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第九届全国病毒学学术研讨会

作者：毕振威王永山范红结王智群吴晓悠马金荣欧阳伟张海彬江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京农业大学动物医学院南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京农业大学动物医学院南京210095

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类猪圆环病毒因子P1感染对外周血单个核细胞Toll样受体mRNA转录的影响

类猪圆环病毒因子P1感染对外周血单个核细胞Toll样受体mRNA转录的...

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第五届中国畜牧科技论坛

作者：温立斌何孔旺杨汉春郭容利钟书霖俞正玉茅爱华江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心中国农业大学动物医学院江苏省农业科学院兽医研究所

实时定量反转录多聚酶链反应方法检测健康对照组及类圆环病毒因子P1感染组的猪外周血单个核细胞中TLRsmRNA的表达。结果表明,病毒感染后3天,除TLR2和TLR10外,其余TLRs mRNA表达皆下调。此后不同时相感染组的TLRs mRNA表达水平基本都处... 详细信息

实时定量反转录多聚酶链反应方法检测健康对照组及类圆环病毒因子P1感染组的猪外周血单个核细胞中TLRsmRNA的表达。结果表明,病毒感染后3天,除TLR2和TLR10外,其余TLRs mRNA表达皆下调。此后不同时相感染组的TLRs mRNA表达水平基本都处于恢复、上调地位。具有明显变化的表现为感染后第24天和第40天,TLR2 mRNA的表达显著上调(P<0.05);此外,感染后第31天和第40天的TLR9 mRNA表达也呈现上调趋势(P<0.1)。结果提示,TLR 2和TLR9介导的炎性反应可能在P1识别及其致病机制中起重要作用。

关键词：类猪圆环病毒因子 Toll样受体外周血单个核细胞实时定量PCR

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传染性法氏囊病病毒抗原表位与乙型肝炎病毒核心抗原嵌合体蛋白的表达及其免疫功能分析

传染性法氏囊病病毒抗原表位与乙型肝炎病毒核心抗原嵌合体蛋白的...

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第九届全国病毒学学术研讨会

作者：刘小娟王永山欧阳伟毕振威张海彬王忠灿南京农业大学动物医学院南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京农业大学动物医学院南京210095 南京军区军事医学研究所南京210002 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

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高致病性蓝耳病继发副猪嗜血杆菌病的诊治

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中国兽医杂志 2011年第7期47卷 75-75页

作者：甘源孔猛韦艳娜李彬刘冬阳刘茂军冯志新邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

高致病性猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株引起的一种急性高致死性传染病。副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌引起的一种以纤维素浆膜炎和多发性关节炎。

关键词：副猪嗜血杆菌病高致病性猪蓝耳病猪繁殖与呼吸综合征病毒诊治继发传染病致死性

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麻黄鱼腥草对鸡毒支原体病的临床治疗研究

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金陵科技学院学报 2011年第4期27卷 75-78页

作者：王海燕冯英珍张晓云东贤刘茂军甘源白昀邵国青江苏省农业科学院兽医研究所.农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室.国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 河北征宇制药有限公司.石家庄市动物专用免疫增强剂工程技术研究中心河北栾城051431 河北省石家庄市畜牧局河北石家庄050000

为观察麻黄鱼腥草口服液对人工感染鸡支原体病的治疗效果,将180羽20日龄健康鸡随机分成6组,经鸡毒支原体标准株R株感染后,用麻黄鱼腥草口服液高、中、低剂量组进行饮水治疗,并将酒石酸泰乐菌素设为对照。研究结果表明:当饮水中的浓度达... 详细信息

为观察麻黄鱼腥草口服液对人工感染鸡支原体病的治疗效果,将180羽20日龄健康鸡随机分成6组,经鸡毒支原体标准株R株感染后,用麻黄鱼腥草口服液高、中、低剂量组进行饮水治疗,并将酒石酸泰乐菌素设为对照。研究结果表明:当饮水中的浓度达到4 mL/L时,连用7 d,对鸡毒支原体感染鸡有明显的治疗效果,能显著降低对气囊的损伤,同时提高感染鸡的平均增重,有效率为96.7%,治愈率为60.0%。

