检索结果-内蒙古大学图书馆

江苏农业学报 2017年第2期33卷 -页

作者：毕可然韩凯凯李银刘青涛赵冬敏刘宇卓黄欣梅杨婧江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了获得樱桃谷鸭寡腺苷酸合成酶样蛋白质基因(OASL)全长cDNA,并且初步了解其生物学特性,采用RT-PCR和RACE方法从鸭脾脏组织总RNA中扩增OASL基因cDNA片段,应用生物信息学方法,系统分析鸭OASL的遗传进化以及蛋白质的理化性质、二级结构... 详细信息

为了获得樱桃谷鸭寡腺苷酸合成酶样蛋白质基因(OASL)全长cDNA,并且初步了解其生物学特性,采用RT-PCR和RACE方法从鸭脾脏组织总RNA中扩增OASL基因cDNA片段,应用生物信息学方法,系统分析鸭OASL的遗传进化以及蛋白质的理化性质、二级结构和亚细胞定位。结果表明,樱桃谷鸭OASL基因(Gen Bank登录号:KX255654)全长1 630 bp,其中包含19 bp的5'UTR(Untranslated region,UTR)、99 bp的3'UTR(Untranslated region,UTR)和PolyA尾巴、1 512 bp的编码区(Coding region,CDS),翻译编码504个氨基酸多肽。鸭OASL蛋白具有寡腺苷酸合成酶(OAS)蛋白家族的典型特征,即N端为寡腺苷酸合成酶样结构域(OAS-like domain,OLD),C端为2个串联的泛素化样结构域(Ubiquitin-like domains,Ub LDs),不具有信号肽和跨膜区。序列比对和系统进化分析结果表明,OASL氨基酸序列在同种之间比较保守,与已报道的鸭OASL的同源性高达100%,与鹅同源性为78%,与人、鼠和猪等哺乳动物的同源性仅为43%~45%。

关键词：樱桃谷鸭 OASL基因 RACE 生物信息学分析

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鸭viperin基因的克隆、表达及Viperin蛋白的抗病毒活性

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江苏农业学报 2017年第5期33卷 1099-1104页

作者：韩凯凯李文良李银毕可然刘宇卓刘青涛赵冬敏杨婧黄欣梅江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

Viperin蛋白是一种由Ⅰ型和Ⅱ型干扰素诱导的宿主蛋白,广泛存在于各类动物体内,在进化上高度保守。本研究以鸭外周血淋巴细胞为原材料,通过RT-PCR扩增得到viperin基因,同时构建真核表达质粒p EGFP-N1-viperin,转染至DF-1细胞,用坦布苏... 详细信息

Viperin蛋白是一种由Ⅰ型和Ⅱ型干扰素诱导的宿主蛋白,广泛存在于各类动物体内,在进化上高度保守。本研究以鸭外周血淋巴细胞为原材料,通过RT-PCR扩增得到viperin基因,同时构建真核表达质粒p EGFP-N1-viperin,转染至DF-1细胞,用坦布苏病毒攻击后,检测该病毒在转染质粒组和转染空载体组细胞中的增殖情况。结果表明,鸭viperin基因开放阅读框为1 092 bp,编码蛋白由363个氨基酸构成。转染结果显示,viperin基因在DF-1细胞中成功表达。坦布苏病毒攻击后,与转染空载体组相比,转染p EGFP-N1-viperin组显著抑制了坦布苏病毒在DF-1细胞中的增殖。说明鸭Viperin蛋白作为抗病毒蛋白,具有良好的抑制坦布苏病毒增殖的作用。本试验结果为鸭Viperin蛋白抗病毒生物学功能的进一步研究奠定了良好基础。

关键词： viperin基因坦布苏病毒抗病毒活性

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坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅰ/Ⅱ蛋白免疫保护效果

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江苏农业学报 2017年第2期33卷 -页

作者：赵冬敏刘宇卓黄欣梅韩凯凯杨婧刘青涛毕可然李银江苏省农业科学院兽医研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014

为了探讨原核表达的坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅰ/Ⅱ蛋白对于坦布苏病毒感染的免疫保护作用,利用IPTG诱导重组大肠杆菌表达坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅰ/Ⅱ蛋白,Anti-FLAG M2 Affinity Gel纯化后进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。经SDS-PAGE和We... 详细信息

