检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2021年第5期43卷 527-533页

作者：杜露平章晨昕侯立婷于晓明郑其升陈瑾江苏省农业科学院动物免疫工程研究所江苏南京210014 江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 省部共建国家重点实验室培育基地-江苏省食品质量安全重点实验室江苏南京210014

为探究免疫增强剂CVC1302缩短口蹄疫灭活疫苗(KV)免疫应答窗口期的机制,本研究将灭活的O型口蹄疫病毒(FMDV)与CVC1302按照1.50配比后,与ISA206佐剂乳化制备疫苗(KV-CVC1302);将灭活的FMDV与ISA206佐剂乳化制备疫苗(KV),将上述疫苗分别免... 详细信息

为探究免疫增强剂CVC1302缩短口蹄疫灭活疫苗(KV)免疫应答窗口期的机制,本研究将灭活的O型口蹄疫病毒(FMDV)与CVC1302按照1.50配比后,与ISA206佐剂乳化制备疫苗(KV-CVC1302);将灭活的FMDV与ISA206佐剂乳化制备疫苗(KV),将上述疫苗分别免疫6周龄BALB/c雌性小鼠。免疫后7 d、28 d、56 d、90 d、120 d、150 d和180 d采血分离血清,利用O型FMD液相阻断ELISA(LBP ELISA)试剂盒检测各组小鼠血清FMDV特异性抗体水平。免疫后1 d,取注射位点肌肉,分别利用qPCR和ELISA检测其中细胞趋化因子的转录及表达水平。免疫后1 d、3 d、5 d和7 d分别采集注射位点肌肉及腹股沟淋巴结,制备单个淋巴细胞,利用流式细胞仪检测注射位点肌肉和腹股沟淋巴结的抗原递呈细胞(APC)[树突状细胞(DC)、巨噬细胞(Mph)、单核细胞(Mo)]的数量;免疫后1 d,利用流式细胞仪检测注射位点肌肉中DC的活化情况。结果显示,KV-CVC1302组小鼠FMDV特异性抗体水平、注射位点趋化因子转录及表达水平均显著高于KV组(p<0.01、p<0.001);且注射位点APC的数量及DC的活化水平也显著提高(p<0.001),该组小鼠腹股沟淋巴结APC的数量也明显高于KV组(p<0.05、p<0.01或p<0.001)。综上结果表明,CVC1302通过增强KV于注射位点诱导产生趋化因子的能力,募集大量的APC,进而对FMDV进行有效的捕获加工和递呈,转运至腹股沟淋巴结,诱导B细胞的形成,并分泌高水平抗体,从而缩短免疫应答窗口期。本研究首次证实CVC1302是在疫苗诱导免疫应答的启动阶段发挥作用,其通过募集活化的APC捕获更为有效的抗原以激活免疫系统,缩短了免疫应答窗口期,为后续研制新型免疫增强剂提供了新思路。

关键词：免疫增强剂 O型口蹄疫病毒免疫应答窗口期

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苏北地区奶牛场无乳链球菌分离株毒力分析

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江苏农业科学 2021年第5期49卷 142-149页

作者：马芳周明旭张金秋杨世芳卢宇邓碧华江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地/江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 江苏省动物重要疾病与人畜共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 江苏大学食品与生物工程学院江苏镇江212013

奶牛乳腺炎导致奶牛产奶量下降和乳制品质量降低,是奶牛养殖业重要的经济性疾病,在全球范围内造成巨大经济损失。选取苏北奶牛场3株代表性无乳链球菌分离株,SAG-FX17分离自临床型乳腺炎、CM31分离自隐性乳腺炎和CM41b分离自隐性发展为... 详细信息

