检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：潘群兴王永山何孔旺欧阳伟王晓丽诸玉梅夏兴霞江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1上T细胞表位肽(第21～40残基)基因嵌合在PPV VP2的N端,克隆到杆状病毒供体质粒pFastBac HTA中,构建成重组转座载体pFastBac-FMDV VP1:PPV VP2,转化含有穿梭载体Bacmid的***10Bac中,发生转座作用,经蓝白斑筛选... 详细信息

将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1上T细胞表位肽(第21～40残基)基因嵌合在PPV VP2的N端,克隆到杆状病毒供体质粒pFastBac HTA中,构建成重组转座载体pFastBac-FMDV VP1:PPV VP2,转化含有穿梭载体Bacmid的***10Bac中,发生转座作用,经蓝白斑筛选获得重组杆状病毒表达质粒rBac-FMDV VP1:PPVVP2,转染昆虫草地夜蛾(Sf9)细胞,并在Sf9中进行了表达。用间接免疫荧光试验(IFA)、Westem-blot分析,表达产物具有与PPV VP2天然蛋白相似的生物活性。电镜观察,表达的蛋白能够自我组装成病毒样粒子[PPV:VLP(FMDV)]。

关键词： Porcine Parvovirus Food-and-mouth disease virus type 0 Virus-like particles

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出血性大肠杆菌O157:H7的2b-tir-1b多价融合蛋白表达及免疫原性研究

出血性大肠杆菌O157:H7的2b-tir-1b多价融合蛋白表达及免疫原性研...

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会

作者：张雪寒何孔旺卢维彩赵攀登温立斌李彬郭容利王小敏倪艳秀周俊明俞正玉茅爱华吕立新江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

为了更好防治由出血性大肠杆菌O157:H7引起的疾病,尝试研制基因工程疫苗,其中亚单位疫苗时具有很大优势。构建表达tir和stxb的融合基因,将tir基因中间295个氨基酸残基(Tir295)与stxB亚基基因72个氨基酸串联构建pGEX-stx2b-Tir295-stx1b... 详细信息

为了更好防治由出血性大肠杆菌O157:H7引起的疾病,尝试研制基因工程疫苗,其中亚单位疫苗时具有很大优势。构建表达tir和stxb的融合基因,将tir基因中间295个氨基酸残基(Tir295)与stxB亚基基因72个氨基酸串联构建pGEX-stx2b-Tir295-stx1b重组质粒,将其转化于BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳检测,该融合蛋白获得了高效表达,目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的30%左右。重组蛋白纯化后皮下途径免疫小鼠,能够诱导高滴度(105)的IgG,鼻腔内途径免疫小鼠不仅能够诱导高滴度(104)的IgG,还能诱导高达102的IgA。二免后攻击50LD50的EHEC O157:H7,相对于对照组,免疫组粪便中排菌量明显降低、排菌时间明显缩短。实验结果表明:该融合蛋白免疫原性良好,并且由Tir、stx1b和stx2b三部分抗原组成,可刺激机体产生针对转位紧密素受体(Tir)和志贺毒素(stx)的抗体,在EHEC O157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值。

关键词： EHEC O157:H7 转位紧密素受体志贺毒素融合基因免疫原性

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研制H9亚型禽流感疫苗用毒株的筛选

研制H9亚型禽流感疫苗用毒株的筛选

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会

作者：李银刘宇卓魏雪涛张敬峰江苏省农业科学院兽医研究所·农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心

国内外禽流感防制实践证明,禽流感油乳剂灭活疫苗对预防和控制禽流感发挥了重大作用。要想获得高免疫效力的疫苗,必须使用免疫原性好的毒株。近年来,国内研究机构和生产单位从发病禽分离到很多H9亚型禽流感病毒株,但这其中的大多

关键词：免疫原性禽流感疫苗

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鸭、鸡禽流感灭活疫苗(H9亚型,NJ01株)对流行毒株免疫攻毒保护试验的研究

鸭、鸡禽流感灭活疫苗(H9亚型,NJ01株)对流行毒株免疫攻毒保护试...

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会

作者：刘宇卓李银魏雪涛张敬峰江苏省农业科学院兽医研究所·农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心

近年来,禽流感H9亚型不同毒株的毒力发生了一定的变化,出现了不同毒株交叉保护率降低现象,导致低致病力毒株呈现广泛流行。为了考查本研究室研制的鸭、鸡禽流感灭活疫苗(H9亚型,NJ01株)对当前流行毒株的免疫攻毒保护情况,进行了本次试验... 详细信息

近年来,禽流感H9亚型不同毒株的毒力发生了一定的变化,出现了不同毒株交叉保护率降低现象,导致低致病力毒株呈现广泛流行。为了考查本研究室研制的鸭、鸡禽流感灭活疫苗(H9亚型,NJ01株)对当前流行毒株的免疫攻毒保护情况,进行了本次试验,现将试验结果报告如下:

关键词：攻毒保护禽流感灭活疫苗流行毒株

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大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制

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中国动物传染病学报 2010年第4期18卷 47-53页

作者：夏兴霞王永山孟祥升朱国强张雪寒何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 扬州大学兽医学院扬州225009

用***157∶H7菌体免疫BALB/c鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了16株分泌单克隆抗体（mAb）的杂交瘤细胞株。其中,1D3、2E7和2H7三株为O157∶H7特异单克隆抗体,Ig亚类分别为IgMκ、IgG2bκ和IgG2bκ,腹水抗体ELISA效价分别... 详细信息

用***157∶H7菌体免疫BALB/c鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了16株分泌单克隆抗体（mAb）的杂交瘤细胞株。其中,1D3、2E7和2H7三株为O157∶H7特异单克隆抗体,Ig亚类分别为IgMκ、IgG2bκ和IgG2bκ,腹水抗体ELISA效价分别为103、105和106。用纯化的单克隆抗体2E7标记胶体金,制备金标抗体玻璃纤维素膜;将纯化的2H7和羊抗鼠IgG分别作为检测和对照捕捉抗体包被于硝酸纤维素膜（NC）上;组装成双抗夹心法O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条。用该试纸条可特异检测O157∶H7,敏感度为106CFU/mL,与相同单克隆抗体2H7和2E7建立的O157∶H7夹心ELISA检测方法的敏感度相当,试纸条简便快速,在1~5 min内可得出检测结果,便于O157∶H7的临床快速诊断与现场检测样品的快速筛查。

关键词：大肠杆菌O157∶H7 单克隆抗体胶体金免疫层析试纸条人兽共患病

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检测兔出血症病毒抗体间接ELISA方法的建立

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江苏农业学报 2010年第3期26卷 546-550页

作者：李超美王芳蔡少平任雪枫胡波范志宇徐为中何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病免疫与诊断重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京出入境检验检疫局江苏南京210001 江苏省动物疫病预防控制中心江苏南京210036

为建立检测兔出血症病毒(RHDV)抗体的间接ELISA方法,应用杆状病毒表达系统表达的RHDV VP60包被酶标板,经间接ELISA的最佳反应条件优化试验确定:抗原的包被浓度为4.62μg/ml,标准阴、阳性血清稀释度为1∶200,封闭液选用2%明胶;羊抗兔IgG... 详细信息

为建立检测兔出血症病毒(RHDV)抗体的间接ELISA方法,应用杆状病毒表达系统表达的RHDV VP60包被酶标板,经间接ELISA的最佳反应条件优化试验确定:抗原的包被浓度为4.62μg/ml,标准阴、阳性血清稀释度为1∶200,封闭液选用2%明胶;羊抗兔IgG最佳稀释度为1∶4 000。阻断试验、特异性试验、敏感性试验、重复性试验结果显示,该方法具有较高的特异性、敏感性和重复性。用建立的ELISA方法与血凝抑制试验对临床血清样品进行检测,结果显示,ELISA与HI检测兔血清的RHDV抗体阳性率分别为84.7%(955/1 127)和76.0%(857/1 127),符合率为91.3%。该方法的建立为检测RHDV抗体提供了一种安全、特异、敏感、快速、操作简便经济的检测方法,为兔出血症免疫监测和预防控制提供了科学的技术手段。

关键词：兔出血症病毒 VP60 间接ELISA

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鸭瘟病毒PCR检测方法的建立

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浙江农业学报 2010年第6期22卷 750-753页

作者：魏雪涛张晓勇李银刘宇卓张敬峰聂文军江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 浙江省嘉兴市出入境检验检疫局浙江嘉兴314001 南京市浦口区兽医站江苏南京211800

根据GenBank发表的鸭瘟病毒(DPV)的基因序列,设计了针对DPV UL6 UL7保守区1对特异性引物。通过对反应条件的优化,建立了鸭瘟病毒快速鉴别诊断的PCR方法,扩增片段大小为1 293 bp。试验结果表明PCR法具有很强的特异性,且敏感性较高,最低DN... 详细信息

根据GenBank发表的鸭瘟病毒(DPV)的基因序列,设计了针对DPV UL6 UL7保守区1对特异性引物。通过对反应条件的优化,建立了鸭瘟病毒快速鉴别诊断的PCR方法,扩增片段大小为1 293 bp。试验结果表明PCR法具有很强的特异性,且敏感性较高,最低DNA模板检出量为15 pg/mL。对鸭瘟的临床病料检测证明,该方法具有特异、快速和敏感的特点,可有效鉴别DPV。

