国兽医科学 2013年第7期43卷 738-743页

作者：白昀王海燕张悦姚景霆吴叙苏刘冬霞邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京天邦生物科技有限公司江苏南京211102

为检测弓形虫特异性抗体,以纯化的重组MIC3蛋白作为包被抗原,用羊抗猪IgG-HRP作为酶标二抗,分别对抗原浓度、血清稀释度、酶标二抗稀释度以及作用时间等进行了优化,初步建立了检测弓形虫特异性抗体的间接ELISA方法。结果显示,该方法检... 详细信息

为检测弓形虫特异性抗体,以纯化的重组MIC3蛋白作为包被抗原,用羊抗猪IgG-HRP作为酶标二抗,分别对抗原浓度、血清稀释度、酶标二抗稀释度以及作用时间等进行了优化,初步建立了检测弓形虫特异性抗体的间接ELISA方法。结果显示,该方法检测猪球虫、猪肺炎支原体、猪圆环病毒2型、副猪嗜血杆菌等阳性血清均为阴性,表明该方法具有良好的特异性。组内和组间重复性试验的变异系数均小于8%,表明该方法具有较好的重复性。应用所建立的ELISA方法和商品化试剂盒A(IHA)、B(ELISA)同时检测从南京某猪场采集的猪血清样品166份,符合率分别可达94.58%和95.78%。该方法为我国进行弓形虫病的诊断与流行病学调查提供了一种技术手段,并为试剂盒的研制与开发奠定了前期工作基础。

关键词：刚地弓形虫 MIC3蛋白酶联免疫吸附试验抗体检测

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猪肺炎支原体感染早期诱导猪呼吸道产生多种特异性IgA抗体分泌规律研究

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畜牧兽医学报 2013年第5期44卷 767-771页

作者：姚景霆冯志新刘茂军熊祺琰白方方华利忠王海燕甘源韦艳娜邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 山西农业大学动物科技学院太谷030801

为了研究猪感染猪肺炎支原体早期,呼吸道针对病原不同功能蛋白分泌特异性IgA抗体的差异与规律,本研究通过已建立的猪肺炎支原体各蛋白的特异性IgA间接ELISA方法,分别检测7头试验猪在感染后第1、2、4、6、8、12、16和21天鼻拭子中抗P36、... 详细信息

为了研究猪感染猪肺炎支原体早期,呼吸道针对病原不同功能蛋白分泌特异性IgA抗体的差异与规律,本研究通过已建立的猪肺炎支原体各蛋白的特异性IgA间接ELISA方法,分别检测7头试验猪在感染后第1、2、4、6、8、12、16和21天鼻拭子中抗P36、P46、P97R1的特异性IgA抗体滴度,并经过样品总蛋白浓度校准后,比较3种特异性IgA抗体在感染后21d内的分泌规律。结果显示,在感染后第6天,呼吸道中抗猪肺炎支原体P36、P46、P97R1的3种特异性IgA抗体分泌量均开始上升,于感染后第12天达到高峰,并可持续到第21天,且同1d内3种特异性IgA抗体之间的分泌量差异不显著(P>0.05)。本研究说明在猪肺炎支原体感染的早期阶段,P36、P46、P97R1蛋白均可诱发猪呼吸道产生特异性IgA抗体,且分泌量与分泌规律较为相似,差异不显著。

关键词：猪肺炎支原体呼吸道 IgA 分泌规律

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猪弓形虫重组MIC3蛋白单克隆抗体的制备及其初步应用

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畜牧兽医学报 2013年第10期44卷 1622-1628页

作者：白昀王海燕王占伟纪燕吴叙苏刘冬霞邵国青江苏省农业科学院兽医研究所.农业部兽用生物制品工程技术重点实验室.国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京天邦生物科技有限公司南京211102 南京农业大学南京210095

为获得针对猪弓形虫MIC3蛋白的单克隆抗体,为进一步研制免疫金标试纸条提供材料,作者以纯化的重组MIC3蛋白免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备单克隆抗体(McAb)。经ELISA筛选阳性克隆和亚克隆建株,体内诱生腹水法制备McAb,测定其亚类、... 详细信息