关键词：麻黄鱼腥草口服液鸡毒支原体治疗试验

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基于物联网技术种猪管理平台的设计

基于物联网技术种猪管理平台的设计

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中国畜牧兽医学会信息技术分会2011年学术研讨会

作者：白红武胡肄农陈树贵王锋超江苏省农业科学院食品安全与检测研究所南京 210014 江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京 210014 江苏省农业科学院六合基地南京 210014 江苏明天农牧科技有限公司南京 210014

RFID电子耳标不仅能够对种猪个体进行标识，还能记录生猪饲养过程的重要数据，实现饲养过程的可追溯。将RFID技术、WSN技术、3G技术相融合，应用到规模化养殖场的管理中去。其中，RFID技术实现种猪个体识别与追踪，WSN技术完成种猪健康... 详细信息

RFID电子耳标不仅能够对种猪个体进行标识，还能记录生猪饲养过程的重要数据，实现饲养过程的可追溯。将RFID技术、WSN技术、3G技术相融合，应用到规模化养殖场的管理中去。其中，RFID技术实现种猪个体识别与追踪，WSN技术完成种猪健康状况和养殖场环境状况的实时监测，3G技术解决猪场视频传输问题，为养殖场的自动化管理、疫情防治和食品安全等问题提出了综合的解决办法。为此，在深入分析规模化种猪场数字化管理的基础上，综合应用物联网技术，对建立种猪管理平台关键部分进行了设计。

关键词： RFID耳标种猪场食品安全物联网个体识别

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肠出血性大肠杆菌O157:H7Tir基因的克隆、表达及生物学活性研究

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中国农业科学 2010年第12期43卷 2570-2577页

作者：张雪寒何孔旺茅爱华周俊明俞正玉温立斌倪艳秀郭容利吕立新江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心

【目的】克隆、表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7转位紧密素受体(Tir)基因,并研究其抗原性。【方法】选用pET28原核表达载体,体外构建Tir原核表达重组菌,并在大肠杆菌中获得高效表达。选用家兔制备高滴度多克隆抗体,Western blot分析... 详细信息

【目的】克隆、表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7转位紧密素受体(Tir)基因,并研究其抗原性。【方法】选用pET28原核表达载体,体外构建Tir原核表达重组菌,并在大肠杆菌中获得高效表达。选用家兔制备高滴度多克隆抗体,Western blot分析其免疫原性。选用HEp-2细胞进行粘附和粘附抑制试验,通过光镜、电镜和荧光显微镜进行观察。选用Balb/c小鼠进行免疫试验。【结果】成功获得高效表达重组Tir蛋白,并制备了兔源Tir多克隆抗体,Western blot分析此抗体能与Tir发生特异性抗原抗体反应。表达Tir蛋白能够抑制O157:H7对HEp-2细胞的粘附和A/E损伤。二免后Balb/c小鼠保护率高达75%以上。【结论】在大肠杆菌中成功克隆表达了Tir基因,所获重组Tir蛋白具有良好的抗原性,可能用于肠出血性大肠杆菌O157基因工程疫苗的研究。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7 转位紧密素受体表达粘附 A/E损伤免疫保护

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兔出血症病毒RT-PCR检测方法的建立及其临床应用

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畜牧兽医学报 2010年第11期41卷 1442-1446页

作者：胡波魏后军王芳范志宇徐鹏徐为中薛家宾何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

本研究旨在建立检测兔群鼻拭子中兔出血症病毒(RHDV)的RT-PCR方法,研究健康免疫兔群是否存在携带RHDV现象。根据GenBank上公布的RHDVvp60基因保守序列,设计了1对特异性引物,经cDNA的合成和PCR扩增,目的片段大小为591bp。结果表明该方法... 详细信息

本研究旨在建立检测兔群鼻拭子中兔出血症病毒(RHDV)的RT-PCR方法,研究健康免疫兔群是否存在携带RHDV现象。根据GenBank上公布的RHDVvp60基因保守序列,设计了1对特异性引物,经cDNA的合成和PCR扩增,目的片段大小为591bp。结果表明该方法能检出最小RNA浓度为2.40ng·μL-1,敏感性为血凝试验(HA)的8×103倍。通过对自5个省采集的168份健康免疫兔鼻拭子样品进行检测,结果显示,阳性样品为22份,阳性率为13.09%。试验表明:RT-PCR方法能快速、敏感地从健康免疫兔鼻拭子样品中检出RHDV,提示健康免疫兔群存在携带RHDV的现象,该方法适合临床进行大规模病原学检测和兔群携带病毒的调查,具有良好的应用前景。