为了探讨原核表达的坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅰ/Ⅱ蛋白对于坦布苏病毒感染的免疫保护作用,利用IPTG诱导重组大肠杆菌表达坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅰ/Ⅱ蛋白,Anti-FLAG M2 Affinity Gel纯化后进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。经SDS-PAGE和Western blot鉴定,纯化后坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅰ/Ⅱ蛋白仅有单一目的条带。免疫组小鼠血清ELISA效价均达4.67±0.11(lg10)。攻毒保护试验结果表明,免疫组小鼠体质量在攻毒9 d后高于对照组,荧光定量RT-PCR检测结果显示,攻毒后免疫组小鼠脑、肝脏、脾脏组织中坦布苏病毒核酸含量均低于对照组。表明使用原核表达的坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅰ/Ⅱ蛋白免疫可诱导产生高水平抗体,并提供良好的免疫保护力,为开发有效的坦布苏病毒亚单位疫苗提供依据。

关键词：坦布苏病毒 E蛋白结构域I/II 免疫保护

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铁离子限制下猪胸膜肺炎放线杆菌外膜囊泡的制备及其抗原性分析

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江苏农业学报 2017年第1期33卷 119-123页

作者：周俊明何孔旺倪艳秀祝昊丹温立斌俞正玉茅爱华吕立新江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为评估猪胸膜肺炎放线杆菌外膜囊泡对小鼠免疫系统的刺激水平,以铁离子限制下体外培养猪胸膜肺炎放线杆菌shope菌株,经离心、0.22μm过滤处理后获取无细胞培养上清,继而超速离心制备细菌释放的外膜囊泡(Outer membrane vesicles,OMV),以... 详细信息

为评估猪胸膜肺炎放线杆菌外膜囊泡对小鼠免疫系统的刺激水平,以铁离子限制下体外培养猪胸膜肺炎放线杆菌shope菌株,经离心、0.22μm过滤处理后获取无细胞培养上清,继而超速离心制备细菌释放的外膜囊泡(Outer membrane vesicles,OMV),以OMV作为亚单位疫苗2次鼻腔免疫小鼠。结果表明,通过透射电镜观察可见大部分OMV直径在50 nm至100 nm之间,OMV免疫小鼠长期增质量与PBS免疫组无显著差异,同时OMV不仅能够刺激小鼠血清产生高水平的IgG,而且在小鼠肺脏中产生高水平的IgA。可见,OMV是一种高效免疫刺激物,能有效地刺激小鼠肺脏黏膜产生免疫反应。

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌外膜囊泡 IgA 黏膜免疫

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坦布苏病毒囊膜蛋白诱导的小鼠免疫应答

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华北农学报 2017年第2期32卷 50-54页

作者：赵冬敏黄欣梅韩凯凯刘宇卓杨婧刘青涛毕可然李银江苏省农业科学院兽医研究所国家兽用生物制品工程技术研究中心农业部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014

为了研究坦布苏病毒囊膜蛋白(E蛋白)的免疫原性,利用大肠杆菌表达系统高效表达坦布苏病毒囊膜蛋白(E蛋白)并对其诱导小鼠免疫应答进行了研究。结果表明,E蛋白免疫BALB/c小鼠后,免疫组小鼠血清中抗体效价均可达1∶51 200以上;同时,E蛋白... 详细信息

为了研究坦布苏病毒囊膜蛋白(E蛋白)的免疫原性,利用大肠杆菌表达系统高效表达坦布苏病毒囊膜蛋白(E蛋白)并对其诱导小鼠免疫应答进行了研究。结果表明,E蛋白免疫BALB/c小鼠后,免疫组小鼠血清中抗体效价均可达1∶51 200以上;同时,E蛋白可显著诱导血清中细胞因子IL-2、TNF-α和IFN-γ的表达,免疫组小鼠血清中IL-2、TNF-α的含量均极显著高于对照组(P<0.01),IFN-γ含量则显著高于对照组(P<0.05);此外,与对照组相比,E蛋白还可极显著刺激小鼠脾脏淋巴细胞的增殖,上述结果表明,E蛋白免疫后,小鼠机体可产生显著的体液免疫和细胞免疫反应。攻毒保护性试验结果显示,攻毒后,经荧光定量RT-PCR检测,E蛋白免疫组小鼠脑、肝脏、脾脏、卵巢、肾脏中坦布苏病毒载量均显著低于对照组,表明免疫E蛋白可有效抑制坦布苏病毒在小鼠各个组织中的增殖。结果表明,大肠杆菌表达的坦布苏病毒E蛋白可作为坦布苏病毒亚单位疫苗的候选抗原,为进一步预防和控制坦布苏病毒病奠定理论基础。

关键词：坦布苏病毒囊膜蛋白免疫应答亚单位疫苗

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猪细小病毒NJ株ST细胞适应性研究

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安徽农业科学 2019年第18期47卷 93-94,110页

