检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2025年

作者：陶然胡屹屹邓慧程曦韩楠卞贤宇王建新周金柱朱雪蛟张雪寒李彬江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室

体外筛选对猪轮状病毒（PoRV）有抗病毒作用的中药活性成分，为抗PoRV药物开发和临床防控提供理论依据。从6种中药活性成分中筛选到具有潜在抗PoRV作用的柴胡皂苷A（SSA），采用CCK8方法筛选了SSA在IPEC-J2细胞上药物安全浓度，然后用... 详细信息

体外筛选对猪轮状病毒（PoRV）有抗病毒作用的中药活性成分，为抗PoRV药物开发和临床防控提供理论依据。从6种中药活性成分中筛选到具有潜在抗PoRV作用的柴胡皂苷A（SSA），采用CCK8方法筛选了SSA在IPEC-J2细胞上药物安全浓度，然后用不同浓度的SSA处理PoRV感染的细胞，通过荧光定量PCR、TCID50及Western-blot实验技术分析SSA对PoRV（NJ2012株，G9P[7]型）增殖的影响；接着从病毒的吸附、入侵、复制及释放等阶段，分析了SSA对PoRV复制阶段的影响；最后通过荧光定量PCR和TCID50实验分析了SSA对不同基因型PoRV（G9P[23]型、G1P[7]型和G4P[23]型）、猴源RV及牛源RV增殖的影响。结果显示，SSA在120 μg/mL浓度范围内对IPEC-J2细胞均无明显的毒性作用，SSA分别在20、40、80 μg/mL处理浓度下，对PoRV呈现剂量依赖性抗病毒作用；SSA在PoRV复制阶段发挥抗病毒作用，对病毒的吸附、入侵及释放阶段均无明显影响；SSA对不同基因型PoRV、猴源RV及牛源RV均具有不同程度的抗病毒作用。综上，本研究发现SSA具有较好的体外抑制PoRV增殖的作用，且作用于病毒的复制阶段，进一步研究发现SSA对其他不同种属和基因型的RV也具有一定抗病毒作用，初步表明SSA具有潜在的广谱抗RV作用。该研究为开发抗RV药物和临床防控PoRV感染流行提供了一定的理论指导。

关键词：柴胡皂苷A 猪轮状病毒中药抗病毒

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鹅星状病毒衣壳蛋白的表达及其免疫的小鼠B细胞受体组库特征分析

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江苏农业学报 2025年第3期41卷 549-558页

作者：赵冬敏刘青涛韩凯凯黄欣梅刘宇卓李银江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程重点实验室江苏南京210014 兽用生物制品<泰州>国泰技术创新中心江苏泰州225300

本研究根据鹅星状病毒(GoAstV)衣壳蛋白(Cap)基因序列,通过人工合成获得衣壳蛋白基因片段,并构建重组杆状病毒rBV-Cap。通过间接免疫荧光检测、Western Blot鉴定和透射电镜观察,发现rBV-Cap在sf9细胞中高效表达,衣壳蛋白可自组装形成与... 详细信息

本研究根据鹅星状病毒(GoAstV)衣壳蛋白(Cap)基因序列,通过人工合成获得衣壳蛋白基因片段,并构建重组杆状病毒rBV-Cap。通过间接免疫荧光检测、Western Blot鉴定和透射电镜观察,发现rBV-Cap在sf9细胞中高效表达,衣壳蛋白可自组装形成与天然鹅星状病毒结构相似的病毒样颗粒。将纯化的衣壳蛋白免疫BALB/c小鼠,酶联免疫吸附试验(ELISA)和病毒噬斑减少中和试验结果表明,重组衣壳蛋白具有较好的免疫原性,可诱导小鼠产生高水平抗体。为进一步探究B细胞免疫应答特征,分别摘取对照小鼠和免疫后的小鼠脾脏组织,利用单细胞免疫谱测序技术对B细胞受体(BCR)组库进行测序分析。结果表明,对照小鼠BCR重链(H)-CDR3多肽链长度主要为13 aa,免疫后的小鼠BCR重链(H)-CDR3多肽链长度主要为14 aa。与对照相比,免疫后的小鼠免疫球蛋白G(IgG)数量和占比升高,表明Cap蛋白能够有效刺激小鼠产生IgG抗体。与对照相比,Cap蛋白免疫后的小鼠BCR组库多样性指数(D50值)降低,表明免疫后BCR多样性降低。但是免疫后的小鼠某些克隆型细胞数量增加,表明免疫会引起特定克隆型的扩增。对照小鼠对IGHV1、IGHV2、IGHV5基因的取用频率较高,而免疫后的小鼠对IGHV1、IGHV6、IGHV9基因的取用频率较高。对照小鼠和免疫后的小鼠对IGHJ基因的取用频率无显著差异。与对照相比,免疫后小鼠的IGHV7-3-IGHJ2配对和IGHV2-6-2-IGHJ2配对的频率增加。免疫后的小鼠体内存在IGHV2-2-IGHJ1和IGHV5-1-IGHJ1配对,而对照小鼠体内未检测到这2种类型的配对,表明Cap蛋白免疫导致小鼠V-J基因配对发生改变。本研究结果为基于B细胞表位的亚单位疫苗研发提供了理论支持。