关键词：兔出血症病毒 RT-PCR 鼻拭子病毒携带

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出血性大肠杆菌O157：H7 Stx2B-Tir-Stx1B多价融合蛋白表达及免疫原性研究

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华北农学报 2010年第4期25卷 180-185页

作者：张雪寒何孔旺卢维彩赵攀登温立斌李彬郭容利王小敏倪艳秀周俊明俞正玉茅爱华吕立新江苏省农业科学院兽医研究所、农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室、国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了更好防治由出血性大肠杆菌O157∶H7引起的疾病,尝试研制基因工程疫苗,其中亚单位疫苗时具有很大优势。构建表达tir和stx1b的融合基因,将tir基因中间295个氨基酸残基(Tir295)与stx1b亚基基因72个氨基酸串联构建pGEX-stx2b-tir-stx1b... 详细信息

为了更好防治由出血性大肠杆菌O157∶H7引起的疾病,尝试研制基因工程疫苗,其中亚单位疫苗时具有很大优势。构建表达tir和stx1b的融合基因,将tir基因中间295个氨基酸残基(Tir295)与stx1b亚基基因72个氨基酸串联构建pGEX-stx2b-tir-stx1b重组质粒,将其转化于BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳检测,该融合蛋白获得了高效表达,目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的30%左右。重组蛋白纯化后皮下途径免疫小鼠,能够诱导高滴度(105)的IgG,鼻腔内途径免疫小鼠不仅能够诱导高滴度(104)的IgG,还能诱导高达102的IgA。二免后攻击50LD50的EHECO157∶H7,相对于对照组,免疫组粪便中排菌量明显降低、排菌时间明显缩短。结果表明:该融合蛋白免疫原性良好,并且由Tir、Stx2b和Stx1b三部分抗原组成,可刺激机体产生针对转位紧密素受体(Tir)和志贺毒素(Stx)的抗体,在EHECO157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值。

关键词： EHECO157∶H7 转位紧密素受体志贺毒素融合基因免疫原性

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重组表达口蹄疫病毒T细胞表位猪细小病毒病毒样颗粒的制备

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中国预防兽医学报 2010年第11期32卷 844-848页

作者：潘群兴王永山何孔旺欧阳伟王晓丽诸玉梅夏兴霞江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为增强表位疫苗的免疫原性,本研究将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1中编码T细胞表位肽(aa 21～aa 40)序列连接于猪细小病毒(PPV)VP2的5'端,并插入到杆状病毒供体质粒pFastBac HTA中,构建成重组转座载体pFastBac-FMDV-VP1-PPV-VP2,转化含有... 详细信息

为增强表位疫苗的免疫原性,本研究将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1中编码T细胞表位肽(aa 21～aa 40)序列连接于猪细小病毒(PPV)VP2的5'端,并插入到杆状病毒供体质粒pFastBac HTA中,构建成重组转座载体pFastBac-FMDV-VP1-PPV-VP2,转化含有穿梭载体Bacmid的*** DH10Bac中,经蓝白菌落筛选获得重组杆状病毒表达质粒rBac-FMDV-VP1-PPV-VP2,转染昆虫草地夜蛾(Sf9)细胞,并在Sf9中进行了表达。电镜观察显示,表达的重组蛋白能够自我组装成病毒样颗粒rPPV∶VLP(FMDV)。用间接免疫荧光试验(IFA)、western blot分析表明,表达产物具有与PPV VP2天然蛋白相似的免疫原性。小鼠免疫实验证实,在低浓度FMDV抗原下能够产生特异性T淋巴细胞增殖反应;而且该病毒样颗粒能诱导机体产生抗FMDV特异性细胞免疫反应。

关键词：猪细小病毒病毒样颗粒 O型口蹄疫病毒 T细胞表位

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