检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医杂志 2012年第11期48卷 6-8,I0001页

作者：王占伟熊褀琰冯志新刘茂军白方方邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京天邦生物科技有限公司江苏南京210012

为了比较研究3种猪肺炎支原体(Mhp)的检测方法,利用已建立的显色原位杂交(CISH)和量子点荧光原位杂交(QD-FISH),并结合PCR方法,检测人工感染Mhp的试验猪、自然感染Mhp的试验猪和疑似感染Mhp的临床样品。结果显示,3种检测方法对人工感染... 详细信息

为了比较研究3种猪肺炎支原体(Mhp)的检测方法,利用已建立的显色原位杂交(CISH)和量子点荧光原位杂交(QD-FISH),并结合PCR方法,检测人工感染Mhp的试验猪、自然感染Mhp的试验猪和疑似感染Mhp的临床样品。结果显示,3种检测方法对人工感染组和自然感染组的检测率均为100%;对临床样品,PCR的检测率为90%,CISH的检测率为70%,QD-FISH的检测率为75%。结果表明,用于检测Mhp感染,PCR是最佳检测方法,但CISH和QD-FISH在Mhp检测和致病机理研究方面具有一定的应用价值。

关键词：猪肺炎支原体 PCR 显色原位杂交量子点荧光原位杂交

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猪肺炎支原体的分离方法

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江苏农业学报 2012年第1期28卷 104-107页

作者：韦艳娜白昀孔猛冯志新刘茂军熊祺琰白方方吴叙苏邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京天邦生物科技有限公司江苏南京211102

为了寻求分离猪肺炎支原体更好的方法,本试验采用剪碎法、研磨法、匀浆法和灌洗法对猪肺组织进行处理,并研究了不同肺脏组织处理方法对猪肺炎支原体活力的影响。结果显示,剪碎法与灌洗法获得的处理液对猪肺炎支原体的影响小于研磨法与... 详细信息

为了寻求分离猪肺炎支原体更好的方法,本试验采用剪碎法、研磨法、匀浆法和灌洗法对猪肺组织进行处理,并研究了不同肺脏组织处理方法对猪肺炎支原体活力的影响。结果显示,剪碎法与灌洗法获得的处理液对猪肺炎支原体的影响小于研磨法与匀浆法。采用剪碎法、灌洗法和研磨法对100份猪肺组织进行猪肺炎支原体野毒株分离的结果显示,经PCR鉴定,剪碎法分离到1株猪肺炎支原体,分离率为1%;研磨法分离到7株猪肺炎支原体,分离率为7%;灌洗法分离到2株猪肺炎支原体,分离率为2%。以上结果表明,研磨法获得的组织处理液对支原体活力有一定的影响,但其分离率好于剪碎法和灌洗法。因此,研磨法是一种较好的猪肺炎支原体分离方法。

关键词：猪肺炎支原体分离培养

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猪链球菌2型江苏分离株菌毛相关基因特点及菌株毒力鉴定

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江苏农业学报 2012年第5期28卷 1061-1068页

作者：虞凤何孔旺肖琦倪艳秀周俊明茅爱华祝昊丹汪伟吕立新俞正玉温立斌张雪寒李彬郭容利王小敏范红结江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

利用PCR技术对猪链球菌2型(SS2)江苏分离株的菌毛相关基因进行扩增,根据菌毛相关基因分布特点对菌株分型,并进行动物试验评估。结果 24株SS2中A型占70.8%,B型占29.2%。其中从病猪分离的13株SS2均为A型;而从健康猪扁桃体中分离的11株SS2 ... 详细信息

利用PCR技术对猪链球菌2型(SS2)江苏分离株的菌毛相关基因进行扩增,根据菌毛相关基因分布特点对菌株分型,并进行动物试验评估。结果 24株SS2中A型占70.8%,B型占29.2%。其中从病猪分离的13株SS2均为A型;而从健康猪扁桃体中分离的11株SS2 A型占36.3%,B型占63.7%。动物试验结果表明A型菌株的毒力强于B型。以上结论说明猪链球菌2型江苏分离株可以根据菌毛相关基因特点进行分型,并利用分型结果来评估菌株的毒力强弱及潜在危害性。