关键词：新型鹅星状病毒衣壳蛋白 B细胞受体互补决定区

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鼠伤寒沙门菌ompW基因缺失株与回补株的构建及其生物学特性

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畜牧兽医学报 2025年第4期56卷 1865-1875页

作者：葛雷仇汝龙范志宇胡波魏后军陈萌萌宋艳华李一鸣徐为中王芳江苏省农业科学院兽医研究所南京210014 农业农村部兽用生物制品工程重点实验室南京210014 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心泰州225300

鼠伤寒沙门菌(Salmonella Typhimurium)是最为常见的沙门菌血清型,严重危害畜牧业发展及公共卫生安全。外膜蛋白OmpW是由ompW基因编码的营养物质特异性运输通道,发挥特殊的铁离子外排功能,与细菌耐药性、致病性等密切相关。但其在沙门... 详细信息

鼠伤寒沙门菌(Salmonella Typhimurium)是最为常见的沙门菌血清型,严重危害畜牧业发展及公共卫生安全。外膜蛋白OmpW是由ompW基因编码的营养物质特异性运输通道,发挥特殊的铁离子外排功能,与细菌耐药性、致病性等密切相关。但其在沙门菌中的功能尚未见研究。为探究外膜蛋白OmpW对鼠伤寒沙门菌的影响,本试验以鼠伤寒沙门菌ATCC 14028为野生株(WT14028),利用λ-Red同源重组技术构建ompW基因缺失株(14028ΔompW),同时构建回补株(14028ΔompW::ompW),通过检测生长特性、生物被膜形成能力、环境耐受性、耐药性等方面探究鼠伤寒沙门菌ompW基因的生物学特性,并通过小鼠感染试验探究该基因对沙门菌致病性的影响。结果表明,缺失株与野生株菌落形态无显著差异;缺失株在对数生长期显著慢于野生株,但到达稳定期无显著差异;缺失株生物被膜形成能力下降31.73%±6.43%;在酸性(pH=3)、碱性(pH=10)及高盐(1 mol·L^(-1)NaCl)环境下,缺失株存活率显著低于野生株;但在高铁(>0.625 g·L^(-1)FeCl3)环境下,缺失株存活率更高;缺失株对氨基糖苷类抗生素庆大霉素、卡那霉素的敏感性显著增强,对其他如氨苄西林、四环素等抗生素敏感性无显著变化;小鼠感染试验表明,与野生株相比,缺失株感染诱发的腹泻率更低、脾肿大及肠道损伤更轻微,且细菌移位能力也显著下降。综上,本研究成功构建了鼠伤寒沙门菌ompW基因缺失株及回补株,试验表明该基因与菌株生长、环境耐受性、耐药性、致病性等方面密切相关。本研究为进一步开展沙门菌的致病与耐药机制的研究奠定了基础。

关键词：鼠伤寒沙门菌 ompW基因缺失株生物学特性致病性

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鞭毛蛋白的表达及其免疫增强效力评价

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中国动物传染病学报 2025年

作者：侯立婷刘昆昆安俊星于晓明秦竹杜露平张元鹏陈瑾郑其升江苏省农业科学院动物免疫工程研究所江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心省部共建国家重点实验室培育基地—江苏省食品质量安全重点实验室南京农业大学动物医学院

本研究旨在研制安全高效的兽用疫苗免疫增强剂，为免疫增强剂的开发奠定基础。首先通过参考伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白基因序列，设计并构建了全长鞭毛蛋白FliC和删除D2和D3高变区的鞭毛蛋白FliC△D2D3的表达载体。然后利用原核表达系统表达... 详细信息