奶牛乳腺炎导致奶牛产奶量下降和乳制品质量降低,是奶牛养殖业重要的经济性疾病,在全球范围内造成巨大经济损失。选取苏北奶牛场3株代表性无乳链球菌分离株,SAG-FX17分离自临床型乳腺炎、CM31分离自隐性乳腺炎和CM41b分离自隐性发展为临床型乳腺炎奶牛乳汁,研究比较3株细菌生长特性、毒力因子分布、形成生物被膜能力及其对奶牛乳腺上皮细胞的黏附、侵袭和胞内存活能力。试验结果表明,3株分离株血清型均为Ⅰa型,2b型菌毛,gapC基因和cylE基因阳性,但仅SAG-FX17的α相关蛋白家族为Alp1型,其他2株为未定型。研究发现SAG-FX17与奶牛乳腺上皮细胞(Mac-T)共孵育时生成生物被膜能力明显增强,且该菌对Mac-T细胞黏附率为52.5%,显著高于CM31和CM41b。侵袭试验结果表明,3株细菌侵袭到细菌内部的能力很低,但侵袭到细胞内的细菌具有一定存活能力,侵入细胞4h3株分离株SAG-FX17、CM31、CM41b存活率分别为24%、18%、86.7%。综上所述,无乳链球菌在奶牛乳腺上皮细胞表面形成生物被膜及其在胞内存活能力是影响细菌致病性的重要因素。

关键词：无乳链球菌毒力因子:生物被膜黏附胞内存活能力奶牛场苏北地区

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小鼠转录因子STAT1真核表达质粒的构建及生物学功能分析

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江苏农业学报 2019年第1期35卷 136-141页

作者：韩凯凯赵冬敏毕可然章丽娇刘青涛刘宇卓黄欣梅杨婧李银江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

本研究以小鼠组织的总RNA为模板,通过RT-PCR扩增得到小鼠信号转导子和转录激活子1(STAT1)基因完整开放阅读框的碱基序列,然后将其克隆到真核表达载体p DsRed-N1中,构建p DsRed-N1-STAT1重组质粒。测序成功的真核质粒转染至BHK-21细胞,... 详细信息

本研究以小鼠组织的总RNA为模板,通过RT-PCR扩增得到小鼠信号转导子和转录激活子1(STAT1)基因完整开放阅读框的碱基序列,然后将其克隆到真核表达载体p DsRed-N1中,构建p DsRed-N1-STAT1重组质粒。测序成功的真核质粒转染至BHK-21细胞,通过α干扰素(IFN-α)分子刺激,检测细胞中STAT1分子的活化状态与定位,最终通过坦布苏病毒刺激,荧光显微镜检测STAT1分子的细胞内定位。结果表明,小鼠的STAT1基因开放阅读框为2 250 bp,编码749个氨基酸。同源性比对结果表明,小鼠STAT1与人、大鼠、猪、马等哺乳动物STAT1氨基酸序列的一致性分别为92%、97%、91%、91%。转染结果表明,构建的p DsRed-N1-STAT1真核表达质粒在BHK-21细胞中成功表达,无IFN-α刺激时,红色荧光只在BHK-21细胞的细胞质中出现,而加入IFN-α后,红色荧光则大多分布于细胞核内。用坦布苏病毒感染细胞后,红色荧光多分布于细胞质中。说明,构建的真核质粒p DsRed-N1-STAT1在哺乳动物细胞中能够正确表达融合蛋白质Red-STAT1,而且在IFN-α刺激下,Red-STAT1可由细胞质向细胞核转运,同时发现,坦布苏病毒感染能够有效抑制STAT1分子的核转运。

关键词：小鼠信号转导子和转录激活子1 α干扰素

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猪肺炎支原体醛缩酶原核表达及致猪气管上皮细胞凋亡的研究

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动物医学进展 2019年第6期40卷 17-22页

作者：华利忠王世杰马丹夫刘茂军冯志新刘蓓蓓韦艳娜于岩飞邵国青江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学江苏南京210014

为了研究Ⅱ类果糖二磷酸醛缩酶(FBA)是否为猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)的毒力因子,并参与其致病作用,根据已发表的猪肺炎支原体醛缩酶全基因序列设计特异性的引物,以猪肺炎支原体168株基因组为模板,通过Overlap PCR点... 详细信息

