检索结果-内蒙古大学图书馆

江苏农业学报 2015年第3期31卷 590-594页

作者：周俊明何孔旺倪艳秀祝昊丹俞正玉茅爱华吕立新温立斌张雪寒王小敏汪伟李彬郭容利江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了原核表达猪源马链球菌兽疫亚种去除信号肽的类M蛋白质,并分析该蛋白质对小鼠的免疫保护力,克隆了马链球菌兽疫亚种CY菌株去除信号肽的类M蛋白质基因Szp,并将Szp基因插入p ET28a表达载体,IPTG诱导,获得重组类M蛋白质,弗氏佐剂乳化重... 详细信息

为了原核表达猪源马链球菌兽疫亚种去除信号肽的类M蛋白质,并分析该蛋白质对小鼠的免疫保护力,克隆了马链球菌兽疫亚种CY菌株去除信号肽的类M蛋白质基因Szp,并将Szp基因插入p ET28a表达载体,IPTG诱导,获得重组类M蛋白质,弗氏佐剂乳化重组类M蛋白质后,3次免疫小鼠,用同源菌株CY攻击。诱导获得分子量约5.8×104的重组蛋白质,免疫印迹结果表明该重组类M蛋白质能够被马链球菌兽疫亚种猪多抗识别。类M蛋白质免疫小鼠的存活率为60%,弗氏佐剂乳化灭活CY免疫小鼠的存活率为70%,PBS对照组小鼠攻毒后6 d内全部死亡。表达的类M蛋白质可以给予ICR小鼠部分的免疫保护力,保护效果略低于CY全菌灭活苗,提示可以对马链球菌兽疫亚种多种免疫保护性抗原进行联合,从而进一步提高对动物的免疫保护力。

关键词：马链球菌兽疫亚种类M蛋白质原核表达疫苗

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副猪嗜血杆菌对豚鼠和小鼠的致病力研究

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中国兽医杂志 2015年第5期51卷 80-82页

作者：王占伟刘茂军王丽邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了验证副猪嗜血杆菌分离株FS0307株、XX0306株和标准株HS1079株的致病力,本文以豚鼠和Balb/c小鼠作为模型动物,分别腹腔接种副猪嗜血杆菌FS0307株、XX0306株和HS1079株,观察临床症状和死亡情况,并进行Hps的再分离和血清抗体检测。结... 详细信息

为了验证副猪嗜血杆菌分离株FS0307株、XX0306株和标准株HS1079株的致病力,本文以豚鼠和Balb/c小鼠作为模型动物,分别腹腔接种副猪嗜血杆菌FS0307株、XX0306株和HS1079株,观察临床症状和死亡情况,并进行Hps的再分离和血清抗体检测。结果显示,2株副猪嗜血杆菌分离株均能引起豚鼠和Balb/c小鼠100%发病,以及对豚鼠和小鼠的致死率均分别达到100%和20%;标准株HS1079株能引起豚鼠和Balb/c小鼠100%发病,并对豚鼠有80%的致死率,而不致死小鼠。可见,副猪嗜血杆菌FS0307株、XX0306株和HS1079株的致病力均较强,这为副猪嗜血杆菌病疫苗的研究提供了可靠的技术参数。

关键词：副猪嗜血杆菌致病力豚鼠 Balb/c小鼠

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携带口蹄疫病毒B细胞表位的兔出血症病毒样颗粒的表达及其免疫原性研究

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华北农学报 2015年第1期30卷 142-149页

作者：盛蓉宋艳华胡波范志宇姜平薛家宾魏后军王芳江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为了研究RHDV病毒样粒子作为载体提呈外源B细胞表位的能力，以兔出血症病毒（ RHDV ）衣壳蛋白VP60为载体，构建携带FMDV B细胞表位（ FMDV VP1 B细胞表位200～213 aa ）的VP60嵌合蛋白，研究外源基因对VP60蛋白的表达、病毒样颗粒（ V... 详细信息

