检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2013年第1期33卷 1-3页

作者：温立斌何孔旺俞正玉茅爱华高晓静倪艳秀张雪寒郭容利李彬王小敏周俊明吕立新江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

选用3头自然感染仔猪和1头阴性对照猪,剖杀后采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰脏、脑、空肠、扁桃体、胸腺、淋巴结、膀胱、性腺等组织,用荧光定量PCR方法检测病毒在组织中的分布及病毒载量。结果显示,类猪圆环病毒因子P1分布在仔... 详细信息

选用3头自然感染仔猪和1头阴性对照猪,剖杀后采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰脏、脑、空肠、扁桃体、胸腺、淋巴结、膀胱、性腺等组织,用荧光定量PCR方法检测病毒在组织中的分布及病毒载量。结果显示,类猪圆环病毒因子P1分布在仔猪的心脏、肝脏、肺脏、胰脏、脑和膀胱等组织,病毒载量以胰脏、脑和膀胱为最高,可达105拷贝/g以上;对照猪脏器中没有检测到病毒核酸。该研究为P1的诊断及致病机制奠定了基础。

关键词：类猪圆环病毒因子P1 组织分布病毒载量

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猪IgA双抗夹心ELISA检测方法的建立及应用

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江苏农业学报 2013年第2期29卷 453-454页

作者：张亚冯志新姚景霆华利忠甘源刘占军韦艳娜邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学江苏南京210095 山西农业大学山西太谷030801

随着人们对黏膜免疫认识程度的加深，黏膜免疫系统的研究不仅为传统的免疫学增加新内容，也为很多疾病的致病机理、病原与宿主的关系、疾病诊治及新型疫苗与预防制剂等的研究提供了思路与方法。黏膜免疫和黏膜一起构成了机体防御外来病... 详细信息

随着人们对黏膜免疫认识程度的加深，黏膜免疫系统的研究不仅为传统的免疫学增加新内容，也为很多疾病的致病机理、病原与宿主的关系、疾病诊治及新型疫苗与预防制剂等的研究提供了思路与方法。黏膜免疫和黏膜一起构成了机体防御外来病原入侵的第一道屏障。

关键词：猪IgA 夹心ELISA 黏膜抗体

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猪输血传播病毒2型ORF1基因的原核表达及条件优化

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华北农学报 2013年第5期28卷 38-43页

作者：王小敏何孔旺张文文王东田周忠涛张雪寒周俊明汪伟倪艳秀温立斌江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 山东省蓬莱市村里集镇畜牧兽医工作站山东蓬莱265604

为了克隆猪输血传播病毒2型(TTV2)ORF1基因,构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达猪TTV2 ORF1蛋白,并对其表达条件进行优化。利用普通PCR从猪TTV2阳性样本中扩增出TTV2 ORF1基因,利用分子克隆的方法将猪TTV2 ORF1基因克隆到... 详细信息

为了克隆猪输血传播病毒2型(TTV2)ORF1基因,构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达猪TTV2 ORF1蛋白,并对其表达条件进行优化。利用普通PCR从猪TTV2阳性样本中扩增出TTV2 ORF1基因,利用分子克隆的方法将猪TTV2 ORF1基因克隆到原核表达载体pcoldI上,构建表达载体pcold-ORF1,在大肠杆菌中诱导表达带有6个组氨酸标签的ORF1融合蛋白。并对影响重组蛋白表达的3个因素,即诱导时间、诱导温度和IPTG浓度进行优化,确定了pcold-ORF1重组蛋白表达的最佳表达条件。SDS-PAGE分析结果表明,重组蛋白在BL21中高效表达,以包涵体形式表达为主,分子质量约为39 kDa。蛋白表达量随诱导时间增加而有所增加,在15℃时表达量最高,而IPTG浓度对蛋白的表达量没有显著影响。Western Blotting结果表明,重组蛋白与猪TTV2阳性血清特异性反应,具有很好的免疫原性。成功获得TTV2-ORF1基因,构建了原核表达载体并获得高效表达,为TTV的ELISA检测方法的建立提供抗原。且重组蛋白在15℃条件下,加入0.2 mmol/L浓度的IPTG,诱导24 h,表达条件最佳。

关键词：猪输血传播病毒2型基因克隆原核表达

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白头翁汤对内毒素诱导血管内皮细胞基因表达谱的影响

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畜牧兽医学报 2013年第10期44卷 1675-1684页

作者：胡屹屹穆祥胡元亮江苏省农业科学院兽医研究所.农业部兽用生物制品工程技术重点实验室.国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 北京农学院兽医学中医药北京市重点实验室北京102206 南京农业大学动物医学院南京210095

拟探讨中药白头翁汤方剂(PD)对细菌内毒素(LPS)损伤的治疗作用。将内皮细胞培养至单层融合状态,加入LPS和白头翁汤作用12h后,提取3个处理组的总RNA。采用Affymetrix Rat Genome 230 2.0Array芯片检测,读取各组基因表达的变化情况并进行... 详细信息