为了研究Ⅱ类果糖二磷酸醛缩酶(FBA)是否为猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)的毒力因子,并参与其致病作用,根据已发表的猪肺炎支原体醛缩酶全基因序列设计特异性的引物,以猪肺炎支原体168株基因组为模板,通过Overlap PCR点突变扩增醛缩酶基因。将FBA克隆至pET-28a(+)载体后进行序列测定和分析,结果表明,FBA基因全长864 bp。将构建的重组表达质粒pET-28a(+)/FBA转化至大肠埃希菌BL21(DE3),通过筛选获得阳性克隆,重组工程菌在IPTG诱导下成功获得表达融合蛋白猪肺炎支原体Ⅱ类果糖二磷酸醛缩酶(Mhp FBA),大小约为35 ku。纯化蛋白并接种于猪气管上皮细胞至FBA终浓度分别为0、10、50、100、150、200μg/mL,孵育24 h后进行上清中丙酮酸浓度的检测和细胞凋亡检测。结果上清中丙酮酸浓度随着FBA浓度的上升,出现先极显著上升(P<0.01)、后急剧下降的现象;细胞平均凋亡率依次分别为3.54%、10.91%、13.99%、27.19%、32.84%和40.71%,并随着FBA浓度的升高而升高,且相比阴性对照组差异均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)。成功构建了Mhp FBA重组菌,表达获得了Mhp重组蛋白FBA,该蛋白可能为猪肺炎支原体的毒力因子,参与猪肺炎支原体的致病作用,从而为进一步开展Mhp致病机理和药物研究奠定基础。

关键词：猪肺炎支原体果糖二磷酸醛缩酶原核表达气管上皮细胞凋亡

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鉴别犬瘟热病毒强弱毒株中和单克隆抗体的制备

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江苏农业科学 2020年第20期48卷 178-182页

作者：毕振威徐立波夏兴霞梁霆王永山江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 山东省招远市农业农村局山东招远265400 江苏省农业农村厅江苏南京210036

为了制备鉴别犬瘟热病毒(CDV)流行强毒株和疫苗弱毒株的单克隆抗体,将CDV 851弱毒株浓缩后经蔗糖密度梯度离心纯化,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0瘤细胞进行细胞融合,经3~5次克隆,间接ELISA筛选,获得稳定分泌抗CDV的杂交瘤细... 详细信息

为了制备鉴别犬瘟热病毒(CDV)流行强毒株和疫苗弱毒株的单克隆抗体,将CDV 851弱毒株浓缩后经蔗糖密度梯度离心纯化,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0瘤细胞进行细胞融合,经3~5次克隆,间接ELISA筛选,获得稳定分泌抗CDV的杂交瘤细胞2D12株。该细胞株分泌的单克隆抗体亚类为IgG1κ,与常见犬病毒不发生交叉反应。间接免疫荧光显示,单克隆抗体与CDV 851毒株发生特异性反应,与杆状病毒表达的CDV 851毒株H蛋白发生特异性反应。Western blot检测发现,单克隆抗体与2株CDV强毒株H蛋白不发生反应,而与2株CDV弱毒株H蛋白有特异性反应。双抗体夹心ELISA显示,单克隆抗体能检测CDV疫苗弱毒株而不能检测CDV强毒株。病毒中和试验证实,单克隆抗体对CDV 851弱毒株具有中和能力。制备了区分CDV强毒株和疫苗弱毒的单克隆抗体,为CDV的鉴别诊断技术研究奠定了基础。

关键词：犬瘟热病毒单克隆抗体流行毒株疫苗毒株鉴别检测

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江苏某牛场生牛乳中肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌的分离鉴定、耐药性和毒力分析

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中国兽医学报 2019年第6期39卷 1140-1144,1162页