为了研究RHDV病毒样粒子作为载体提呈外源B细胞表位的能力，以兔出血症病毒（ RHDV ）衣壳蛋白VP60为载体，构建携带FMDV B细胞表位（ FMDV VP1 B细胞表位200～213 aa ）的VP60嵌合蛋白，研究外源基因对VP60蛋白的表达、病毒样颗粒（ VLPs）的装配及免疫原性的影响。分别在RHDV衣壳蛋白的C端、N端、306和307位氨基酸之间插入外源B细胞表位（ FMDV VP1 B细胞表位200～213 aa ），得到嵌合VP60基因。利用杆状病毒表达系统表达嵌合蛋白，分别命名为VP60-2F、VP60-306F和VP60-578F。经IFA、SDS-PAGE和Western Blot方法鉴定嵌合蛋白的表达，通过电镜观察嵌合蛋白自聚为病毒样颗粒的能力，通过动物试验研究其免疫原性。结果显示，嵌合VP60蛋白在杆状病毒表达系统中得到高效表达，可自聚形成病毒样颗粒，免疫小鼠后可以产生针对VP60和B细胞表位特异的免疫应答。该研究为嵌合VP60 VLPs的形成及结构功能的研究奠定基础，同时为RHDV-VLPs作为外源B细胞表位展示载体的可行性提供依据。

关键词：兔出血症病毒病毒样颗粒口蹄疫病毒 B细胞表位载体

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后备母猪入群前的抗体筛查在某规模化猪场的应用

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江苏农业科学 2015年第12期43卷 249-250页

作者：赵永前孙华伟何孔旺茅爱华蒋晨慧张敬峰江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了探索后备猪入群前进行猪瘟和猪伪狂犬病毒gp I(野毒)抗体的筛查在猪场实际生产中对初产母猪生产成绩的影响,2014年5月对安徽省和县某规模化猪场的36头后备母猪随机等分为2组,试验组在入群前进行上述2种抗体的检测,对猪瘟抗体不合格... 详细信息

为了探索后备猪入群前进行猪瘟和猪伪狂犬病毒gp I(野毒)抗体的筛查在猪场实际生产中对初产母猪生产成绩的影响,2014年5月对安徽省和县某规模化猪场的36头后备母猪随机等分为2组,试验组在入群前进行上述2种抗体的检测,对猪瘟抗体不合格、猪伪狂犬gp I抗体阳性的后备猪不予入群,试验组不进行检测直接入群。待此批后备母猪妊娠结束,试验组和对照组的窝平活健仔数分别为10.42、9.78头;28日龄平均断奶质量分别为6.94、6.49 kg,差异显著;断奶育成率分别为98.63%、96.02%,差异不显著。在后备母猪入群前进行猪瘟和猪伪狂犬gp I的抗体筛查能显著提高初产母猪的窝平活健仔数、平均断奶质量。

关键词：猪瘟抗体伪狂犬病病毒初产母猪

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鹅坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅲ的原核表达及抗原性分析

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南方农业学报 2015年第1期46卷 150-154页

作者：黄欣梅赵冬敏刘宇卓杨婧韩凯凯李银江苏省农业科学院兽医研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室南京210014

【目的】获得鹅坦布苏病毒(GTMUV)E蛋白结构域III的原核表达重组蛋白并明确其免疫原性,为进一步研究其生物学功能及研制亚单位疫苗奠定基础。【方法】根据Gen Bank中GTMUV JS804株E蛋白结构域III的同源基因序列设计1对引物,在其两端加入... 详细信息

【目的】获得鹅坦布苏病毒(GTMUV)E蛋白结构域III的原核表达重组蛋白并明确其免疫原性,为进一步研究其生物学功能及研制亚单位疫苗奠定基础。【方法】根据Gen Bank中GTMUV JS804株E蛋白结构域III的同源基因序列设计1对引物,在其两端加入Flag标签序列和酶切位点,采用PCR扩增GTMUV的E蛋白结构域III基因(EIII),然后与p ET32a原核表达载体连接构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)后用IPTG诱导融合蛋白表达,并以Western blotting鉴定其免疫原性。【结果】PCR扩增获得携带Flag标签序列的EIII基因片段约430 bp,将其插入p ET32a载体可成功构建重组质粒p ET32a-EIII。阳性重组菌经IPTG诱导表达5 h即可得到融合蛋白,分子质量约33.0 k Da,主要以包涵体形式存在。Western blotting鉴定结果显示,融合蛋白与抗Flag标签单克隆抗体、小鼠抗坦布苏病毒多克隆抗体均可发生特异性反应,检测到预期的目的条带。【结论】GTMUV E蛋白结构域Ⅲ能在大肠杆菌中成功诱导表达,且获得的融合蛋白具有良好的免疫原性,可用于研制GTMUV诊断抗原和亚单位疫苗。

