检索结果-内蒙古大学图书馆

安徽农业科学 2015年第32期43卷 89-92页

作者：宋艳华张燕胡波范志宇魏后军刘星黄兵薛家宾徐为中王芳江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 山东省农业科学院家禽研究所山东济南250023

为研究RHDV VP60作为载体容纳外源片段以及递呈外源T细胞表位的能力,将双串联卵清蛋白T细胞表位插入N端、C端以及替代N端氨基酸的方式获得3种嵌合蛋白,进行免疫试验。3种嵌合蛋白分别命名为DN1、DN2和DC,将蛋白进行浓缩、纯化及定量,利... 详细信息

为研究RHDV VP60作为载体容纳外源片段以及递呈外源T细胞表位的能力,将双串联卵清蛋白T细胞表位插入N端、C端以及替代N端氨基酸的方式获得3种嵌合蛋白,进行免疫试验。3种嵌合蛋白分别命名为DN1、DN2和DC,将蛋白进行浓缩、纯化及定量,利用透射电镜观察VLPs的形成,发现均可形成形态大小与VP60相似的VLPs。将3种嵌合蛋白分别腹腔注射C57BL/6雌性小鼠,利用间接ELISA检测首免后0、4和6周小鼠血清样品中VP60特异性抗体,结果表明嵌合蛋白组与VP60组均能够诱导产生较高水平的抗VP60特异性抗体,2组间无显著差异。首免后6周,利用合成的OVA多肽刺激脾淋巴细胞,ELISPOT检测特异性IFN-γ的分泌水平,结果表明3种嵌合蛋白均能诱导特异性IFN-γ的分泌。该研究扩展了VP60作为载体可携带的外源片段的耐受性及有效递呈T细胞表位的能力,为VP60-VLPs展示系统的研究提供了理论依据。

关键词： RHDV 衣壳蛋白 OVA T细胞表位嵌合蛋白免疫原性研究

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H7-HCP-Tir-Intimin高效降低小鼠粪便中大肠杆菌O157:H7排菌

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中国兽医学报 2014年第3期34卷 465-470页

作者：张雪寒何孔旺叶青俞正玉倪艳秀温立斌王小敏李彬周俊明汪伟江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

构建BL21(PcoldⅠ-fliC-hcpA-tir-eae),并评价对小鼠的免疫原性,以期研制更加有效的候选免疫原,最大限度降低*** O157:H7对食物、环境和人类的危害。将946、423、309、811bp的fliC,hcpA,tir和eae基因被依次克隆,中间添加8个氨基酸的间... 详细信息

构建BL21(PcoldⅠ-fliC-hcpA-tir-eae),并评价对小鼠的免疫原性,以期研制更加有效的候选免疫原,最大限度降低*** O157:H7对食物、环境和人类的危害。将946、423、309、811bp的fliC,hcpA,tir和eae基因被依次克隆,中间添加8个氨基酸的间隔序列,构建重组菌BL21(PcoldⅠ-fliC-hcpA-tir-eae)。进口白油和ISA50V作为佐剂与重组蛋白乳化,制备2种油乳剂疫苗,分别接种4周龄BALB/c雄鼠,二免21d,口服攻击*** O157:H7109 CFU/只,每天采集粪便,检测排菌。结果显示,2种重组疫苗均能够诱导高滴度血清IgG。ISA50V佐剂组抗体产生早于进口白油佐剂组,但进口白油佐剂组抗体滴度一致性更好。所有免疫组小鼠排菌极度降低,第1天排菌低于104 CFU/g,第5天检测不到排菌,整个检测期无反弹,而对照组在整个检测期排菌持续很高(>104 CFU/g)。结果表明,四价重组蛋白H7-HCP-Tir-Intimin能够高效降低口服大肠杆菌O157:H7后的排菌,极显著降低细菌的定植,很大程度减少病原传播,对环境和人类的威胁。

关键词： E coli 0157 H7 鞭毛 Ⅳ菌毛紧密素转位受体蛋白紧密素疫苗排菌小鼠

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不同毒力猪肺炎支原体侵入宿主细胞的观察

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畜牧兽医学报 2014年第6期45卷 981-988页

作者：车巧林刘蓓蓓刘茂军熊祺琰邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

旨在研究不同毒力猪肺炎支原体对宿主细胞的侵入以及侵入后在宿主细胞内的分布位置。首先用猪肺炎支原体野毒株XLW-1感染PK15细胞不同时间后,间接免疫荧光染色,激光扫描共聚焦显微镜对PK15细胞进行断层扫描,以观察XLW-1能否侵入细胞以... 详细信息