作者：葛东红周明旭朱纯鲍熹卢宇张雪寒淮安市淮安区动物卫生监督所江苏淮安223200 江苏省农业科学院动物免疫工程研究所国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014

肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌均是重要的条件致病菌,其具备的多重耐药性是造成医院内感染并难以治愈的主要原因。本试验从江苏某奶牛场隐性乳房炎奶牛的生牛乳样品中分离到3株肺炎克雷伯菌及4株鲍曼不动杆菌,通过耐药性检测发现其中部分... 详细信息

肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌均是重要的条件致病菌,其具备的多重耐药性是造成医院内感染并难以治愈的主要原因。本试验从江苏某奶牛场隐性乳房炎奶牛的生牛乳样品中分离到3株肺炎克雷伯菌及4株鲍曼不动杆菌,通过耐药性检测发现其中部分菌株具有对万古霉素、克林霉素、头孢唑啉和呋喃妥因等抗生素的多重耐药性;小鼠毒力试验表明分离菌株具备较强的毒力。本试验为奶牛场预防和治疗该类病原感染提供参考依据,同时对耐药菌株可能引起的公共卫生安全问题提出警示。

关键词：奶牛乳房炎肺炎克雷伯菌鲍曼不动杆菌耐药性毒力

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多杀性巴氏杆菌OmpH对宿主Fn和Plg粘附作用的初步研究

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中国兽医杂志 2019年第10期55卷 13-16,19页

作者：陈露朱伟峰魏后军胡波仇汝龙范志宇陈萌萌薛家宾索朗斯珠王芳西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 江苏省农业科学院兽医研究所江苏南京210014 农业部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014 国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

多杀性巴氏杆菌是一种重要的多种动物共患病病原和人兽共患病病原。OmpH是多杀性巴氏杆菌的保护性抗原和宿主细胞粘附因子。很多细菌的粘附因子可以通过粘附Fn等宿主胞外基质分子或血浆纤维蛋白溶解酶原(Plg)从而促进粘附过程,OmpH可能... 详细信息

多杀性巴氏杆菌是一种重要的多种动物共患病病原和人兽共患病病原。OmpH是多杀性巴氏杆菌的保护性抗原和宿主细胞粘附因子。很多细菌的粘附因子可以通过粘附Fn等宿主胞外基质分子或血浆纤维蛋白溶解酶原(Plg)从而促进粘附过程,OmpH可能也具有此功能。为了研究OmpH对宿主Fn和Plg的粘附作用,采用原核表达系统表达OmpH,通过Far Western Blot试验和招募抑制试验研究了OmpH对Fn和Plg的结合作用及OmpH多克隆抗体对多杀性巴氏杆菌结合这些分子的抑制作用。结果显示,重组OmpH对Fn和Plg有结合作用,OmpH抗体能够显著抑制多杀性巴氏杆菌对Fn和Plg的粘附。本研究初步证明OmpH能够通过结合宿主Fn和Plg促进多杀性巴氏杆菌的粘附作用,增加了多杀性巴氏杆菌毒力因子和分子致病机制的认识,对巴氏杆菌病防控具有积极意义。

关键词：多杀性巴氏杆菌 OmpH 纤维连接蛋白血浆纤维溶解酶原

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新型鹅星状病毒AHQJ18株的分离鉴定

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江苏农业学报 2019年第5期35卷 1262-1264页

作者：章丽娇黄欣梅刘飞刘青涛韩凯凯赵冬敏杨婧刘宇卓李银江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 山东鲁抗舍里乐药业有限公司山东济宁272000

星状病毒于1975年在肠炎患儿的粪便样品中被首次发现[1],随着时间的推移和检测技术的不断进步,星状病毒的种类、宿主及流行范围相继扩大。目前,星状病毒在全世界不同地区不同种类哺乳动物中的感染非常普遍,并且还能感染各种禽类[2]。星... 详细信息