拟探讨中药白头翁汤方剂(PD)对细菌内毒素(LPS)损伤的治疗作用。将内皮细胞培养至单层融合状态,加入LPS和白头翁汤作用12h后,提取3个处理组的总RNA。采用Affymetrix Rat Genome 230 2.0Array芯片检测,读取各组基因表达的变化情况并进行生物学分析。选取5个与炎症反应相关的差异表达基因,采用嵌合荧光法进行Real-time RT-PCR反应。结果显示:与空白组相比,LPS组产生69个差异表达基因,其中上调基因36个,下调基因33个;与LPS组相比,LPS-PD组产生578个差异表达基因,其中上调基因566个,下调基因12个;与空白组相比,LPS-PD组产生122个差异表达基因,其中上调基因93个,下调基因29个。5个目标基因Il1α、Il6、Edn1、Tnfsf11和Ptges的Real-time RT-PCR检测结果依次为9.78、1.76、1.43、2.98和2.12,对应的基因芯片检测结果分别是10.57、1.53、1.59、3.16和1.71,两者变化趋势相符。白头翁汤抗内毒素的药理机制可能在于减少炎症因子的蛋白表达,抑制凋亡基因的启动,阻碍内毒素信号传导与受体激活,增加机体能量代谢和蛋白质合成。

关键词：白头翁汤内毒素基因芯片炎症

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嵌合O型口蹄疫病毒多表位基因猪细小病毒VLPs载体疫苗的构建

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江苏农业学报 2013年第1期29卷 101-107页

作者：潘群兴诸玉梅王永山何孔旺王晓丽欧阳伟毕振威夏兴霞江苏省农业科学院兽医研究所、农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室、国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

综合运用生物信息学和分子生物学技术,模拟PPV VP2蛋白表面不同Loop区插入O型FMDV VP1蛋白上多表位基因(VP1:21～40、141～160和200～213残基)空间构象,并在VP2 N端引入通用型辅助性T淋巴细胞表位(PADRE),人工合成嵌合基因并克隆到杆状... 详细信息

综合运用生物信息学和分子生物学技术,模拟PPV VP2蛋白表面不同Loop区插入O型FMDV VP1蛋白上多表位基因(VP1:21～40、141～160和200～213残基)空间构象,并在VP2 N端引入通用型辅助性T淋巴细胞表位(PADRE),人工合成嵌合基因并克隆到杆状病毒转移载体pFastBac HTA中,转化*** DH10Bac感受态细胞,经三抗筛选,获得重组杆状病毒表达质粒rBac-FMDV VP1∶PPV VP2,用脂质体法转染Sf9细胞。对rBac-FMDVVP1∶PPV VP2感染的Sf9细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)检测,具有特异性荧光;用Western-blotting分析,在64 000处出现一条特异蛋白条带;电镜观察,重组VP2蛋白能够自主组装成病毒样颗粒。红细胞凝集试验证实,表达的嵌合蛋白PPV∶VP2-FMDV∶VP1具有与全病毒类似的血凝活性。

关键词：猪细小病毒 O型口蹄疫病毒病毒样颗粒分子设计

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畜产品质量安全的风险管理与风险预警

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江苏农业学报 2013年第5期29卷 1172-1177页

作者：陆昌华胡肄农谭业平江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

针对畜产品安全涉及到的多方面、多环节和多层次问题,分析畜产品质量安全管理现状,确定影响畜产品安全的主要因素,指出动物疫病风险预警是公共卫生应急及城市预警应急系统的重要组成部分。提出如何构建畜产品质量安全风险预警框架、形... 详细信息

针对畜产品安全涉及到的多方面、多环节和多层次问题,分析畜产品质量安全管理现状,确定影响畜产品安全的主要因素,指出动物疫病风险预警是公共卫生应急及城市预警应急系统的重要组成部分。提出如何构建畜产品质量安全风险预警框架、形成风险评估及预警决策模型方法。提出采用基于地理信息系统(Geographic information system,GIS)的数字化监控系统,将流行病学数据库、地理图形、非空间应用模型和空间应用模型有机地结合,实现图形和数据资源共享。系统可及时跟踪疾病的蔓延,通过动物疫病流行病学图形分析,可提出适宜的防治措施,达到重大动物疫病预警预报目的。并对解决畜产品质量安全问题提出了建议与对策。

关键词：畜产品质量安全动物疫病风险管理风险预警

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猪圆环病毒2型2010 AHCY 株的分离鉴定及遗传变异分析

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华北农学报 2013年第6期28卷 77-81页

作者：王小敏何孔旺王东田周忠涛茅爱华俞正玉汪伟倪艳秀温立斌张雪寒郭容利李彬江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 山东省蓬莱市村里集镇畜牧兽医工作站山东蓬莱265604

旨为分离得到1株猪圆环病毒2型毒株,对其生物学特性进行鉴定,测定其TCID50,并进行全基因组比对分析。利用细胞传代的方法对PCR检测为PCV1阴性、PCV2阳性的病料进行病毒分离,分离毒株接种PK15细胞,通过PCR检测和间接免疫荧光进行鉴定。... 详细信息