本研究旨在研制安全高效的兽用疫苗免疫增强剂，为免疫增强剂的开发奠定基础。首先通过参考伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白基因序列，设计并构建了全长鞭毛蛋白FliC和删除D2和D3高变区的鞭毛蛋白FliC△D2D3的表达载体。然后利用原核表达系统表达这两种蛋白，并进行纯化与鉴定。获得这两种蛋白后，进一步检测这两种蛋白体外对DC2.4细胞的TLR 5的激活和相关细胞因子的表达情况，并对其在PEDV疫苗上的免疫增强效力进行了评价。结果表明，1)两种蛋白在原核表达系统中均以可溶形式表达；2)添加鞭毛蛋白刺激后，DC 2.4细胞中TLR5及相关细胞因子的表达水平显著提高；3)FliC和FliC△D2D3均能显著提高小鼠和仔猪免疫后的PEDV特异性的IgG抗体水平，其中FliC△D2D3的免疫效果优于全长的FliC。该研究不仅有助于了解鞭毛蛋白FliC在免疫调节中的作用，也为基于鞭毛蛋白的免疫增强剂的开发提供了基础。

关键词：鞭毛蛋白FliC、FliC 免疫增强剂 PEDV

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经典和重组兔黏液瘤病毒TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立和应用

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江苏农业科学 2025年第1期53卷 226-230页

作者：周雅楠陈萌萌仇汝龙魏后军范志宇胡波宋艳华葛雷李一鸣徐为中王芳新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心江苏泰州225300

根据GenBank已登录的经典兔黏液瘤病毒(MYXV)和重组兔黏液瘤病毒(ha-MYXV)基因保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立能同时检出ha-MYXV和MYXV病原的快速、简单且敏感性较高的TaqMan探针荧光定量PCR临床检测方法。结果显示,稀释度为1... 详细信息

根据GenBank已登录的经典兔黏液瘤病毒(MYXV)和重组兔黏液瘤病毒(ha-MYXV)基因保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立能同时检出ha-MYXV和MYXV病原的快速、简单且敏感性较高的TaqMan探针荧光定量PCR临床检测方法。结果显示,稀释度为1×10^(7)~1×10^(3)拷贝/μL标准品建立的标准曲线具有良好的线性关系,相关系数为1.00;该方法对MYXV和ha-MYXV具有高度特异性,与绿脓杆菌、兔多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌、兔出血症病毒1型、兔出血症病毒2型等其他病原间无交叉反应;检测灵敏度可达1×10^(2)拷贝/μL;组内和组间变异系数在0.05%~1.19%间。该方法的建立为引进种兔及家兔相关产品兔黏液瘤病毒的检疫提供了技术支撑。

关键词：兔黏液瘤病经典兔黏液瘤病毒重组兔黏液瘤病毒 TaqManqPCR

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江苏某牛场犊牛呼吸道病病原检测与牛支原体的分离鉴定

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中国动物传染病学报 2025年

作者：张洪菊程子龙韦艳娜毛立刘茂军牛家强冯志新李文良西藏农牧学院动物科学学院农业农村部西藏包虫病防治重点实验室西藏高原动物疫病研究自治区高校重点实验室江苏省农业科学院兽医研究所农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心

为查明江苏某奶牛场一起犊牛呼吸道疾病的病因，采集发病牛鼻拭子30份，采用RT-PCR/PCR方法对主要病原进行检测。对病毒检测阳性样品进行测序和遗传进化分析。对牛支原体（M. bovis）阳性样本进行分离培养，进而进行生化实验、生长曲线... 详细信息

为查明江苏某奶牛场一起犊牛呼吸道疾病的病因，采集发病牛鼻拭子30份，采用RT-PCR/PCR方法对主要病原进行检测。对病毒检测阳性样品进行测序和遗传进化分析。对牛支原体（M. bovis）阳性样本进行分离培养，进而进行生化实验、生长曲线测定、药敏试验和遗传进化分析。结果表明，***（18份）、溶血性曼氏杆菌（1份）、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）（2份）、牛冠状病毒（BCoV）（6份）为阳性，其他病原均为阴性。3株M. bovis生长曲线一致，不发酵葡萄糖、甘露醇，不水解明胶、七叶苷，不分解尿素。3株M. bovis均对泰妙菌素、林可霉素和泰万菌素敏感。序列分析表明3株牛支原体oppF基因序列与各参考株的同源性为98.6%-100%，与国内菌株亲缘关系近；该牛场流行BVDV毒株为BVDV-1a亚型，BCoV毒株属于GIIb亚型。因此，该病例主要由M. bovis引起，伴发BCoV和BVDV，可优先选用泰妙菌素、林可霉素、泰万菌素进行防控，同时应加强病毒性病原的监测与防控。

