检索结果-内蒙古大学图书馆

江苏农业学报 2010年第1期26卷 120-125页

作者：熊富强王芳恽时锋林焱范志宇胡波赵宁江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病免疫与诊断重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京军区南京总医院比较医学科江苏南京210002 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为建立特异性好、敏感性高、稳定可靠的兔支气管败血波氏杆菌(Bb)双夹心ELISA检测方法,制备了兔抗Bb免疫血清和小鼠抗Bb腹水单抗(Bb McAb),并将它们提纯。用方阵法筛选最佳反应浓度,用特异性试验、敏感性试验和重复性试验对该方法进行鉴... 详细信息

为建立特异性好、敏感性高、稳定可靠的兔支气管败血波氏杆菌(Bb)双夹心ELISA检测方法,制备了兔抗Bb免疫血清和小鼠抗Bb腹水单抗(Bb McAb),并将它们提纯。用方阵法筛选最佳反应浓度,用特异性试验、敏感性试验和重复性试验对该方法进行鉴定,并与PCR检测方法比较。结果表明,兔抗Bb IgG的最佳稀释度为1∶6 400,浓度为2.5 mg/L;单抗的最佳稀释度为1∶800,浓度为5.0 mg/L。特异性试验和重复性试验结果表明,该方法特异性强、重复性好,与兔常见病菌大肠埃希氏菌、多杀性巴氏杆菌和产气荚膜梭菌均不发生反应,同时与PCR检测方法的符合率为100%。

关键词：支气管败血波氏杆菌免疫血清单克隆抗体双夹心ELISA

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应用高分辨熔点曲线分析区分类猪圆环病毒因子P1和猪圆环病毒2型

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江苏农业学报 2010年第2期26卷 315-319页

作者：温立斌何孔旺杨汉春郭容利钟书霖周俊明李成仁陈梦海江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 中国农业大学动物医学院北京100094 扬州大学生物科学与技术学院江苏扬州225009

为评价高分辨熔点曲线分析在快速鉴别类猪圆环病毒因子P1和猪圆环病毒2型中的应用。在Cor-bett Rotor-Gene 6000定量PCR仪上,利用EvaGreen荧光染料对靶核苷酸序列进行扩增,建立HRM分析P1和PCV2的工作流程。在优化各种条件基础上,利用HR... 详细信息

为评价高分辨熔点曲线分析在快速鉴别类猪圆环病毒因子P1和猪圆环病毒2型中的应用。在Cor-bett Rotor-Gene 6000定量PCR仪上,利用EvaGreen荧光染料对靶核苷酸序列进行扩增,建立HRM分析P1和PCV2的工作流程。在优化各种条件基础上,利用HRM分析可区分相差1个碱基的靶序列。因此,HRM分析可为P1和PCV2的分子诊断提供一种新的技术手段。

关键词：高分辨熔点曲线类猪圆环病毒因子P1 猪圆环病毒2型鉴别

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检测兔出血症病毒抗体间接ELISA方法的建立

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江苏农业学报 2010年第3期26卷 546-550页

作者：李超美王芳蔡少平任雪枫胡波范志宇徐为中何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病免疫与诊断重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京出入境检验检疫局江苏南京210001 江苏省动物疫病预防控制中心江苏南京210036

为建立检测兔出血症病毒(RHDV)抗体的间接ELISA方法,应用杆状病毒表达系统表达的RHDV VP60包被酶标板,经间接ELISA的最佳反应条件优化试验确定:抗原的包被浓度为4.62μg/ml,标准阴、阳性血清稀释度为1∶200,封闭液选用2%明胶;羊抗兔IgG... 详细信息

为建立检测兔出血症病毒(RHDV)抗体的间接ELISA方法,应用杆状病毒表达系统表达的RHDV VP60包被酶标板,经间接ELISA的最佳反应条件优化试验确定:抗原的包被浓度为4.62μg/ml,标准阴、阳性血清稀释度为1∶200,封闭液选用2%明胶;羊抗兔IgG最佳稀释度为1∶4 000。阻断试验、特异性试验、敏感性试验、重复性试验结果显示,该方法具有较高的特异性、敏感性和重复性。用建立的ELISA方法与血凝抑制试验对临床血清样品进行检测,结果显示,ELISA与HI检测兔血清的RHDV抗体阳性率分别为84.7%(955/1 127)和76.0%(857/1 127),符合率为91.3%。该方法的建立为检测RHDV抗体提供了一种安全、特异、敏感、快速、操作简便经济的检测方法,为兔出血症免疫监测和预防控制提供了科学的技术手段。

关键词：兔出血症病毒 VP60 间接ELISA

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8株芽孢杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

8株芽孢杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：王晓丽朱小翠王永山诸玉梅刘小娟周宇王冉江苏省农业科学院兽医研究所·农业部动物疫病免疫与诊断重点开放实验室江苏南京 210014 江苏省农业科学院兽医研究所·农业部动物疫病免疫与诊断重点开放实验室江苏南京 210014 南京农业大学动物医学院江苏南京 210095 江苏省农业科学院食品质量安全检测研究所江苏南京 210014