旨为分离得到1株猪圆环病毒2型毒株,对其生物学特性进行鉴定,测定其TCID50,并进行全基因组比对分析。利用细胞传代的方法对PCR检测为PCV1阴性、PCV2阳性的病料进行病毒分离,分离毒株接种PK15细胞,通过PCR检测和间接免疫荧光进行鉴定。并对分离株的TCID50和全基因组序列进行了测定与分析。成功分离得到猪圆环病毒2型,命名为2010AHCY株,其基因组全长为1 767 bp,在PK15细胞上的TCID50为104.23。全基因组序列分析表明,该分离株与其他参考毒株核苷酸同源性为93.2%～99.9%,与HM038030 PCV2d的同源性最高,为99.9%。系统进化树分析表明,分离株2010AHCY属于PCV2d基因型,与PCV2b基因型亲缘关系较近。为分析华东地区PCV2分子流行病学、遗传变异和PMWS的防治奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒2型分离鉴定遗传变异

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鸡传染性支气管炎病毒RT-LAMP 检测方法的建立

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江苏农业学报 2013年第4期29卷 818-821页

作者：刘宇卓韩凯凯李银黄欣梅赵冬敏江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了建立一种适用于鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)快速检测方法,本试验根据IBV衣壳蛋白M基因保守区域设计了一套特异性引物,并对反应条件进行优化。结果显示,建立了IBV的RT-LAMP检测方法,该方法既可通过将... 详细信息

为了建立一种适用于鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)快速检测方法,本试验根据IBV衣壳蛋白M基因保守区域设计了一套特异性引物,并对反应条件进行优化。结果显示,建立了IBV的RT-LAMP检测方法,该方法既可通过将反应产物进行凝胶电流观察结果,也可直接通过向反应产物中加入荧光染料对结果进行可视化观察。该方法具特异性,对鸡新城疫病毒(NDV)、H9亚型禽流感病毒(AIV H9)、坦布苏病毒(TMUV)及正常鸡胚尿囊液均无扩增反应。该方法对IBV的最小检测量为12 fg。表明本研究建立的方法简便而快速,灵敏而特异,适合于兽医临床对IBV的快速检测及流行病学调查。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒环介导等温扩增技术检测方法

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新城疫病毒毒力分子机制研究进展

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江苏农业学报 2013年第2期29卷 435-439页

作者：于洋封振何孔旺仇旭升丁铲江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 中国农业科学院上海兽医研究所国家家禽工程技术研究中心上海200241 江苏出入境检验检疫局动植食中心江苏南京210001

新城疫是由新城疫病毒引起的一种能够感染多种鸟类的烈性传染病,尤其对鸡、鹅等常见家禽具有高度的传染性和致死性。NDV属于副黏病毒科副黏病毒亚科禽腮腺炎病毒属,为囊膜包裹的、不分节段的、单股负链RNA病毒。NDV只有一个血清型,根据... 详细信息

新城疫是由新城疫病毒引起的一种能够感染多种鸟类的烈性传染病,尤其对鸡、鹅等常见家禽具有高度的传染性和致死性。NDV属于副黏病毒科副黏病毒亚科禽腮腺炎病毒属,为囊膜包裹的、不分节段的、单股负链RNA病毒。NDV只有一个血清型,根据其长度分为Class I和ClassⅡ2大系谱。NDV基因组含有6个开放式阅读框,分别编码核衣壳蛋白、磷蛋白、基质蛋白、融合蛋白、血凝素-神经氨酸蛋白和大蛋白。此外,在P基因转录过程中,NDV通过RNA编辑机制编码额外的2种非结构蛋白质,即V和W。鉴于新城疫病毒的广泛传播性和高度的致死性,本文着重从NDV毒力的评价指标、NDV的侵入机制与毒力、NDV的复制与毒力、NDV免疫逃避机制与毒力、NDV非编码区基序与毒力5个方面来阐述,以期为深入研究不同毒株间的致病性差异以及进一步防控新城疫病毒奠定基础。

关键词：新城疫病毒毒力侵入复制免疫逃避非编码区

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猪鼻拭子与支气管肺泡灌洗液用于呼吸道分泌性抗体检测

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江苏农业学报 2013年第1期29卷 219-221页

作者：冯志新张亚华利忠甘源刘茂军王海燕韦艳娜白昀王占伟邵国青江苏省农业科学院兽医研究所、农业部兽用生物制品工程技术重点实验室、国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 南京天邦生物科技有限公司江苏南京211102

黏膜免疫是机体抵抗细菌或病毒感染的第一道防线[1]。因此，检测黏膜免疫反应对评估黏膜接种方案和病原与宿主之间的相互关系具有重要的意义[2]。目前，支气管。肺泡灌洗液样本（BALF）在下呼吸道样本的采集中占有重要的地位，也是目前... 详细信息

黏膜免疫是机体抵抗细菌或病毒感染的第一道防线[1]。因此，检测黏膜免疫反应对评估黏膜接种方案和病原与宿主之间的相互关系具有重要的意义[2]。目前，支气管。肺泡灌洗液样本（BALF）在下呼吸道样本的采集中占有重要的地位，也是目前评价呼吸道黏膜免疫的常用样本。

关键词：鼻拭子支气管肺泡灌洗液抗体检测

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