作者：唐波刘国阳常晨华涛张道华江苏省农业科学院动物免疫工程研究所江苏南京210014 江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地江苏南京210014 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为评价ST细胞代次的增高对猪细小病毒NJ株免疫原性的影响,将第10、30、60代ST细胞分别接种猪细小病毒NJ株F8 、F18代毒种进行病毒培养,通过检测其病毒含量、血凝价以及制备疫苗免疫机体的抗体水平等指标来进行评价。结果表明,各代次病... 详细信息

为评价ST细胞代次的增高对猪细小病毒NJ株免疫原性的影响,将第10、30、60代ST细胞分别接种猪细小病毒NJ株F8 、F18代毒种进行病毒培养,通过检测其病毒含量、血凝价以及制备疫苗免疫机体的抗体水平等指标来进行评价。结果表明,各代次病毒含量为10 7.2 ~10 7.5 TCID 50 /mL,血凝价为2 9~2 10;制苗后免疫阴性豚鼠与后备母猪,免疫28 d后均出现抗体反应,HI效价分别为2 7~2 9和2 8~2 9。不同代次毒种接种不同代次ST细胞培养的病毒含量、血凝价及疫苗免疫效力均符合要求。各代次细胞增殖性能稳定,培养的PPV NJ株均能满足兽用生物制品的生产要求。

关键词：猪细小病毒 ST细胞适应性

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犬干扰素α4在CHO细胞中的稳定表达

犬干扰素α4在CHO细胞中的稳定表达

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第18次全国犬业科技学术研讨会

作者：王晶宇欧阳伟王永山夏兴霞诸玉梅王晓丽潘群兴孟凯毕振威安欣楼晶瑶姚火春南京农业大学动物医学院江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

为制备高活性的犬干扰素α4(CaIFN-α4),将犬IFN-α4和绿色荧光蛋白(GFP)基因用2个GGGGS五肽(2G4S)柔性肽连接,获得犬IFN-α4和GFP的融合基因(CaIFN-α4-GFP)。将该融合基因与真核表达载体pL-eGFP连接,构建重组表达质粒pL-CaIFN-α4-GFP... 详细信息

为制备高活性的犬干扰素α4(CaIFN-α4),将犬IFN-α4和绿色荧光蛋白(GFP)基因用2个GGGGS五肽(2G4S)柔性肽连接,获得犬IFN-α4和GFP的融合基因(CaIFN-α4-GFP)。将该融合基因与真核表达载体pL-eGFP连接,构建重组表达质粒pL-CaIFN-α4-GFP,并与其它三种慢病毒质粒(pC-Gp,pR-Rev,pC-VsvG)共同转染293FT细胞,包装获得重组慢病毒(vCaIFN-α4-GFP)。用获得的重组慢病毒感染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,经杀道瘟菌素筛选、流式细胞仪分选和有限稀释法克隆转染细胞,获得表达CaIFN-α4-GFP的CHO细胞。用荧光显微镜观察构建的CHO细胞呈现荧光,用MDCK与MDBK细胞检测CHO细胞培养上清液具有抗水疱性口炎病毒(VSV)活性,活性分别为1.39×105U/ml和2.19×10U/ml。本研究成功地利用CHO细胞表达了具有活性的犬干扰素α4,为进一步研制高活性的犬IFN-α4生产系统奠定了实验基础。

关键词：犬干扰素α4(CaIFN-α4) CHO细胞真核表达慢病毒绿色荧光蛋白(GFP)

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犬干扰素α4在CHO细胞中的稳定表达

犬干扰素α4在CHO细胞中的稳定表达

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第六次学术研讨会

近年来,养犬业发展快速,犬的传染病和非传染病的发病率也在逐年升高,严重威胁着养犬业的健康发展。由于受传统畜牧业动物品种观念的影响,对犬病的研究十分滞后,生物防治性制剂缺乏,远不能满足对犬病防治的实际需求。干扰素（interferon,... 详细信息