关键词：鹅坦布苏病毒 E蛋白结构域Ⅲ 原核表达免疫原性

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1株猪源乙型脑炎病毒株的免疫原性研究

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江苏农业科学 2015年第11期43卷 306-308页

作者：唐波张道华张雪花常晨刘国阳华涛侯继波江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心/江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014

将从江苏地区筛选出的1株增殖性能稳定猪源JEV JS01毒株作为疫苗,用毒株制备灭活疫苗进行免疫原性研究。试验采用经过细胞传代获得JEV JS01病毒液(1×10^(7.5)TCID50/m L),以甲醛灭活后加入油佐剂,制备猪源乙型脑炎灭活疫苗。腹腔免... 详细信息

将从江苏地区筛选出的1株增殖性能稳定猪源JEV JS01毒株作为疫苗,用毒株制备灭活疫苗进行免疫原性研究。试验采用经过细胞传代获得JEV JS01病毒液(1×10^(7.5)TCID50/m L),以甲醛灭活后加入油佐剂,制备猪源乙型脑炎灭活疫苗。腹腔免疫9~12 g小鼠,攻毒保护结果显示对照组小鼠全部死亡,免疫组90%以上健活。分别肌肉注射免疫仔猪及后备母猪,不同时间采集血清测定JEV ELISA抗体。检测结果显示,免疫后试验猪血清抗体效价较免疫前均有显著提高,后备母猪免疫8个月后抗体仍全部为阳性,抗体水平与免疫剂量呈正相关性。试验表明该猪源乙脑病毒JS01毒株具有良好的免疫原性,可以用作疫苗用毒株。

关键词：猪源乙型脑炎病毒免疫原性灭活疫苗

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山羊源副流感病毒3型JS2013株HN基因的原核表达与抗原性分析

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中国兽医科学 2015年第6期45卷 596-601页

作者：邓加武李文良毛立杨蕾蕾张纹纹魏建忠江杰元安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

参考GenBank中牛副流感病毒3型(BPIV3)内蒙古09株(NM09)全基因组序列(GenBank登录号:JQ063064),设计了1对特异性引物以扩增山羊源副流感病毒3型(PIV3)JS2013株HN基因部分序列;将扩增到的基因测序后进行同源性分析。同源性分析结果表明,... 详细信息

参考GenBank中牛副流感病毒3型(BPIV3)内蒙古09株(NM09)全基因组序列(GenBank登录号:JQ063064),设计了1对特异性引物以扩增山羊源副流感病毒3型(PIV3)JS2013株HN基因部分序列;将扩增到的基因测序后进行同源性分析。同源性分析结果表明,它与已报道的HPIV3、BPIV3 HN基因的序列同源性最高,分别为74.3%、79.8%。进化树分析表明,JS2013株并不属于HPIV3与BPIV3,形成一个独立的分支。将HN基因片段克隆至原核表达载体pET-32a(+),获得原核重组质粒pET-32a(+)-HN。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态菌株中,经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE与Western-blot试验分析表明,重组蛋白诱导表达成功,并以包涵体形式存在,大小为46ku。经Western-blot试验验证,重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备的超免疫血清能够与重组蛋白反应;把病毒接种给MDBK细胞后,间接免疫荧光试验表明重组蛋白的多克隆抗体与病毒产生特异性荧光反应,表明该重组蛋白具有很好的免疫原性和反应原性。本试验结果为山羊源副流感病毒3型感染诊断方法的建立和疫苗的研制奠定了基础。

关键词：山羊副流感病毒3型 HN基因原核表达抗原性分析

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类猪圆环病毒 P1 VP1蛋白在昆虫细胞中的表达及特性分析

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华北农学报 2015年第4期30卷 90-94页

作者：王凤芝温立斌何孔旺姚火春王小敏江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为了鉴定类猪圆环病毒P1 VP1蛋白能否在体外自组装成病毒样颗粒(VLPs),首先PCR扩增P1 ORF1基因,利用p Fast BacTM1载体构建重组质粒,通过脂质体转染在Sf9细胞中表达P1 ORF1基因。然后通过RT-PCR技术及Western Blot分别从转录和蛋白质水... 详细信息

