检索结果-内蒙古大学图书馆

南方农业学报 2014年第12期45卷 2259-2263页

作者：赵冬敏黄欣梅刘宇卓韩凯凯杨婧谢星星刘晓燕李银江苏省农业科学院兽医研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室南京210014

【目的】明确鹅坦布苏病毒(GTUMV)E蛋白结构域I的原核表达及免疫原性,为进一步研究GTMUV E蛋白结构的生物学特性、免疫学功能等奠定基础。【方法】通过人工合成方法获得GTMUV E蛋白结构域I的编码基因(EI基因),并与携带GST标签的p GEX-4... 详细信息

【目的】明确鹅坦布苏病毒(GTUMV)E蛋白结构域I的原核表达及免疫原性,为进一步研究GTMUV E蛋白结构的生物学特性、免疫学功能等奠定基础。【方法】通过人工合成方法获得GTMUV E蛋白结构域I的编码基因(EI基因),并与携带GST标签的p GEX-4t-1载体连接,转入大肠杆菌后经诱导表达获得融合蛋白,并以Western blotting鉴定融合蛋白是否有免疫原性。【结果】合成获得的E1基因片段为411 bp,将其插入p GEX-4t-1载体可构建重组表达质粒p GEX-4t-1-EI。阳性重组菌经1 mmol/L IPTG诱导5 h后,融合蛋白的表达量达最高峰,且以包涵体形式存在,分子量约41.0 k Da。Western blotting鉴定结果显示,融合蛋白与GST标签抗体和E蛋白阳性血清均可发生特异性反应,检测到预期的目的条带。【结论】GTMUV E蛋白结构域I可在大肠杆菌中成功诱导表达,且获得的融合蛋白具有良好的免疫原性,可用于GTMUV血清学检测试剂盒的研发。

关键词：鹅坦布苏病毒 E蛋白结构域Ⅰ 原核表达免疫原性

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猪肺炎支原体P65基因原核表达及免疫原性分析

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畜牧兽医学报 2014年第2期45卷 262-267页

作者：刘茂军张悦杜改梅白昀王海燕姜平邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京农业大学动物医学院南京210095

P65蛋白是猪肺炎支原体的主要免疫优势蛋白,与其他支原体无交叉反应,常作为猪肺炎支原体检测的靶蛋白。本研究通过基因合成获得P65基因中含有3个稀有密码子的前922bp,利用PCR从Mhp168株扩增获得P65基因后段,然后通过重叠延伸PCR(SOE-PCR... 详细信息

P65蛋白是猪肺炎支原体的主要免疫优势蛋白,与其他支原体无交叉反应,常作为猪肺炎支原体检测的靶蛋白。本研究通过基因合成获得P65基因中含有3个稀有密码子的前922bp,利用PCR从Mhp168株扩增获得P65基因后段,然后通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)将前后段连接后,克隆入pET-32a(+)中,获得重组质粒pET-32a(+)/mhp P65,经IPTG诱导获得87ku的重组融合蛋白,Western blot分析表明其与Mhp血清呈强阳性反应。将该重组蛋白免疫小鼠获得了高滴度的特异性抗体,表明该蛋白具有良好的免疫原性。本研究成功表达了可溶性的Mhp P65融合蛋白,其具有较好的免疫原性,这为猪肺炎支原体P65蛋白的功能研究以及诊断学方法的建立和亚单位疫苗的研制提供了帮助。

关键词：猪肺炎支原体 P65基因原核表达免疫原性

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几种佐剂对猪支原体肺炎灭活疫苗的免疫增强作用比较

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中国预防兽医学报 2014年第1期36卷 67-70页

作者：董璐熊祺琰刘茂军韦艳娜冯志新白方方王海燕邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 山西农业大学动物科技学院山西太谷030801

为研发和评价猪支原体肺炎(MPS)灭活疫苗新型佐剂,本研究以水包油乳剂或水性高分子聚合物卡波姆佐剂为基础的MPS灭活疫苗,在其中分别添加左旋咪唑、黄芪多糖、免疫刺激复合物基质(ISCOM-matirx)或胸腺肽,得到不同的佐剂配方,同时选用3... 详细信息