近年来,养犬业发展快速,犬的传染病和非传染病的发病率也在逐年升高,严重威胁着养犬业的健康发展。由于受传统畜牧业动物品种观念的影响,对犬病的研究十分滞后,生物防治性制剂缺乏,远不能满足对犬病防治的实际需求。干扰素（interferon,IFN）是一类具有抗病毒、调节细胞分化生长和调节免疫功能等活性的蛋白质。IFN主要有3类:IFN-α、IFN-β和IFN-γ。其中IFN-α为I型IFN,抗病毒作用较强,在几分钟内即可诱导细胞建立抗病毒状态。为制备高活性的犬干扰素α4（CaIFN-α4）,将犬IFN-α4和绿色荧光蛋白（GFP）基因用2个GGGGS五肽（2G4S）柔性肽连接,获得犬IFN-α4和GFP的融合基因（CaIFN-α4-GFP）。将该融合基因与真核表达载体pL-e GFP连接,构建重组表达质粒pL-CaIFN-α4-GFP,并与其它三种慢病毒质粒（pC-Gp,pR-Rev,pC-VsvG）共同转染293FT细胞,包装获得重组慢病毒（vCaIFN-α4-GFP）。其中,慢病毒感染方法,可以通过整合入宿主细胞基因组,达到长期表达的目的,而且转染效率较高,既能感染分裂期的细胞,又能感染非分裂期的细胞,既可以携带较大的外源性基因,又不易诱发宿主的免疫反应。而在表达系统的选择上,由于CHO细胞表达体系具有准确的转录后修饰功能,表达的蛋白在分子结构、理化特性和生物学功能方面最接近于天然蛋白分子,且外源基因在CHO中的整合稳定,可高效扩增和表达重组蛋白。本研究用获得的重组慢病毒感染中国仓鼠卵巢（CHO）细胞,经杀道瘟菌素筛选、流式细胞仪分选和有限稀释法克隆转染细胞,获得表达CaIFN-α4-GFP的CHO细胞。用荧光显微镜观察构建的CHO细胞呈现荧光,用MDCK与MDBK细胞检测CHO细胞培养上清液具有抗水疱性口炎病毒（VSV）活性,活性分别为1.39×10～5U/mL和2.19×10～4U/mL。本研究成功地利用CHO细胞表达了具有活性的犬干扰素α4,为进一步研制高活性的犬IFN-α4生产系统奠定了实验基础。

关键词：犬干扰素α4(CaIFN-α4) CHO细胞真核表达慢病毒绿色荧光蛋白(GFP)

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H3N2亚型犬流感病毒NP蛋白的表达纯化及多克隆抗体制备

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中国动物传染病学报 2017年第1期25卷 1-6页

作者：王晓丽毕振威王永山潘群兴欧阳伟夏兴霞诸玉梅江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

将分离的H3N2亚型犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV)A/Canine/Nanjing/11/2012(H3N2)株的核蛋白(NP)基因克隆至原核表达载体p ET28a(+)中,构建重组表达质粒p ET-NP,然后转化大肠杆菌*** Rosetta(DE)感受态细胞,经IPTG诱导后,采用SDS-PAGE和Western blot进行分析。结果显示,大肠杆菌表达的重组NP蛋白的分子量约为61 k Da,与预期相符,并能与犬CIV阳性血清发生特异性反应。将表达的重组NP蛋白进行纯化后,免疫大白兔制备抗NP蛋白多克隆抗体血清,Western blot检测该血清可与CIV的NP蛋白发生特异性反应,间接ELISA检测该多克隆抗体血清的效价达1:30 000,显示了较高的抗体效价。本研究为CIV快速检测方法的建立和流行病学调查奠定了科学依据。

关键词：犬流感病毒 H3N2亚型核蛋白原核表达多克隆抗体

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猪圆环病毒2型标签重组病毒构建和免疫试验

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中国农业科技导报 2018年第4期20卷 36-43页

作者：华涛唐波常晨刘国阳张雪花于漾侯继波张道华江苏省农业科学院动物免疫工程研究所省部共建国家重点实验室培育基地-江苏省食品质量安全重点实验室南京210014 江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009

猪圆环病毒2型(PCV2)能引起断奶仔猪衰竭综合症,为了获得利于纯化的病毒和新型标记疫苗,采用病毒重组技术,选择利于纯化的6个氨基酸His标签作为标记表位,插入PCV2 Cap蛋白C端,拯救获得重组标记病毒rPCV2-His。间接免疫荧光和Western blo... 详细信息

猪圆环病毒2型(PCV2)能引起断奶仔猪衰竭综合症,为了获得利于纯化的病毒和新型标记疫苗,采用病毒重组技术,选择利于纯化的6个氨基酸His标签作为标记表位,插入PCV2 Cap蛋白C端,拯救获得重组标记病毒rPCV2-His。间接免疫荧光和Western blot鉴定结果证明重组病毒所含的标签能稳定表达。通过镍柱纯化重组病毒,该病毒获得了纯化。纯化的重组病毒灭活后免疫小鼠,PCV2特异抗体显著提升,且能产生标记免疫抗体,小鼠攻毒显著降低体内PCV2含量。该重组病毒可作为PCV2新型疫苗研究重要材料。

关键词： PCV2 重组病毒纯化标记免疫

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