从土壤和健康猪体内分离到8株芽孢杆菌，结合细菌形态学、生理生化特性和16s rRNA序列同源性分析进行鉴定，并对其生物学特性进行了研究。结果表明KF、KH、K2X、KY1菌株为枯草芽孢杆菌，LB1、LB2、LY3菌株为蜡样芽孢杆菌，DY菌株为地衣... 详细信息

从土壤和健康猪体内分离到8株芽孢杆菌，结合细菌形态学、生理生化特性和16s rRNA序列同源性分析进行鉴定，并对其生物学特性进行了研究。结果表明KF、KH、K2X、KY1菌株为枯草芽孢杆菌，LB1、LB2、LY3菌株为蜡样芽孢杆菌，DY菌株为地衣芽孢杆菌。除K2X菌株对温度处理较敏感，其余7菌株45℃～60℃处理30min，对其生长繁殖无影响;DY菌株的耐酸性强，具有较强的胃液耐受力;其次是KY1菌株，并且对胆盐、肠液的耐受力也较强。对共培养的沙门氏菌的抑制率，KF、KH、LB2菌株分别为28.6％、27％、24.6％，其它菌株效果不明显;8菌株对共培养的大肠杆菌O157都没有抑制效果.

关键词：芽孢杆菌分离鉴定生物学特性

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鸭瘟病毒PCR检测方法的建立

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浙江农业学报 2010年第6期22卷 750-753页

作者：魏雪涛张晓勇李银刘宇卓张敬峰聂文军江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 浙江省嘉兴市出入境检验检疫局浙江嘉兴314001 南京市浦口区兽医站江苏南京211800

根据GenBank发表的鸭瘟病毒(DPV)的基因序列,设计了针对DPV UL6 UL7保守区1对特异性引物。通过对反应条件的优化,建立了鸭瘟病毒快速鉴别诊断的PCR方法,扩增片段大小为1 293 bp。试验结果表明PCR法具有很强的特异性,且敏感性较高,最低DN... 详细信息

根据GenBank发表的鸭瘟病毒(DPV)的基因序列,设计了针对DPV UL6 UL7保守区1对特异性引物。通过对反应条件的优化,建立了鸭瘟病毒快速鉴别诊断的PCR方法,扩增片段大小为1 293 bp。试验结果表明PCR法具有很强的特异性,且敏感性较高,最低DNA模板检出量为15 pg/mL。对鸭瘟的临床病料检测证明,该方法具有特异、快速和敏感的特点,可有效鉴别DPV。

关键词：鸭瘟病毒 PCR 检测

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大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制

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中国动物传染病学报 2010年第4期18卷 47-53页

作者：夏兴霞王永山孟祥升朱国强张雪寒何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 扬州大学兽医学院扬州225009

用***157∶H7菌体免疫BALB/c鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了16株分泌单克隆抗体（mAb）的杂交瘤细胞株。其中,1D3、2E7和2H7三株为O157∶H7特异单克隆抗体,Ig亚类分别为IgMκ、IgG2bκ和IgG2bκ,腹水抗体ELISA效价分别... 详细信息

用***157∶H7菌体免疫BALB/c鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了16株分泌单克隆抗体（mAb）的杂交瘤细胞株。其中,1D3、2E7和2H7三株为O157∶H7特异单克隆抗体,Ig亚类分别为IgMκ、IgG2bκ和IgG2bκ,腹水抗体ELISA效价分别为103、105和106。用纯化的单克隆抗体2E7标记胶体金,制备金标抗体玻璃纤维素膜;将纯化的2H7和羊抗鼠IgG分别作为检测和对照捕捉抗体包被于硝酸纤维素膜（NC）上;组装成双抗夹心法O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条。用该试纸条可特异检测O157∶H7,敏感度为106CFU/mL,与相同单克隆抗体2H7和2E7建立的O157∶H7夹心ELISA检测方法的敏感度相当,试纸条简便快速,在1~5 min内可得出检测结果,便于O157∶H7的临床快速诊断与现场检测样品的快速筛查。

关键词：大肠杆菌O157∶H7 单克隆抗体胶体金免疫层析试纸条人兽共患病

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5株乳酸菌的分离鉴定及生物学特性研究

5株乳酸菌的分离鉴定及生物学特性研究

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会

作者：王晓丽王永山诸玉梅朱小翠刘小娟周宇王冉江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病免疫与诊断重点开放实验室南京农业大学动物医学院江苏省农业科学院食品质量安全检测研究所

从泡菜和仔猪粪便中分离出5株乳酸菌,分别命名为RS、RB、RFT、RST、RO,结合细菌形态学、生理生化特性和16S rRNA序列同源性分析进行鉴定,并对其特性进行了研究。结果表明RS菌株为植物乳杆菌,RB、RO菌株为粪肠球菌,RFT、RST为屎肠球菌。... 详细信息

从泡菜和仔猪粪便中分离出5株乳酸菌,分别命名为RS、RB、RFT、RST、RO,结合细菌形态学、生理生化特性和16S rRNA序列同源性分析进行鉴定,并对其特性进行了研究。结果表明RS菌株为植物乳杆菌,RB、RO菌株为粪肠球菌,RFT、RST为屎肠球菌。其中RS菌株具有较好的耐酸性、一定的胆盐耐受力,对温度敏感;RB、RFT、RST、RO菌株对模拟肠液具有较强的耐受力,45℃～55℃处理30min不影响其生长;5菌株对大肠杆菌O157和沙门氏菌的抑菌率均达到98～100%,可作为优良的益生菌候选菌。

关键词：乳酸菌分离鉴定生物学特性

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重组口蹄疫病毒T细胞表位基因的猪细小病毒VP2蛋白病毒样颗粒的构建

重组口蹄疫病毒T细胞表位基因的猪细小病毒VP2蛋白病毒样颗粒的构...