为获得针对猪弓形虫MIC3蛋白的单克隆抗体,为进一步研制免疫金标试纸条提供材料,作者以纯化的重组MIC3蛋白免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备单克隆抗体(McAb)。经ELISA筛选阳性克隆和亚克隆建株,体内诱生腹水法制备McAb,测定其亚类、效价,进行Western blot分析,并利用胶体金颗粒标记的McAb制备免疫金标试纸条。成功制备了2株稳定分泌抗MIC3蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株B7和D3,2株McAb的免疫球蛋白亚类均为IgG2a,其ELISA腹水效价分别为1∶64万和1∶192万,Western blot结果表明,2株McAbs腹水均能分别与纯化的重组MIC3蛋白和猪弓形虫全虫蛋白中大小为56和38ku左右的蛋白发生特异性反应;用纯化后McAb标记的胶体金颗粒制备的免疫金标试纸条可以检测到最低浓度为4×104 CFU·mL-1的弓形虫速殖子。本研究为猪弓形虫病的现场诊断提供了有效的方法,显示出很好的临床应用前景。

关键词：岗地弓形虫 MIC3蛋白单克隆抗体胶体金

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鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因密码子的优化及其在大肠杆菌中的表达

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中国兽医科学 2013年第3期43卷 271-276页

作者：潘群兴朱向东欧阳伟王晓丽夏兴霞毕振威诸玉梅董晨红王永山江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为了提高鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因在大肠杆菌中的表达量,分析近期引起安徽免疫失败IBD病例中分离的强毒分离株AH1株的VP2基因,发现有49个稀有密码子,其中编码Arg(R)的有16个,编码Gly(G)的有6个。编码精氨酸的AGG(AGA)2个稀有... 详细信息

为了提高鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因在大肠杆菌中的表达量,分析近期引起安徽免疫失败IBD病例中分离的强毒分离株AH1株的VP2基因,发现有49个稀有密码子,其中编码Arg(R)的有16个,编码Gly(G)的有6个。编码精氨酸的AGG(AGA)2个稀有密码子紧密相连(R区),另外还有2个相对比较集中的GGG密集区(G区)。根据大肠杆菌密码子使用频率对IBD强毒分离株(AH1株)VP2基因进行改造并合成优化基因,命名为mVP2。将mVP2基因分别克隆到pET-32a及pBV220原核表达质粒,构建了含密码子优化型IBDV VP2基因的原核表达质粒pET32-VP2和pBV220-VP2。SDS-PAGE结果显示,优化基因mVP2在大肠杆菌中的表达较野生型基因有十分显著的提高。Western-blot检测到目的蛋白能够与鸡抗IBDV超免疫血清反应。本研究为开展VP2基因结构与功能的深入研究及IBD免疫预防和快速诊断奠定了理论基础。

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒 VP2 密码子优化表达

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一株H1N1亚型猪流感病毒的分离鉴定及生物学特性分析

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中国预防兽医学报 2013年第7期35卷 521-525页

作者：白昀冯志新甘源刘占军张旭韦艳娜马庆红邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京天邦生物科技有限公司江苏南京211102

为调查南京地区猪流感流行情况,本研究于2011年2月～5月期间从南京某屠宰场采集健康猪的鼻拭子和肺脏组织样品共690份,常规无菌处理后进行RT-PCR检测,将检测为阳性的样品接种9日龄～11日龄SPF鸡胚分离猪流感病毒(SIV)。对分离株进行血... 详细信息

为调查南京地区猪流感流行情况,本研究于2011年2月～5月期间从南京某屠宰场采集健康猪的鼻拭子和肺脏组织样品共690份,常规无菌处理后进行RT-PCR检测,将检测为阳性的样品接种9日龄～11日龄SPF鸡胚分离猪流感病毒(SIV)。对分离株进行血凝试验、EID50测定、HA及NA基因测序分析和感染小鼠及猪体试验。结果有18份样品RT-PCR显示为SIV阳性,但只有一株可在SPF鸡胚中稳定增殖。该病毒分离株具有凝集0.5%鸡红细胞的活性,EID50为10-6.32/0.1 mL,基因测序显示其HA、NA基因片段均与09年H1N1型流感流行株A/California/04/2009(H1N1)高度同源,将其命名为A/Swine/Nanjing/50/2011(H1N1)。小鼠人工感染试验表明该分离株可引起小鼠死亡(3/10),猪体人工感染实验显示该分离株还能够引发猪体明显的流感症状及肺部病变。该病毒的分离鉴定及HA、NA基因序列分析为进一步调查SIV的流行规律提供了基础数据。

关键词：猪流感病毒 H1N1亚型分离鉴定 HA基因 NA基因

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