关键词：猪链球菌2型菌毛相关基因分型毒力

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒野毒株持续性感染细胞模型的建立

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华北农学报 2012年第5期27卷 150-156页

作者：王小敏李燕华蔺涛刘闰夏何孔旺童光志袁世山江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

旨为建立高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)野毒株持续性感染细胞模型。通过将HP-PRRSV野毒株JX143感染Marc-145细胞,感染的细胞经连续传代35代,建立了稳定的PRRSV持续感染的细胞模型,获得了JX143-Marc-145-P35细胞株。应用RT-... 详细信息

旨为建立高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)野毒株持续性感染细胞模型。通过将HP-PRRSV野毒株JX143感染Marc-145细胞,感染的细胞经连续传代35代,建立了稳定的PRRSV持续感染的细胞模型,获得了JX143-Marc-145-P35细胞株。应用RT-PCR、免疫荧光、空斑形态分析等技术跟踪观察了JX143-Marc145细胞株连续传代过程中病毒在细胞内的存在和生物学特性的变化。为了进一步分析病毒持续性感染过程中基因的特征性变化,通过RT-PCR扩增出JX143-Marc145-P35的全基因,并进行测序和序列分析。结果表明,在细胞模型建立的过程中,细胞病变(Cytopathic effect,CPE)的产生经历了从慢到快又到慢的过程,RT-PCR检测和免疫荧光证实JX143-Marc-145细胞中PRRSV持续稳定存在,表现出病毒持续感染的基本特征。该细胞与正常的Marc145细胞相比,细胞周期无显著差异,但JX143-Marc-145-P35的空斑形态与亲本病毒JX143相比略大。通过序列比较分析,JX143-Marc-145-P35v与亲本猪JX143的同源性为99.4%,存在38个非同义突变,其中,31个位于非结构蛋白,7个位于结构蛋白。试验成功建立了稳定的PRRSV持续性感染细胞模型,细胞周期与正常细胞无显著差异,但病毒在持续性感染过程中无论是基因还是表型都发生了变异,且在体外持续性感染建立的过程中,对于氨基酸突变的选择压力很可能施加于病毒的非结构蛋白和主要糖蛋白。该模型的建立对深入研究病毒与细胞间的相互作用,尤其是PRRSV持续性感染的机制具有重要意义。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒持续性感染细胞模型

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gga-miR-21过表达细胞株对传染性法氏囊病病毒复制的影响

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中国预防兽医学报 2012年第11期34卷 847-853页

作者：欧阳伟朱向东王永山王永强潘群兴毕振威王笑梅江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为研究microRNA(gga-miR-21)对传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制的影响,本研究利用PCR方法从鸡的肝细胞基因组中扩增细胞pri-gga-miR-21,克隆于慢病毒表达质粒pL-EGFP中构建重组质粒pL-miR-21。将pL-miR-21与3个包装质粒pLP1、pLP2和pLP/VSVG共转染293FT细胞,制备含gga-miR-21基因的重组慢病毒VL+miR-21。将VL+miR-21感染DF-1细胞,经杀稻瘟菌素筛选获得过表达gga-miR-21的细胞株DF-miR-21,采用定量RT-PCR(qRT-PCR)检测表明,gga-miR-21的表达量比正常DF-1细胞提高60%。将IBDV接种于DF-miR-21细胞,在96 h后,其病毒滴度(104.75TCID50/0.1 mL)显著低于正常DF-1细胞的病毒滴度(108.75TCID50/0.1 mL)。采用生物信息学方法和双荧光素酶报告系统分析验证,在IBDV基因组VP1基因中存在gga-miR-21的结合靶点。将IBDV感染DF-miR-21细胞,采用western blot分析,VP1蛋白的表达量比正常DF-1细胞显著降低;用qRT-PCR分析,VP1 mRNA水平与正常DF-1细胞没有明显差异。本实验结果表明:细胞gga-miR-21可以抑制IBDV的复制,其分子作用机理是在VP1基因翻译水平上实现的。