关键词：牛呼吸道病牛支原体分离鉴定药敏试验进化分析

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G1P型猪轮状病毒的分离鉴定及其全基因组分析

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南方农业学报 2025年第3期56卷 932-943页

作者：王建新马润超周金柱卞贤宇朱雪蛟李昱辰张雪寒李彬河北农业大学动物医学院河北保定071000 江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

[目的]分离鉴定G1P[7]型猪轮状病毒(PoRV)并进行全基因组分析,为仔猪腹泻病防控及疫苗研发提供理论依据。[方法]腹泻仔猪粪便样本由南京农业大学动物医学院提供,对样本进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔... 详细信息

[目的]分离鉴定G1P[7]型猪轮状病毒(PoRV)并进行全基因组分析,为仔猪腹泻病防控及疫苗研发提供理论依据。[方法]腹泻仔猪粪便样本由南京农业大学动物医学院提供,对样本进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)及PoRV PCR检测。向PCR检测结果为阳性的样本上清液中加入胰蛋白酶,随后接种到MA104细胞进行病毒分离和纯化。通过PCR检测、电镜观察、间接免疫荧光检测和RAN-PAGE检测鉴定毒株。通过绘制病毒增殖曲线和检测病毒对MA104、Vero、IPEC-J2、HT-29、HRT-18和Caco-2细胞的易感性探究毒株生物学特性。利用生物信息学软件分析分离毒株的11个基因与国内外各基因型轮状病毒的同源性并构建病毒全基因组系统发育树。[结果]粪便样本PCR检测结果显示,粪便样本中仅PoRV呈阳性。成功分离出1株PoRV,将该毒株命名为JSNJ2023,病毒在MA104细胞上能稳定增殖和传代,经3次克隆,筛选出适合的克隆株,在第3次克隆中,选择病毒滴度最高的克隆株进行扩大培养,最终成功获得高滴度的单克隆毒株。病毒颗粒呈明显的球形结构,具有清晰的双层衣壳特征,直径约70 nm。间接免疫荧光检测结果显示,JSNJ2023毒株能感染MA104细胞。RNA-PAGE检测结果显示,JSNJ2023毒株具有A群轮状病毒特征性的11条电泳图谱,排列方式为4∶2∶3∶2。病毒增殖曲线显示,接种病毒18 h后JSNJ2023毒株在MA104细胞中的病毒滴度达峰值,随着感染时间的延长,病毒滴度逐渐降低。JSNJ2023毒株对细胞的易感性依次为MA104、IPEC-J2、HRT-18、HT-29、Caco2和Vero细胞。基因同源性分析与系统发育树构建结果显示,JSNJ2023毒株属于猪A群G1P[7]型轮状病毒,其基因型为G1-P[7]-I5。[结论]成功分离获得PoRV JSNJ2023毒株,其属于A群G1P[7]型轮状病毒,基因型为G1-P[7]-I5。JSNJ2023毒株与人、猪及牛轮状病毒存在高度同源性,其进化过程中可能受到人轮状病毒、PoRV与牛轮状病毒的影响,发生了基因重组或交换,形成了独特的基因型(R1-C1-M1-A8-N1-T7-E1-H1)。

关键词：猪轮状病毒(PoRV) 全基因组测序遗传进化分析基因重组

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科研院所病原微生物实验室安全管理探究

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西藏农业科技 2025年第1期47卷 96-99页

作者：孙雨茜肖敏郁达威江苏省农业科学院科研管理处江苏南京210014 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽医生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014

首先分析了科研院所病原微生物实验室安全管理现状与存在问题,重点介绍了近几年江苏省农业科学院在病原微生物实验室安全管理方面的探索与实践,包括实验室科学布局、健全实验室管理体系机制、建立信息化监管系统、组建实验室管理人才队... 详细信息

首先分析了科研院所病原微生物实验室安全管理现状与存在问题,重点介绍了近几年江苏省农业科学院在病原微生物实验室安全管理方面的探索与实践,包括实验室科学布局、健全实验室管理体系机制、建立信息化监管系统、组建实验室管理人才队伍、建立安全监管激励与约束机制等。针对新形势下病原微生物实验室的监管要求,从经费保障支持、人员管理考核制度标准化、安全培训长效机制等方面对科研院所实验室生物安全管理提出了建议。