为研发和评价猪支原体肺炎(MPS)灭活疫苗新型佐剂,本研究以水包油乳剂或水性高分子聚合物卡波姆佐剂为基础的MPS灭活疫苗,在其中分别添加左旋咪唑、黄芪多糖、免疫刺激复合物基质(ISCOM-matirx)或胸腺肽,得到不同的佐剂配方,同时选用3种商品化佐剂进行同步试验评价。将这些佐剂与MPS灭活疫苗合用免疫小鼠,检测淋巴细胞增殖情况及血清抗体IgG水平,用以比较几种佐剂对该疫苗中的免疫增强效果。结果表明,与对照组相比,各佐剂组均有明显免疫应答反应。其中,卡波姆+ISCOM-matrix佐剂组对增强小鼠淋巴细胞增殖能力及血清中抗体水平为各组间最高,其次为卡波姆+左旋咪唑佐剂组;GEL 01 ST佐剂能够增强疫苗的细胞免疫刺激能力,而对体液免疫作用稍差,卡波姆+胸腺肽佐剂组的血清抗体水平较高,但对淋巴细胞增殖没有明显作用。本实验结果将为后续的MPS灭活疫苗的研发提供了实验依据。

关键词：佐剂猪支原体肺炎灭活疫苗

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家兔γ干扰素基因的原核表达及其表达产物的单克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2014年第9期44卷 939-943页

作者：彭伟宋艳华胡波范志宇魏后军王芳姜平南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

将PCR扩增的家兔γ干扰素基因克隆至pET-28a(+)原核表达载体上,构建重组载体pET-28a(+)-IFN-γ。重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导、HisTrap亲和柱纯化,获得IFN-γ重组蛋白。以IFN-γ重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤... 详细信息

将PCR扩增的家兔γ干扰素基因克隆至pET-28a(+)原核表达载体上,构建重组载体pET-28a(+)-IFN-γ。重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导、HisTrap亲和柱纯化,获得IFN-γ重组蛋白。以IFN-γ重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞技术获得4株抗IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别被命名为3H8、4G4、4F10、6C12,它们的亚型分别为IgG1、κ链,IgG2b、κ链,IgG1、κ链,IgG1、κ链。分别制备单克隆抗体腹水,结果,4株单克隆抗体腹水的间接ELISA效价在10-4~10-5之间。本试验通过制备抗家兔IFN-γ单克隆抗体,为研究和检测IFN-γ提供了一种重要的工具。

关键词：家兔 γ干扰素原核表达单克隆抗体

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猪鼻支原体黏附宿主细胞间接免疫荧光检测方法的建立

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中国人兽共患病学报 2014年第3期30卷 239-243页

作者：纪燕熊祺琰韦艳娜马庆红白方方冯志新刘茂军邵国青南京农业大学动物医学院南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

目的猪鼻支原体是临床猪场的常见病菌,可引起猪多发性浆膜炎、肺炎、关节炎、中耳炎等慢性炎症,同时其与多种人类肿瘤有明显相关性,但其致病机理有待深入,其感染细胞机制的研究尚未明确,因此,本研究欲建立一种用间接免疫荧光技术检测猪... 详细信息

目的猪鼻支原体是临床猪场的常见病菌,可引起猪多发性浆膜炎、肺炎、关节炎、中耳炎等慢性炎症,同时其与多种人类肿瘤有明显相关性,但其致病机理有待深入,其感染细胞机制的研究尚未明确,因此,本研究欲建立一种用间接免疫荧光技术检测猪鼻支原体黏附宿主细胞的方法。方法以猪鼻支原体和猪肾上皮细胞为研究对象,以兔抗猪鼻支原体纯化抗体为一抗,以FITC标记的羊抗兔IgG为二抗,通过反应条件的优化,建立猪鼻支原体黏附宿主细胞的间接免疫荧光检测方法(IFA)。结果最终确定最小黏附滴度为1∶107 CCU/mL,猪鼻支原体黏附PK15所需时间为6h以上,一抗的最佳工作浓度为1∶100,二抗的最佳工作浓度为1∶1 600。结论表明间接免疫荧光技术可以用来检测猪鼻支原体对宿主细胞的黏附作用。为猪鼻支原体的研究特别是感染细胞机制的体外研究提供基础方法,同时为疾病的诊断及疫苗的研发奠定基础。