旨在研究不同毒力猪肺炎支原体对宿主细胞的侵入以及侵入后在宿主细胞内的分布位置。首先用猪肺炎支原体野毒株XLW-1感染PK15细胞不同时间后,间接免疫荧光染色,激光扫描共聚焦显微镜对PK15细胞进行断层扫描,以观察XLW-1能否侵入细胞以及感染时间对XLW-1侵入细胞的影响。然后,在能侵入细胞的基础上,用不同毒力的猪肺炎支原体感染宿主细胞STEC、PK15、SJPL和3D4/21,观察它们对宿主细胞的侵入情况。结果表明,猪肺炎支原体野毒株XLW-1与PK15细胞作用8h时不能侵入PK15,作用10h以上时可以侵入PK15,并且随着作用时间的延长侵入的猪肺炎支原体也在增加。研究还表明猪肺炎支原体野毒株XLW-1、168致弱株和168疫苗株均能侵入STEC、PK15、SJPL和3D4/21。并且,STEC中3个菌株均随机分布在细胞质中;PK15中3个菌株均主要分布在靠近细胞膜和细胞两端狭长的细胞质中;SJPL中XLW-1和168疫苗株主要分布在贴近细胞膜内侧的细胞质中,168致弱株则散布在细胞质中;3D4/21中XLW-1和168致弱株主要分布在贴近细胞膜内侧的细胞质中,168疫苗株则在整个细胞质中分布较多。结果提示不同毒力的猪肺炎支原体均能侵入宿主细胞STEC、PK15、SJPL和3D4/21。

关键词：猪肺炎支原体不同毒力宿主细胞侵入

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通用引物检测志贺毒素和紧密素多个基因亚型

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中国人兽共患病学报 2014年第6期30卷 607-611,617页

作者：张雪寒汪伟何孔旺倪艳秀温立斌李彬王小敏周俊明江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

目的旨在建立同时检测stx2和intimin两个基因多个变型的双重PCR快速检测技术，更好满足实验室和临床检测的需求。方法以stx2主要的6个亚型和intimin主要的27个基因亚型为靶序列，设计引物，建立双重PCR方法，分析其敏感性、特异性，并... 详细信息

目的旨在建立同时检测stx2和intimin两个基因多个变型的双重PCR快速检测技术，更好满足实验室和临床检测的需求。方法以stx2主要的6个亚型和intimin主要的27个基因亚型为靶序列，设计引物，建立双重PCR方法，分析其敏感性、特异性，并检测模拟制备的阳性样品。结果stx2-intimin双重PCR扩增片段分别为388bp和609bp，检测大肠杆菌纯培养物最低限介于10～100cFu／mL，增菌样品最低检测限介于1～10CFU／g，特异性检测intimin和stx2的多个亚型。结论Stx2-Intimin二重PCR技术灵敏、特异、通用和高效。

关键词：大肠杆菌致病群志贺毒素紧密素变异型 PCR

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类猪圆环病毒 P1转录的 Northern Blot 分析

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华北农学报 2014年第4期29卷 160-163页

作者：温立斌王凤芝何孔旺倪艳秀张雪寒李彬王小敏郭容利周俊明俞正玉茅爱华吕立新解建平江苏省农业科学院兽医研究所、农业部兽用生物制品工程技术重点实验室、国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为鉴定类猪圆环病毒P1的转录本,采用地高辛标记的RNA探针,通过Northern Blot方法,对转染PK15细胞的类猪圆环病毒P1进行了RNA转录分析。结果表明,Northern杂交可检测到2个RNA转录本,包括正链上ORF3的RNA和负链上ORF1的RNA。同时,ORF3 RN... 详细信息

为鉴定类猪圆环病毒P1的转录本,采用地高辛标记的RNA探针,通过Northern Blot方法,对转染PK15细胞的类猪圆环病毒P1进行了RNA转录分析。结果表明,Northern杂交可检测到2个RNA转录本,包括正链上ORF3的RNA和负链上ORF1的RNA。同时,ORF3 RNA表达时间比ORF1的短,且丰度也大大低于ORF1。类猪圆环病毒P1至少存在ORF1和ORF3 2个转录本。

关键词：类猪圆环病毒P1 转录分析 Northern Blot

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1株HoBi样瘟病毒的分离与序列分析

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中国兽医学报 2014年第5期34卷 717-721页

作者：毛立李文良张纹纹杨蕾蕾刘霞江杰元江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

本研究在MDBK细胞培养物中发现并分离出1株HoBi样瘟病毒,将该毒株命名为JS12/01。应用RT-PCR方法分段扩增该毒株的全基因组序列,并对其基因组序列进行分析。结果显示,该毒株基因序列2端分别为5′端非编码区(5′untranslated region,5′-... 详细信息

本研究在MDBK细胞培养物中发现并分离出1株HoBi样瘟病毒,将该毒株命名为JS12/01。应用RT-PCR方法分段扩增该毒株的全基因组序列,并对其基因组序列进行分析。结果显示,该毒株基因序列2端分别为5′端非编码区(5′untranslated region,5′-UTR)和3′端非编码区(3′untranslated region,3′-UTR),编码区为11 700nt。与GenBank中登录的部分瘟病毒属代表毒株5′-UTR区序列进行进化分析,结果表明,该毒株属于HoBi样瘟病毒巴西源亚型。本研究中的HoBi样瘟病毒JS12/01株为国内首次分离鉴定,证实了该病毒在中国的存在,需要对该病毒的扩散与流行采取预防措施。