关键词：科研院所病原微生物实验室生物安全管理探究

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猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪δ冠状病毒三联灭活疫苗的安全性和免疫持续期研究

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畜牧与兽医 2025年第5期57卷 93-98页

作者：易鑫袁雪松钟纯燕蔡旭航郭容利李基棕李彬贡嘎西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 黔西南民族职业技术学院生物工程系贵州兴义562400 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712000 江苏大学生命科学学院江苏镇江212013

旨在探究以猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)SHXB株、猪流行性腹泻病毒(PEDV)ZJ/15株和猪δ冠状病毒(PDCoV)LYG/14株制成的TGEV、PEDV、PDCoV三联灭活疫苗的安全性和免疫持续期。将3种病毒灭活、乳化、制备成为疫苗,15头TGEV、PEDV、PDCoV抗原... 详细信息

旨在探究以猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)SHXB株、猪流行性腹泻病毒(PEDV)ZJ/15株和猪δ冠状病毒(PDCoV)LYG/14株制成的TGEV、PEDV、PDCoV三联灭活疫苗的安全性和免疫持续期。将3种病毒灭活、乳化、制备成为疫苗,15头TGEV、PEDV、PDCoV抗原抗体阴性的健康仔猪分为2组,分别接种2和4 mL疫苗,观察三联灭活疫苗的安全性并检测其二免10 d至6个月血清中和抗体效价及ELISA抗体效价。结果显示:仔猪注射2和4 mL疫苗后均存活,精神状态良好,体温、食欲皆正常,接种部位吸收良好,无肿胀溃烂等不良情况发生;在二免10 d后,TGEV、PEDV、PDCoV平均中和抗体水平分别为1∶1 024、1∶64以及1∶1 024,且ELISA结果也全部转为阳性;中和抗体能持续到二免后5个月,中和抗体效价分别为1∶32、1∶32以及1∶32。提示:该三联灭活疫苗安全性优良,且免疫持续时间长,为疫苗的推广奠定了基础。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒猪流行性腹泻病毒猪δ冠状病毒三联灭活疫苗安全性免疫原性

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绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白原核表达及ELISA方法建立

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中国动物传染病学报 2025年第1期33卷 97-105页

作者：陈思宇张梦洁田睿陈益刘镝钺李文良毛立程子龙杨蕾蕾孙敏张纹纹杜改梅储岳峰王金泉刘茂军新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 江苏省农业科学院兽医研究所农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室南京210014 金陵科技学院动物科学与食品工程学院南京211169 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心泰州225300

绵羊肺炎支原体(Mo)是引起规模化羊场呼吸道病的主要病原,危害严重;快速特异诊断是防控该病的保障。本文旨在建立一种检测Mo血清抗体的间接ELISA方法,利用大肠杆菌的密码子偏好性优化Mo EF-Tu基因序列进行原核表达,纯化出高纯度重组rEF... 详细信息

绵羊肺炎支原体(Mo)是引起规模化羊场呼吸道病的主要病原,危害严重;快速特异诊断是防控该病的保障。本文旨在建立一种检测Mo血清抗体的间接ELISA方法,利用大肠杆菌的密码子偏好性优化Mo EF-Tu基因序列进行原核表达,纯化出高纯度重组rEF-Tu蛋白,以纯化的rEF-Tu为包被抗原,建立Mo间接ELISA抗体检测方法。结果显示,原核表达的EF-Tu蛋白分子质量约为45.4 kDa,与预期相符;Western blot证实具有良好的反应原性;建立的间接ELISA方法最佳优化条件显示,包被抗原浓度为1.25 mg/L,37℃孵育2 h;封闭条件为30 g/L BSA,37℃孵育1 h;待检血清1∶100稀释,37℃孵育45 min;酶标二抗1∶20000稀释,37℃孵育30 min;底物TMB 37℃避光反应15 min;样品OD450值≥0.296时判定为阳性,OD450值≤0.265时判定为阴性,OD 450值0.265~0.296则判为可疑;组内和组间变异系数均低于10%;用该方法与实验室所建Mo全菌蛋白间接ELISA检测方法对233份血清进行检测,两者特异性为90.70%,敏感性为82.69%,符合率约为87.12%。上述结果表明,本研究建立的间接ELISA方法具有良好的敏感性、重复性及特异性,为Mo的临床诊断、抗体监测等提供简单快速的血清学诊断方法,也为Mo抗体检测试剂盒的开发奠定了基础。

关键词：绵羊肺炎支原体 EF-Tu蛋白原核表达间接ELISA

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