为了鉴定类猪圆环病毒P1 VP1蛋白能否在体外自组装成病毒样颗粒(VLPs),首先PCR扩增P1 ORF1基因,利用p Fast BacTM1载体构建重组质粒,通过脂质体转染在Sf9细胞中表达P1 ORF1基因。然后通过RT-PCR技术及Western Blot分别从转录和蛋白质水平上鉴定该基因的表达,应用透射电镜观察该蛋白质是否形成了VLPs。结果显示,转染Sf9细胞后,第5天开始出现细胞病变;从接毒细胞中提取总RNA,经Recombinant DNaseⅠ处理除去基因组DNA后,RT-PCR能够扩增出362 bp的目的片段;收获接毒后72 h的细胞,Western Blot分析显示,P1 ORF1重组病毒样品能够与抗P1 VP1单抗发生特异性反应;电镜观察发现,该蛋白在Sf9细胞中形成了近椭圆形的包涵体。利用杆状病毒表达载体系统成功地在Sf9细胞中表达了类猪圆环病毒P1的ORF1基因,并证实在本试验条件下P1 VP1蛋白不能自组装成VLPs,为进一步研究P1 VP1蛋白的免疫学特性奠定基础。

关键词： P1 VP1 昆虫杆状病毒表达载体系统 RT-PCR Western Blot 电镜

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RHDV VLPs对口蹄疫病毒B细胞表位的展示效果

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江苏农业学报 2015年第6期31卷 1362-1370页

作者：胡波盛蓉宋艳华范志宇魏后军薛家宾王芳江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为研究兔出血症病毒(RHDV)病毒样颗粒(VLPs)携带外源表位的能力及其免疫原性,以兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60为载体,分别在RHDV VP60蛋白质的C端、N端和306位插入FMDV VP1双串联B细胞表位[GS-(200~213 aa)-GS-(141~160 aa)],得到嵌... 详细信息

为研究兔出血症病毒(RHDV)病毒样颗粒(VLPs)携带外源表位的能力及其免疫原性,以兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60为载体,分别在RHDV VP60蛋白质的C端、N端和306位插入FMDV VP1双串联B细胞表位[GS-(200~213 aa)-GS-(141~160 aa)],得到嵌合蛋白质,分别命名为VP60-2FB、VP60-306FB和VP60-578FB。经IFA、SDS-PAGE和Western blot鉴定,嵌合VP60蛋白质在杆状病毒表达系统中均得到有效表达;通过电镜观察发现嵌合蛋白质可自聚成病毒样颗粒。将嵌合蛋白质免疫小鼠,检测产生的免疫应答情况,结果显示,嵌合蛋白质可以产生针对VP60特异的免疫应答,且在插入长度为42 aa外源氨基酸片段的情况下,嵌合蛋白质免疫的小鼠仍能诱导产生较高水平的针对外源表位的特异性应答。在进一步扩展了载体的容纳性后,序列的增加不影响VLPs的形成以及对外源表位的递呈效果,说明VP60-VLPs作为外源B细胞表位展示载体是可行性的。

关键词：兔出血症病毒病毒样颗粒口蹄疫病毒 B细胞表位载体

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副猪嗜血杆菌病疫苗新制苗菌株FS0307的毒力和OMP P5基因研究

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中国兽医学报 2015年第4期35卷 565-568页

作者：王占伟周勇岐王丽刘茂军邵国青江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京天邦生物科技有限公司江苏南京210012

为了进一步研究副猪嗜血杆菌FS0307株的特性,本研究对该菌株的外膜蛋白P5基因进行测序分析,并进行其对豚鼠的致病力研究。结果显示,Hps FS0307株的序列与相同血清型的国际标准株SW124的同源性为98.3%,与多数国内分离株的同源性在98%以上... 详细信息

为了进一步研究副猪嗜血杆菌FS0307株的特性,本研究对该菌株的外膜蛋白P5基因进行测序分析,并进行其对豚鼠的致病力研究。结果显示,Hps FS0307株的序列与相同血清型的国际标准株SW124的同源性为98.3%,与多数国内分离株的同源性在98%以上,与美国分离株2170B的同源性为95.6%,而与3株其他血清型国际标准株的同源性在89.5%~95.1%之间;遗传系统进化树显示与4型国内分离株SC085(HM747106)在同一分支上。且能引起豚鼠100%发病,100%死亡。说明Hps FS0307株与国内流行菌株更相似,是1株优良的副猪嗜血杆菌病疫苗的制苗菌株。

关键词：副猪嗜血杆菌 FS0307株外膜蛋白P5基因毒力

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