关键词：猪鼻支原体黏附间接免疫荧光技术

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兔出血症病毒衣壳蛋白N端携带双串联卵清蛋白T细胞表位嵌合体的构建与表达

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畜牧与兽医 2014年第6期46卷 1-8页

作者：张燕王芳胡波宋艳华范志宇魏后军姜平南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

在兔出血症病毒(RHDV)主要结构蛋白VP60的N端插入双串联卵清蛋白(OVA)CD8+T细胞表位(OVA第257-264位氨基酸),研究外源片段对VP60蛋白表达及病毒样颗粒(VLPs)装配的影响,分析VP60作为载体的可行性和对外源基因长度的耐受性。通过分子生... 详细信息

在兔出血症病毒(RHDV)主要结构蛋白VP60的N端插入双串联卵清蛋白(OVA)CD8+T细胞表位(OVA第257-264位氨基酸),研究外源片段对VP60蛋白表达及病毒样颗粒(VLPs)装配的影响,分析VP60作为载体的可行性和对外源基因长度的耐受性。通过分子生物学方法将双串联OVA CD8+T细胞表位(257-264aa)插入至RHDV衣壳蛋白VP60基因序列的N端,得到重组VP60基因。利用杆状病毒表达系统表达嵌合蛋白,并命名为DN。经RT-PCR、间接免疫荧光、SDS-PAGE、Western blot方法鉴定嵌合蛋白DN的表达,利用电镜观察嵌合蛋白病毒样颗粒的形成。结果表明嵌合VP60蛋白在杆状病毒表达系统中得到高效表达,且可形成与RHDV VLPs类似的病毒样颗粒。本研究为VP60作为载体系统,有效提呈外源片段的研究提供了重要依据,同时也为VLPs疫苗的研制奠定了基础。

关键词：兔出血症病毒 VP60 OVA T细胞表位病毒样颗粒

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规模猪场猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)风险评估系统的构建

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江苏农业学报 2014年第3期30卷 602-606页

作者：谭业平陆昌华胡肄农何孔旺黄小国江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 江苏康乐农牧有限公司江苏常州213149

为建立适用于现代规模猪场的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)风险评估方法,以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)传入猪场和场内循环传播的相关风险因素组成的总体风险为建模系统,将其按层次建成由2个Ⅰ级、8个Ⅱ级和29个Ⅲ级风险指标变量组成的... 详细信息

为建立适用于现代规模猪场的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)风险评估方法,以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)传入猪场和场内循环传播的相关风险因素组成的总体风险为建模系统,将其按层次建成由2个Ⅰ级、8个Ⅱ级和29个Ⅲ级风险指标变量组成的评估指标体系,并以此为基础构建了计算各级指标变量风险值的评估系统。该评估系统通过调查问卷、实地收集和工具辅助3种指标数据采集方法获取猪场PRRS风险相关数据,并计算输出各级指标风险值,提示猪场高风险指标和单一高风险因子,为规模猪场PRRS风险管理决策提供支持。

关键词：规模猪场猪繁殖与呼吸综合征风险评估 porcine reproductive and respiratory syndrome ( PRRS)

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猪TTV2 ORF1基因的原核表达及多克隆抗体的制备

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江苏农业学报 2014年第1期30卷 119-124页

作者：张文文王小敏肖琦周忠涛汪伟温立斌李彬郭容利张雪寒周俊明倪艳秀吕立新俞正玉茅爱华胡屹屹刘永杰何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为了构建猪输血传播病毒2型(TTV2)ORF1基因部分片段的原核表达载体,进行原核表达,并利用重组蛋白质制备猪TTV2的多克隆抗体,采用PCR方法扩增出猪TTV2 ORF1基因的部分片段,将其克隆至原核表达载体pcoldI中,构建原核表达质粒pcold-g1,然... 详细信息