关键词：传染性法氏囊病病毒 miRNA gga-miR-21 慢病毒表达系统病毒复制

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传染性法氏囊病病毒感染细胞内源性microRNA表达差异分析

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中国兽医学报 2012年第3期32卷 329-336页

作者：欧阳伟王永山王永强王笑梅朱向东毕振威范红结江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

细胞内源性microRNA(miRNA)在宿主与病原相互作用过程中发挥着重要的调节功能。为了分析细胞内源性miRNA与传染性法氏囊病病毒(IBDV)的相互作用,用IBDV弱毒和强毒分别感染鸡胚成纤维细胞(CEF)和SPF鸡,24h后,取感染CEF和法氏囊组织,提取... 详细信息

细胞内源性microRNA(miRNA)在宿主与病原相互作用过程中发挥着重要的调节功能。为了分析细胞内源性miRNA与传染性法氏囊病病毒(IBDV)的相互作用,用IBDV弱毒和强毒分别感染鸡胚成纤维细胞(CEF)和SPF鸡,24h后,取感染CEF和法氏囊组织,提取细胞总RNA,用Hy3/Hy5双色荧光标记,与miRNA芯片杂交,进行芯片内标准化、芯片间标准化、表达差异比较以及聚类分析。结果显示:在IBDV弱毒感染的CEF中,有17个细胞内源性miRNA表达上调,17个miRNA表达下调;在IBDV强毒感染的鸡法氏囊组织细胞中,有30个细胞内源性miRNA表达上调,18个miRNA表达下调。根据表达差异显著的miRNA序列设计引物,用荧光定量RT-PCR方法验证芯片检测结果,2种方法的检测结果一致。结果表明,IBDV感染可诱导细胞内源性miRNA表达变化,这些上调或下调的miRNA能调控细胞内多种代谢和信号传导途径发生异常,引起细胞及组织器官发生病理学变化。

关键词：传染性法氏囊病病毒(IBDV) microRNA(miRNA) 基因芯片荧光定量PCR

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鹅黄病毒JS804株的生物学特性

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江苏农业学报 2012年第2期28卷 454-456页

作者：钮慧敏李银黄欣梅赵东敏刘宇卓张敬峰刘飞李彤彤周晓波李祥瑞江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

2010年4月以来,江苏、浙江、福建、安徽、山东、河南和河北等省的鸭、鹅发生了一种具有脑炎样神经症状的传染病。发病的种（蛋）鸭、种鹅产蛋量大幅下降甚至绝产,且其死亡率为2%～15%,而肉鸭、肉鹅死亡率为10%～55%,给鸭鹅养殖业造成了... 详细信息

2010年4月以来,江苏、浙江、福建、安徽、山东、河南和河北等省的鸭、鹅发生了一种具有脑炎样神经症状的传染病。发病的种（蛋）鸭、种鹅产蛋量大幅下降甚至绝产,且其死亡率为2%～15%,而肉鸭、肉鹅死亡率为10%～55%,给鸭鹅养殖业造成了重大的经济损失。通过流行病学调查。

关键词：鹅黄病毒 JS804 生物学特性

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猪Hokovirus PCR检测方法的建立及其应用

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中国预防兽医学报 2012年第2期34卷 108-111页

作者：李彬马俊杰毛立温立斌张雪寒倪艳秀周俊明何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

猪Hokovirus(PHoV)是近年来在香港发现的一种猪细小病毒。为及时评估该病毒在我国的感染及流行情况,本研究根据GenBank中登录的PHoV核苷酸序列设计并合成一对特异性引物,建立了PHoV的PCR检测方法。研究结果表明,所建立的PCR检测方法特... 详细信息