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会

作者：潘群兴王永山何孔旺欧阳伟王晓丽诸玉梅夏兴霞江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1上T细胞表位肽(第21～40残基)基因嵌合在PPV VP2的N端,克隆到杆状病毒供体质粒pFastBac HTA中,构建成重组转座载体pFastBac-FMDV VP1:PPV VP2,转化含有穿梭载体Bacmid的***10Bac中,发生转座作用,经蓝白斑筛选... 详细信息

将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1上T细胞表位肽(第21～40残基)基因嵌合在PPV VP2的N端,克隆到杆状病毒供体质粒pFastBac HTA中,构建成重组转座载体pFastBac-FMDV VP1:PPV VP2,转化含有穿梭载体Bacmid的***10Bac中,发生转座作用,经蓝白斑筛选获得重组杆状病毒表达质粒rBac-FMDV VP1:PPVVP2,转染昆虫草地夜蛾(Sf9)细胞,并在Sf9中进行了表达。用间接免疫荧光试验(IFA)、Westem-blot分析,表达产物具有与PPV VP2天然蛋白相似的生物活性。电镜观察,表达的蛋白能够自我组装成病毒样粒子[PPV:VLP(FMDV)]。

关键词： Porcine Parvovirus Food-and-mouth disease virus type 0 Virus-like particles

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鸭、鸡禽流感灭活疫苗(H9亚型,NJ01株)对流行毒株免疫攻毒保护试验的研究

鸭、鸡禽流感灭活疫苗(H9亚型,NJ01株)对流行毒株免疫攻毒保护试...

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会

作者：刘宇卓李银魏雪涛张敬峰江苏省农业科学院兽医研究所·农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心

近年来,禽流感H9亚型不同毒株的毒力发生了一定的变化,出现了不同毒株交叉保护率降低现象,导致低致病力毒株呈现广泛流行。为了考查本研究室研制的鸭、鸡禽流感灭活疫苗(H9亚型,NJ01株)对当前流行毒株的免疫攻毒保护情况,进行了本次试验... 详细信息

近年来,禽流感H9亚型不同毒株的毒力发生了一定的变化,出现了不同毒株交叉保护率降低现象,导致低致病力毒株呈现广泛流行。为了考查本研究室研制的鸭、鸡禽流感灭活疫苗(H9亚型,NJ01株)对当前流行毒株的免疫攻毒保护情况,进行了本次试验,现将试验结果报告如下:

关键词：攻毒保护禽流感灭活疫苗流行毒株

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出血性大肠杆菌O157:H7的2b-tir-1b多价融合蛋白表达及免疫原性研究

出血性大肠杆菌O157:H7的2b-tir-1b多价融合蛋白表达及免疫原性研...

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会

作者：张雪寒何孔旺卢维彩赵攀登温立斌李彬郭容利王小敏倪艳秀周俊明俞正玉茅爱华吕立新江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

为了更好防治由出血性大肠杆菌O157:H7引起的疾病,尝试研制基因工程疫苗,其中亚单位疫苗时具有很大优势。构建表达tir和stxb的融合基因,将tir基因中间295个氨基酸残基(Tir295)与stxB亚基基因72个氨基酸串联构建pGEX-stx2b-Tir295-stx1b... 详细信息

为了更好防治由出血性大肠杆菌O157:H7引起的疾病,尝试研制基因工程疫苗,其中亚单位疫苗时具有很大优势。构建表达tir和stxb的融合基因,将tir基因中间295个氨基酸残基(Tir295)与stxB亚基基因72个氨基酸串联构建pGEX-stx2b-Tir295-stx1b重组质粒,将其转化于BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳检测,该融合蛋白获得了高效表达,目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的30%左右。重组蛋白纯化后皮下途径免疫小鼠,能够诱导高滴度(105)的IgG,鼻腔内途径免疫小鼠不仅能够诱导高滴度(104)的IgG,还能诱导高达102的IgA。二免后攻击50LD50的EHEC O157:H7,相对于对照组,免疫组粪便中排菌量明显降低、排菌时间明显缩短。实验结果表明:该融合蛋白免疫原性良好,并且由Tir、stx1b和stx2b三部分抗原组成,可刺激机体产生针对转位紧密素受体(Tir)和志贺毒素(stx)的抗体,在EHEC O157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值。

关键词： EHEC O157:H7 转位紧密素受体志贺毒素融合基因免疫原性

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