检索结果-内蒙古大学图书馆

江苏农业学报 2012年第2期28卷 337-343页

作者：张雪寒何孔旺赵攀登栾晓婷叶青温立斌倪艳秀李彬郭容利王小敏周俊明俞正玉茅爱华吕立新江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了明确肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157∶H7大质粒pO157编码的蛋白质ToxB与O157∶H7在肠道黏附、定殖的关系,构建含有toxB基因同源臂的重组自杀性质粒pMEG375-BN-Kan-BC,转化SM10宿主菌获得重组SM10(pMEG375-BN-Kan-BC)。将SM10(pMEG375-BN-Kan-BC)与O157∶H7进行混合培养,通过同源重组,获得杂交toxB基因缺失株。用体外接种的HEp-2细胞和体内感染链霉素处理的小鼠,明确缺失株黏附定殖能力。经PCR和Western blot鉴定,toxB基因被卡那霉素(Kan+)选择标记基因表达盒所代替。O157∶H7(△toxB)生长特性与亲本株相比无明显差异。O157∶H7(△toxB)与亲本株相比,对HEp-2细胞的黏附能力降低了2倍。口服感染小鼠后,O157∶H7(△toxB)第3 d粪便排菌量仅为3.1×105 CFU,持续排菌11 d;而亲本株排菌量高达4.03×107 CFU,持续排菌时间超过14 d。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157∶H7 toxB基因缺失株小鼠黏附

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猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立与应用

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动物医学进展 2012年第5期33卷 8-13页

作者：李文良毛立江杰元李彬茅爱华甘源江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

采用RT-PCR方法扩增猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白主要抗原区基因,克隆入原核表达载体pET32a(+),转化大肠埃希菌BL21构建重组表达菌,经SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白得到成功表达。利用纯化的重组蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化,建立... 详细信息

采用RT-PCR方法扩增猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白主要抗原区基因,克隆入原核表达载体pET32a(+),转化大肠埃希菌BL21构建重组表达菌,经SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白得到成功表达。利用纯化的重组蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化,建立了间接ELISA抗体检测方法。ELISA抗原最适包被浓度为0.5μg/mL(0.05μg/孔),最佳封闭液为5g/L BSA,待检血清最适稀释度为1∶100,作用时间为1h,酶标抗体最适稀释度为1∶2 000,最适作用时间为45min,室温显色10min。用该方法检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)阳性血清结果均为阴性;批内和批间重复试验变异系数分别<5%和<8%,表明本方法具有较好的特异性和重复性。应用△E2-ELISA对350份血清样品进行检测,阳性率为77.71%,高于IDEXX试剂盒检测阳性率(67.14%),与IDEXX试剂盒阳性符合率91.06%,阴性符合率50%,总符合率77.43%。表明本试验建立的间接ELISA方法适于临床CSFV血清抗体的检测。

关键词：猪瘟病毒 E2 原核表达间接ELISA

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流行病学模型及建模步骤

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动物医学进展 2012年第7期33卷 104-108页

作者：谭业平臧一天胡肄农陆昌华江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

流行病学模型可作为动物疫病风险评估及防控策略制定的有力工具。论文介绍了流行病学模型的定义及其在动物疫病管理决策中的应用,讨论了模型的分类及建模的方法,重点阐述了动物疫病流行病学模型的构建步骤,包括建模系统和研究目标的确... 详细信息

流行病学模型可作为动物疫病风险评估及防控策略制定的有力工具。论文介绍了流行病学模型的定义及其在动物疫病管理决策中的应用,讨论了模型的分类及建模的方法,重点阐述了动物疫病流行病学模型的构建步骤,包括建模系统和研究目标的确定、动物群体和疫病流行病学数据信息的收集、概念模型的构建、概念模型的确认、概念模型的公式化或编程、模型的验证、运行有效性的评估、敏感性分析、执行研究、输出结果的解释和交流。提出了一些建模的基本准则和应该着重考虑的问题,以期为动物疫病流行病学模型和风险评估预警研究提供参考。

关键词：动物疫病流行病学模型

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猪瘟病毒Taqman实时定量RT-PCR检测方法的建立和临床应用

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江苏农业学报 2012年第4期28卷 783-786页

作者：毛立李文良李彬江杰元江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

根据猪瘟病毒5'非编码区(5'-UTR)设计特异性引物和Taqman探针,建立Taqman实时定量RT-PCR检测猪瘟病毒法。检测结果显示,该方法的灵敏度为1μl 10拷贝,在病毒拷贝数为1μl 108～101时,循环数(Ct)值与拷贝数对数呈现较好的线性关... 详细信息