猪Hokovirus(PHoV)是近年来在香港发现的一种猪细小病毒。为及时评估该病毒在我国的感染及流行情况,本研究根据GenBank中登录的PHoV核苷酸序列设计并合成一对特异性引物,建立了PHoV的PCR检测方法。研究结果表明,所建立的PCR检测方法特异性强,对其它的猪主要病毒无交叉反应;敏感性较高,最低可以检测2.4×104拷贝/μL;而且重复性较好。采用该方法对2009年～2010年我国华东地区猪场的318份临床样品进行检测,结果显示38份样品为PHoV阳性,表明我国猪群中存在PHoV感染。本研究建立的PCR方法可以作为在临床上检测PHoV的一种有效手段。

关键词：猪Hokovirus 聚合酶链式反应检测

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猪肺炎支原体P159蛋白的截短表达及黏附活性研究

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中国预防兽医学报 2012年第12期34卷 959-962页

作者：刘茂军杜海霞杜改梅车巧林张悦熊祺琰白方方王海燕冯志新邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 金陵科技学院动物科学与技术学院江苏南京210038

为了解猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)P159蛋白的黏附活性,本实验利用PCR从Mhp NJ株扩增P159基因片段(3'端),克隆于pET-28a(+)进行表达,并用表达的截短蛋白进行黏附试验。结果表明,PCR扩增的目的基因片段约为450 bp;SD... 详细信息

为了解猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)P159蛋白的黏附活性,本实验利用PCR从Mhp NJ株扩增P159基因片段(3'端),克隆于pET-28a(+)进行表达,并用表达的截短蛋白进行黏附试验。结果表明,PCR扩增的目的基因片段约为450 bp;SDS-PAGE检测重组蛋白分子量为46 ku;western blot检测表明该重组蛋白能够与Mhp阳性血清发生特异性反应,表明该蛋白具有良好的免疫反应原性;表达的截短蛋白与Mhp的黏附试验结果表明,该重组蛋白可以粘附于猪肺上皮细胞(SJPL)表面,并部分抑制Mhp对SJPL的粘附作用。本研究结果为Mhp致病机制的进一步研究奠定了基础。

关键词：猪肺炎支原体 P159截短蛋白黏附活性

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猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白部分片段的原核表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立

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江苏农业学报 2012年第1期28卷 80-85页

作者：周俊明何孔旺倪艳秀俞正玉茅爱华吕立新温立斌张雪寒郭容利李彬王小敏江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了建立猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白(MRP)抗体间接ELISA检测方法,该研究首先克隆了MRP编码基因的部分片段,构建了重组表达质粒pET28a-mrp,并将该质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,获得了58 000的重组蛋白,经Ni柱纯化后,免疫印迹显示... 详细信息

为了建立猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白(MRP)抗体间接ELISA检测方法,该研究首先克隆了MRP编码基因的部分片段,构建了重组表达质粒pET28a-mrp,并将该质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,获得了58 000的重组蛋白,经Ni柱纯化后,免疫印迹显示MRP重组蛋白能够被猪链球菌2型抗体特异性识别。以纯化的MRP重组蛋白作为包被抗原,建立了猪链球菌2型MRP抗体检测间接ELISA方法。该ELISA方法的包被抗原浓度为10μg/ml,待检血清1∶50稀释,检测临床48份未免疫猪链球菌2型疫苗健康猪的血清。当效价(S/P)≥0.22时,判定待检血清样品为阳性;当S/P<0.22时,判定待检血清样品为阴性。运用建立的方法能特异性识别猪链球菌2型抗体,人工感染猪的MRP抗体于攻毒后14～28 d出现峰值,同时提示临床健康猪群的免疫功能存在个体差异。

关键词：猪链球菌2型 MRP 原核表达间接ELISA

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