关键词： HoBi样瘟病毒全基因组序列分析

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疫病及兽药残留事件暴发的经济损失评估模型构建

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江苏农业学报 2014年第1期30卷 212-218页

作者：陆昌华吴孜忞胡肄农谭业平江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

针对当前重大动物疫病暴发和兽药残留事件的频繁发生,将兽医流行病学与经济学相结合,探讨畜产品质量安全事件的经济损失评估模型的构建。本研究分析了①因质量问题造成畜产品出口损失估算,包括短期损失和长期损失的影响;②由兽药残留事... 详细信息

针对当前重大动物疫病暴发和兽药残留事件的频繁发生,将兽医流行病学与经济学相结合,探讨畜产品质量安全事件的经济损失评估模型的构建。本研究分析了①因质量问题造成畜产品出口损失估算,包括短期损失和长期损失的影响;②由兽药残留事件引起出口受阻的损失评估模型;③重大疫情暴发的损失评估模型;④总体损失概念模型;⑤疫病对资源和消费者的影响。建立了疫病及兽药残留事件暴发的经济损失评估模型。

关键词：畜产品质量安全动物疫病兽药残留经济评估模型

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猪链球菌丝氨酸/苏氨酸激酶基因缺失株的构建及其致病性

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江苏农业学报 2014年第6期30卷 1360-1368页

作者：祝昊丹倪艳秀周俊明俞正玉茅爱华吕立新何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了研究丝氨酸/苏氨酸磷激酶(STK)在猪链球菌致病过程中的作用,利用大肠杆菌-猪链球菌穿梭质粒p SET4s构建STK基因缺失株△stk。结果显示,stk基因缺失后,缺失株△stk易形成长链状结构;缺失株的半致死剂量(LD50)较亲本株高7倍,对CD1小... 详细信息

为了研究丝氨酸/苏氨酸磷激酶(STK)在猪链球菌致病过程中的作用,利用大肠杆菌-猪链球菌穿梭质粒p SET4s构建STK基因缺失株△stk。结果显示,stk基因缺失后,缺失株△stk易形成长链状结构;缺失株的半致死剂量(LD50)较亲本株高7倍,对CD1小鼠的致病能力降低;体内定植试验结果表明缺失株△stk在小鼠体内各器官的定植能力显著降低。这些数据表明STK与猪链球菌2型(SS2)的致病性相关。

关键词：猪链球菌2型丝氨酸/苏氨酸激酶毒力

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猪链球菌2型丝氨酸/苏氨酸磷酸酶的鉴定和特性分析

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江苏农业学报 2014年第3期30卷 548-553页

利用PCR扩增猪链球菌2型强毒株SS2-1丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(STP)的编码基因,克隆到表达载体pET-30a(+),在大肠杆菌BL21中进行原核表达,获得重组蛋白质rSsSTP。重组蛋白质经His蛋白质层析柱纯化后,利用pNPP分析rSsSTP的酶活性。结果显示rSs... 详细信息

利用PCR扩增猪链球菌2型强毒株SS2-1丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(STP)的编码基因,克隆到表达载体pET-30a(+),在大肠杆菌BL21中进行原核表达,获得重组蛋白质rSsSTP。重组蛋白质经His蛋白质层析柱纯化后,利用pNPP分析rSsSTP的酶活性。结果显示rSsSTP为Mn2+依赖的磷酸酶,最适离子浓度为2 mmol/L,最佳反应温度为37℃,最佳pH值为8.0。

关键词：猪链球菌2型丝氨酸苏氨酸磷酸酶鉴定 Streptococcus suis type 2

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猪链球菌2型粘附相关因子荧光定量PCR检测方法的建立

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江苏农业学报 2014年第3期30卷 560-566页

作者：汪伟何孔旺倪艳秀周俊明张雪寒俞正玉吕立新茅爱华温立斌王小敏李彬郭容利江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了建立定量检测猪链球菌2型(SS2)粘附相关因子mRNA转录水平的荧光定量PCR方法,根据已报导的SS2粘附相关因子甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、分选酶A(SrtA)、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGD)及其管家基因aroA,用GenBank登录的核苷酸序列,设... 详细信息

为了建立定量检测猪链球菌2型(SS2)粘附相关因子mRNA转录水平的荧光定量PCR方法,根据已报导的SS2粘附相关因子甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、分选酶A(SrtA)、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGD)及其管家基因aroA,用GenBank登录的核苷酸序列,设计特异性引物,提取SS2总RNA,经RT-PCR扩增和克隆了各粘附相关因子的核苷酸片段,以构建含有各自引物扩增序列的重组质粒,建立检测各粘附相关因子SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。该方法起始模板数的对数与荧光信号达到所设定荧光阈值所经历的循环数(Ct)之间线性关系好,相关系数均达到0.995以上;扩增产物形成单一的特异性熔解峰;初始模板的检出下限达到了1μl 1.0×102拷贝数;组内变异系数小于2%,说明该方法特异性强、敏感性高、重复性好。

关键词：猪链球菌2型粘附相关因子 Streptococcus suis 2

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