星状病毒于1975年在肠炎患儿的粪便样品中被首次发现[1],随着时间的推移和检测技术的不断进步,星状病毒的种类、宿主及流行范围相继扩大。目前,星状病毒在全世界不同地区不同种类哺乳动物中的感染非常普遍,并且还能感染各种禽类[2]。星状病毒主要引起感染哺乳动物的肠道疾病,对于感染的禽类,除肠道炎症外,还可引发鸡肾脏疾病,雏鸭的病毒性肝炎等[3-5]。星状病毒为无囊膜的单股正链RNA病毒,基因组变异较大,全长约6.1~7.9 kb,包括5′UTR,3个开放性阅读框(ORF1a、ORF1b和ORF2),3′UTR及多聚腺苷酸(PolyA)尾,不同种星状病毒之间存在基因重组现象。星状病毒基因组的高度变异使其对环境和宿主具有很强的适应能力,甚至可跨种传播,是威胁人类健康和动物养殖业的重要传染病原之一。

关键词：痛风新型鹅星状病毒分离鉴定

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兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗临床免疫效力试验

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中国兽医杂志 2019年第7期55卷 30-33,I0003,I0004页

作者：范志宇王芳胡波魏后军薛家宾姜平南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了评估兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗在临床使用中的保护效力,试验选择3批次中试产品,分别在6家临床试验兔场对不同品种、不同日龄家兔进行免疫效力评价。结果显示,6家临床试验兔场试验期间均没有发生兔出血症;免疫持续期攻毒试... 详细信息

为了评估兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗在临床使用中的保护效力,试验选择3批次中试产品,分别在6家临床试验兔场对不同品种、不同日龄家兔进行免疫效力评价。结果显示,6家临床试验兔场试验期间均没有发生兔出血症;免疫持续期攻毒试验结果显示,疫苗对肉兔、獭兔、毛兔免疫期均可以达到7个月。结果表明,兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗(BAC-VP60株)临床效力检验合格,免疫期为7个月。

关键词：兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗效力检验免疫期

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乙型脑炎病毒感染猪睾丸细胞的miRNA表达谱差异分析

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南京农业大学学报 2019年第4期42卷 734-739页

作者：张元鹏杨占娜杨利李兰于晓明杜露平陈瑾侯立婷乔绪稳侯继波郑其升江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京市栖霞区动物卫生监督所江苏南京210046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 江苏省食品质量安全重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地江苏南京210014

[目的]本试验旨在分析乙型脑炎病毒(JEV)感染猪睾丸(ST)细胞和正常ST细胞miRNA差异表达谱,以探索miRNA在JEV感染过程中的作用及其调控机制。[方法]分别提取正常ST细胞和JEV感染8h后的ST细胞总RNA,利用高通量测序技术检测分析ST细胞中的m... 详细信息

[目的]本试验旨在分析乙型脑炎病毒(JEV)感染猪睾丸(ST)细胞和正常ST细胞miRNA差异表达谱,以探索miRNA在JEV感染过程中的作用及其调控机制。[方法]分别提取正常ST细胞和JEV感染8h后的ST细胞总RNA,利用高通量测序技术检测分析ST细胞中的miRNA表达谱并进行差异分析。使用miRanda软件对表达差异显著miRNA的靶基因进行预测并对靶基因进行GO分析。选取6个显著性差异表达的miRNA通过RT-qPCR进行验证。[结果]与正常ST细胞相比,JEV感染后的ST细胞有112个差异表达miRNA,其中80个miRNA上调表达,32个miRNA下调表达。经RT-qPCR方法验证6个差异表达的miRNA结果与高通量测序结果一致。差异表达miRNA靶基因的生物学功能相对集中在细胞代谢、细胞黏附等生物过程。[结论]检测和分析JEV感染后猪睾丸细胞的miRNA表达谱,获得了大量的与JEV感染相关的miRNA表达谱数据,为揭示JEV感染生殖系统致病机制提供了有效的数据和理论基础。

关键词：乙型脑炎病毒猪睾丸细胞 miRNA 高通量测序

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