为了构建猪输血传播病毒2型(TTV2)ORF1基因部分片段的原核表达载体,进行原核表达,并利用重组蛋白质制备猪TTV2的多克隆抗体,采用PCR方法扩增出猪TTV2 ORF1基因的部分片段,将其克隆至原核表达载体pcoldI中,构建原核表达质粒pcold-g1,然后转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达。表达产物通过镍离子亲和层析柱进行纯化,用Western blot进行鉴定。将纯化的重组蛋白质免疫新西兰大白兔制备猪TTV2多克隆抗体,Western blot检测抗体特异性,间接ELISA检测抗体效价。PCR扩增获得大小为1 227 bp的片段,重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确;重组蛋白质分子量为5.2×104,主要以包涵体形式存在,纯化后纯度可达95%以上,具有较好的抗原性;制备的多克隆抗体特异性高,抗体效价达1∶12 800。重组蛋白质在大肠杆菌中得到了高效表达,为建立TTV2间接ELISA检测方法提供了优质的包被抗原。

关键词：猪TTV2 ORF1基因原核表达多克隆抗体

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新型蒙脱石对仔猪生长性能和血常规的影响

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西南农业学报 2014年第4期27卷 1777-1780页

作者：胡屹屹苏永腾何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所.农业部兽用生物制品工程技术重点实验室.国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京禾嘉牧业有限公司江苏南京211135

为了拟探讨新型蒙脱石对仔猪生长性能和血常规的影响,选取30头健康"杜×大×长"三元杂交断奶仔猪,随机分为5组。分别饲喂基础日粮、基础日粮+1 g/kg新型蒙脱石、基础日粮+3 g/kg新型蒙脱石、基础日粮+5 g/kg新型蒙脱... 详细信息

为了拟探讨新型蒙脱石对仔猪生长性能和血常规的影响,选取30头健康"杜×大×长"三元杂交断奶仔猪,随机分为5组。分别饲喂基础日粮、基础日粮+1 g/kg新型蒙脱石、基础日粮+3 g/kg新型蒙脱石、基础日粮+5 g/kg新型蒙脱石和基础日粮+3 g/kg微生态制剂,进行42 d的饲养试验。结果表明,与空白对照组相比,新型蒙脱石可以显著提高日增重、采食量和料重比,降低腹泻率与腹泻指数,改善血常规指标。因此,新型蒙脱石可能具有一定的促生长抗腹泻与免疫增强作用。

关键词：蒙脱石断奶仔猪生长性能腹泻血常规

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类猪圆环病毒P1诱导PK15细胞自噬的研究

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华北农学报 2014年第B12期29卷 85-88页

作者：温立斌王凤芝何孔旺解建平贾化生江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 张家口市动物卫生监督所河北张家口075000

旨在探讨类猪圆环病毒P1感染对PK15细胞自噬的影响。将同一批PK15细胞分成对照组和感染组,感染组在类猪圆环病毒P1感染PK15细胞后14,24,48 h分别收集细胞,对照组也在同样时间收获,用透射电镜观察自噬现象的发生。结果表明,与对照组相比... 详细信息

旨在探讨类猪圆环病毒P1感染对PK15细胞自噬的影响。将同一批PK15细胞分成对照组和感染组,感染组在类猪圆环病毒P1感染PK15细胞后14,24,48 h分别收集细胞,对照组也在同样时间收获,用透射电镜观察自噬现象的发生。结果表明,与对照组相比,感染组PK15细胞内出现典型自噬形态学变化。揭示类猪圆环病毒P1能诱导PK15细胞发生自噬,但细胞发生自噬的相关信号传导通路还有待进一步研究。

关键词：类猪圆环病毒P1 PK15细胞自噬

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