关键词：鸭瘟病毒 PCR 检测

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动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ．分泌抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ．分泌抗大肠杆菌...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：夏兴霞刘洁王永山诸玉梅欧阳伟何孔旺张雪寒江苏省农业科学院兽医研究所／农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室／国家兽用生物制品工程技术研究中心南京 210014 江苏省农业科学院兽医研究所／农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室／国家兽用生物制品工程技术研究中心南京 210014 南京农业大学动物医学院南京 210095

将*** O157∶H7(EHEC-O157∶H7)用甲醛灭活超声破碎，免疫BALB/c小鼠，制备免疫脾细胞;与SP/20骨髓瘤细胞融合后，获得七株分泌抗*** O157∶H7单克隆抗体(mAbs)的杂交瘤细胞株，分别命名为2E7、B8、E7、D3、H7、F1和C3，Ig亚类分别是IgG... 详细信息

将*** O157∶H7(EHEC-O157∶H7)用甲醛灭活超声破碎，免疫BALB/c小鼠，制备免疫脾细胞;与SP/20骨髓瘤细胞融合后，获得七株分泌抗*** O157∶H7单克隆抗体(mAbs)的杂交瘤细胞株，分别命名为2E7、B8、E7、D3、H7、F1和C3，Ig亚类分别是IgG2bK、***、IgMK，IgMK，IgMK和IgG2aK。用间接ELISA检测，E7和F1细胞培养上清液的效价为1.6×10 3，腹水效价均为1×1011;C3、2E7、B8、D3和H7细胞培养上清液的效价为1×101～2×102，腹水效价均为4×102～2.5×106。相加ELISA结果显示，D3和H7 mAbs对应相同的抗原表位，而其它五株对应不同的抗原表位。用间接ELISA分析特异性，2E7、H7和D3为抗EHEC-O157∶H7特异性单克隆抗体，其它四株mAbs与某些其他血清型的大肠杆菌有交叉反应。Western blotting表明，C3、E7和F1三株mAbs在蛋白分子量28kD处有特异性条带，2E7、D3和H7三株mAbs在蛋白分子量35kD处有特异性条带，而mAbs B8则未显示蛋白带。

关键词：肠出血性大肠杆菌 O157 H7 单克隆抗体生物制剂人兽共患病

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大肠杆菌O157∶H7抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制

大肠杆菌O157∶H7抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：刘洁夏兴霞王永山张雪寒费荣梅何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所／农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室／国家兽用生物制品工程技术研究中心南京 210014 南京农业大学动物医学院南京 210095 江苏省农业科学院兽医研究所／农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室／国家兽用生物制品工程技术研究中心南京 210014

用颗粒为20nm的胶体金溶液标记纯化的羊抗鼠IgG，制备金标探针，喷涂于玻璃纤维膜上;将大肠杆菌O157∶H7抗原和抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体F1分别包被于硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线，组装成鼠血清O157∶H7抗体胶体金免疫层析检... 详细信息

用颗粒为20nm的胶体金溶液标记纯化的羊抗鼠IgG，制备金标探针，喷涂于玻璃纤维膜上;将大肠杆菌O157∶H7抗原和抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体F1分别包被于硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线，组装成鼠血清O157∶H7抗体胶体金免疫层析检测试纸条。实验结果：该试纸条仅与O157∶H7阳性鼠血清发生特异性反应;用该试纸条与常规间接ELISA平行比较检测O157∶H7免疫鼠血清，抗体效价分别为106和105，两者的敏感度相当。该试纸条操作简便，10 min可出结果，适用于调查与追溯鼠O157∶H7感染状况时的现场检测。

关键词：肠出血性大肠杆菌 O157∶H7 胶体金免疫层析试纸条动物模型

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猪肺炎支原体p97黏附蛋白基因抗原表位片段的克隆与序列分析

猪肺炎支原体p97黏附蛋白基因抗原表位片段的克隆与序列分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会

作者：刘茂军邵国青冯志新熊琪琰王海燕王占伟白昀吴叙苏孙佩元甘源孔猛刘冬霞王丽刘冬阳江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京天邦生物科技有限公司

根据Genbank中猪肺炎支原体J株模式株(ATCC25934或NCTC10110)与168株P97基因序列进行同源性比较,设计一对特异性引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增出猪肺炎支原体168株特异性蛋白P97基因序列的R1R2区序列,克隆入T载体,并进行测序,将测... 详细信息

根据Genbank中猪肺炎支原体J株模式株(ATCC25934或NCTC10110)与168株P97基因序列进行同源性比较,设计一对特异性引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增出猪肺炎支原体168株特异性蛋白P97基因序列的R1R2区序列,克隆入T载体,并进行测序,将测序结果与NCBI上公布的序列进行比较,找出变异规律,这为MHP的毒力研究提供新的思路,也为MHP病的诊断提供依据。

关键词：猪肺炎支原体 P97基因克隆序列分析

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