根据猪瘟病毒5'非编码区(5'-UTR)设计特异性引物和Taqman探针,建立Taqman实时定量RT-PCR检测猪瘟病毒法。检测结果显示,该方法的灵敏度为1μl 10拷贝,在病毒拷贝数为1μl 108～101时,循环数(Ct)值与拷贝数对数呈现较好的线性关系,且重复性好,批间变异系数小于1%。用该方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、牛病毒性腹泻病毒,结果均为阴性。用该方法检测采集自江苏和新疆的192份组织和血清样品,猪瘟病毒阳性率为71.9%;检测感染猪的不同脏器,发现在心、肺、肝、肾、脑、脾脏、淋巴结、腹水中均可以检测到猪瘟病毒,与常规RT-PCR方法相比,该方法敏感性更高。该方法的建立为猪瘟病毒的流行病学调查和定量提供了有效手段。

关键词：猪瘟病毒实时定量RT-PCR 临床应用

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猪肺炎支原体黏附宿主细胞间接免疫荧光检测方法的建立

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江苏农业学报 2012年第5期28卷 1069-1073页

作者：车巧林熊祺琰冯志新张旭刘茂军邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了建立一种用间接免疫荧光技术检测猪肺炎支原体黏附宿主细胞的方法。以抗猪肺炎支原体单克隆抗体为一抗,异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗小鼠IgG为二抗,通过对一抗、二抗工作浓度的优化确定合适的抗体浓度;通过以1×107CCU/ml猪... 详细信息

为了建立一种用间接免疫荧光技术检测猪肺炎支原体黏附宿主细胞的方法。以抗猪肺炎支原体单克隆抗体为一抗,异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗小鼠IgG为二抗,通过对一抗、二抗工作浓度的优化确定合适的抗体浓度;通过以1×107CCU/ml猪肺炎支原体与PK15细胞作用不同时间,确定其黏附细胞需要的时间;通过不同滴度的猪肺炎支原体与PK15细胞37℃作用4 h,确定其黏附细胞需要的滴度。猪肺炎支原体单克隆抗体P463G11的最适工作浓度为1∶1 000倍稀释,FITC-羊抗小鼠IgG的最适工作浓度为1∶200倍稀释,猪肺炎支原体黏附PK15细胞需要的时间为4 h以上,黏附PK15细胞需要的滴度为1×105CCU/ml以上。表明间接免疫荧光技术可以用来检测猪肺炎支原体对宿主细胞的黏附作用。

关键词：猪肺炎支原体黏附间接免疫荧光

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一种新的反刍动物布尼亚病毒——施马伦贝格病毒

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江苏农业科学 2012年第11期40卷 236-237页

作者：李文良毛立江杰元江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

最近欧洲疾病预防与控制中心等机构连续报道在德国、荷兰、比利时、法国、英国的牛、绵羊、山羊等反刍动物中发现一种新的病毒病流行,其病原为施马伦贝格病毒。文章根据相关报道从病原的鉴定、流行病学、检测方法和防控等方面对该病毒... 详细信息

最近欧洲疾病预防与控制中心等机构连续报道在德国、荷兰、比利时、法国、英国的牛、绵羊、山羊等反刍动物中发现一种新的病毒病流行,其病原为施马伦贝格病毒。文章根据相关报道从病原的鉴定、流行病学、检测方法和防控等方面对该病毒进行简要介绍,以引起有关部门高度重视,建立相应的检测方法和防控措施,防止该病在我国发生和流行。

关键词：施马伦贝格病毒布尼亚病毒反刍动物

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禽黄病毒套式RT-PCR检测方法的建立及应用

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畜牧与兽医 2012年第6期44卷 1-4页

作者：黄欣梅赵冬敏刘宇卓张敬峰韩凯凯李银江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

禽黄病毒病是新发的一种疫病,可引起鸭、鹅和鸡等家禽产蛋和采食量下降及死亡。本研究旨在建立一种快速诊断方法用于临床诊断及流行病学调查。根据GenBank发表的鹅黄病毒JS804株全基因序列,应用Primer Premier 5.0软件设计了2对特异性引... 详细信息

禽黄病毒病是新发的一种疫病,可引起鸭、鹅和鸡等家禽产蛋和采食量下降及死亡。本研究旨在建立一种快速诊断方法用于临床诊断及流行病学调查。根据GenBank发表的鹅黄病毒JS804株全基因序列,应用Primer Premier 5.0软件设计了2对特异性引物,建立了禽黄病毒套式RT-PCR检测方法。结果:该套式RT-PCR方法具有特异性强、敏感性高的特点,最低病毒检测量为101.89TCID50/0.1 mL,比普通RT-PCR方法敏感性高1 000倍。应用该方法对江苏地区疑似禽黄病毒病的70份鹅病料、4份鸭病料、12份鸡病料进行检测,总阳性率为58.14%,而用普通RT-PCR方法检测的阳性率仅为17.44%。结果表明,禽黄病毒套式RT-PCR检测方法具有快速、特异、敏感的特点,可用于禽黄病毒感染的临床诊断和流行病学调查。

关键词：禽黄病毒套式RT.PCR 检测

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兽医科学研究中的样品采集方法及其最新进展

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中国畜牧兽医 2012年第10期39卷 242-246页

作者：王占伟邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

样品采集是兽医科学研究中必不可少的环节。以中华人民共和国农业行业标准《动物疫病实验室检验采样方法》为基础,结合临床实践和研究经历,介绍了基于不同研究目的和内容的样品采集种类、数量和操作,以及样品收装、保存和处理方法,重点... 详细信息

样品采集是兽医科学研究中必不可少的环节。以中华人民共和国农业行业标准《动物疫病实验室检验采样方法》为基础,结合临床实践和研究经历,介绍了基于不同研究目的和内容的样品采集种类、数量和操作,以及样品收装、保存和处理方法,重点概述了国内外关于采样方法的最新进展,从而为今后的兽医科学研究提供参考。

关键词：兽医研究采样方法样品进展

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兔支气管败血波氏杆菌PRN基因缺失突变株的构建及特性研究

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畜牧兽医学报 2012年第2期43卷 299-305页

作者：李洪广王芳姜平范志宇胡波江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京农业大学动物医学院南京210095

利用自杀性质粒构建兔支气管败血波氏杆菌百日咳黏附素(PRN)缺失突变株以研究PRN在支气管败血波氏杆菌(Bb)致病机理中的作用,同时为支气管败血波氏杆菌病减毒活疫苗的研究提供理论依据。PCR扩增出PRN1(PRN上游基因)和PRN2(PRN下游基因)... 详细信息

利用自杀性质粒构建兔支气管败血波氏杆菌百日咳黏附素(PRN)缺失突变株以研究PRN在支气管败血波氏杆菌(Bb)致病机理中的作用,同时为支气管败血波氏杆菌病减毒活疫苗的研究提供理论依据。PCR扩增出PRN1(PRN上游基因)和PRN2(PRN下游基因)2个目的基因片段,运用基因重组技术将庆大霉素抗性基因(GM)连接到PRN1和PRN2之间,将连接好的基因片段克隆到pMEG-375自杀性载体中,构建自杀性载体pMEG375-PRN1-GM-PRN2,将其转化到宿主菌SM-10中,通过宿主菌SM-10与受体菌Bb固相滤膜交配,自杀性载体转移到受体菌,根据同源重组原理,抗性筛选得到基因缺失突变株,命名为Bb(△PRN)。对突变株Bb(△PRN)与野生株WT进行了遗传稳定性、生长特性、溶血特性、细胞黏附特性、毒力、免疫保护性等比较研究。结果表明:Bb(△PRN)具有遗传稳定性;与野生株相比,突变株生长速度较慢,毒力有所下降,溶血活性及对Hep-2细胞的黏附能力没有明显变化;小鼠免疫原性试验结果显示,突变株免疫小鼠后可以产生强有力的免疫力,能够抵抗野生株的攻击。Bb(△PRN)突变株构建成功并具有良好的免疫原性,为支气管败血波氏杆菌病减毒活疫苗的研究奠定了基础。

关键词：兔支气管败血波氏杆菌百日咳杆菌黏附素基因缺失生物学特性免疫原性

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应用噬菌体展示技术筛选兔出血症病毒抗原模拟表位

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畜牧兽医学报 2012年第8期43卷 1281-1286页

作者：杨廷亚王芳姜平胡波范志宇魏后军薛家宾江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京农业大学动物医学院南京210095

以抗兔出血症病毒(RHDV)的单克隆抗体A3c作为靶物质,应用噬菌体展示技术筛选RHDV抗原表位。将纯化的单抗A3c包被固相载体,经3轮亲和筛选后,挑取25株噬菌体单克隆并扩增,用ELISA测定后,提取阳性克隆单链DNA并测序,用阳性噬菌体克隆免疫... 详细信息

以抗兔出血症病毒(RHDV)的单克隆抗体A3c作为靶物质,应用噬菌体展示技术筛选RHDV抗原表位。将纯化的单抗A3c包被固相载体,经3轮亲和筛选后,挑取25株噬菌体单克隆并扩增,用ELISA测定后,提取阳性克隆单链DNA并测序,用阳性噬菌体克隆免疫小鼠制备高免血清,检测筛选抗原表位的免疫原性。结果表明:3轮亲和筛选后,特异性噬菌体克隆得到了有效富集,25株噬菌体单克隆中有19株为阳性克隆;测序结果表明,获得了与抗原高度同源的序列GTDDMDPGTTAA,即抗原的模拟表位,其中,氨基酸基序DXXDP为表位中的核心氨基酸;制备的小鼠高免血清与抗原具有较好的反应性,阳性噬菌体克隆与兔RHDV高免血清也具有较好的反应性。因此,该表位具有良好的免疫原性和反应原性。该研究为RHDV抗原表位的研究和新型疫苗的探索积累了资料。

关键词：兔出血症病毒单克隆抗体噬菌体展示技术模拟表位

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