检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业科学 2005年第6期38卷 1264-1269页

作者：李明何孔旺陆承平南京农业大学/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏省农业科学院兽医研究所/农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室南京农业大学/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室南京210014 南京210014 南京210095

根据猪链球菌2型(Streptococcussuistype2,SS2)溶菌酶释放蛋白(muramidase-releasedprotein,MRP)和胞外蛋白因子(extracellularproteinfactor,EPF)的基因序列,各设计合成一对引物,以猪链球菌2型江苏分离株SS2-1的基因组为模板,扩增mrp基因1801~2513位序列和epf基因1783~2563位序列,分别构建原核表达载体pET32a-mrp、pET32a-epf,确定诱导表达的两种蛋白都具有免疫原性后,提取阳性克隆质粒各自进行双酶切并纯化,通过PCR串联两片段,将目的片段定向克隆到表达载体pET-32a中,重组质粒转化入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达分子量约为74kD的融合蛋白。用制备的两种抗血清与纯化融合蛋白进行免疫转印,结果显示融合蛋白分别具有MRP与EPF的中和表位。用融合蛋白MRP-EPF免疫新西兰兔,以最小致死量猪链球菌强毒株SS2-1攻击,兔的存活率达50%(2/4),存活率明显高于单个表达产物。证实串联表达的融合蛋白为重要的保护性抗原。

关键词：猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白胞外蛋白因子融合表达中和表位

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兔口腔鳞状细胞癌的临床诊断

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中国兽医杂志 2021年第5期57卷 106-107,I0012页

作者：范志宇陈萌萌仇汝龙胡波魏后军宋艳华朱伟峰徐为中薛家宾王芳江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210014

2018年,安徽某兔场不间断发现死亡毛兔口腔中有增生物、个体消瘦、颜面变形等情况。本试验对临床患病兔进行剖检,通过病理组织石蜡切片方法,对兔口腔增生物进行病理学检查,并进行了乳头瘤病毒的检测。综合剖检、病理切片和病原检测结果... 详细信息

2018年,安徽某兔场不间断发现死亡毛兔口腔中有增生物、个体消瘦、颜面变形等情况。本试验对临床患病兔进行剖检,通过病理组织石蜡切片方法,对兔口腔增生物进行病理学检查,并进行了乳头瘤病毒的检测。综合剖检、病理切片和病原检测结果,最终诊断病兔患口腔鳞状细胞癌。本试验首次报道了家兔口腔鳞状细胞癌,为相关疾病的诊断和研究提供了科学依据。

关键词：病理学检查病原检测临床诊断毛兔兔场乳头瘤病毒口腔鳞状细胞癌病理切片

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肠出血性大肠杆菌O157:H7Tir基因的克隆、表达及生物学活性研究

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中国农业科学 2010年第12期43卷 2570-2577页

作者：张雪寒何孔旺茅爱华周俊明俞正玉温立斌倪艳秀郭容利吕立新江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心

【目的】克隆、表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7转位紧密素受体(Tir)基因,并研究其抗原性。【方法】选用pET28原核表达载体,体外构建Tir原核表达重组菌,并在大肠杆菌中获得高效表达。选用家兔制备高滴度多克隆抗体,Western blot分析... 详细信息

【目的】克隆、表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7转位紧密素受体(Tir)基因,并研究其抗原性。【方法】选用pET28原核表达载体,体外构建Tir原核表达重组菌,并在大肠杆菌中获得高效表达。选用家兔制备高滴度多克隆抗体,Western blot分析其免疫原性。选用HEp-2细胞进行粘附和粘附抑制试验,通过光镜、电镜和荧光显微镜进行观察。选用Balb/c小鼠进行免疫试验。【结果】成功获得高效表达重组Tir蛋白,并制备了兔源Tir多克隆抗体,Western blot分析此抗体能与Tir发生特异性抗原抗体反应。表达Tir蛋白能够抑制O157:H7对HEp-2细胞的粘附和A/E损伤。二免后Balb/c小鼠保护率高达75%以上。【结论】在大肠杆菌中成功克隆表达了Tir基因,所获重组Tir蛋白具有良好的抗原性,可能用于肠出血性大肠杆菌O157基因工程疫苗的研究。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7 转位紧密素受体表达粘附 A/E损伤免疫保护

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检测兔出血症病毒抗体胶体金试纸条的研制及初步应用

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畜牧兽医学报 2018年第3期49卷 614-619页

作者：魏后军范志宇王芳宋艳华胡波仇汝龙陈萌萌徐为中薛家宾江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

利用免疫层析技术建立快速检测兔出血症病毒(RHDV)抗体的方法,将胶体金标记重组RHDV VP60蛋白,抗VP60单抗A3C和金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)分别包被质控线(C线)和检测线(T线),通过检测强阳性、阳性、弱阳性、阴性血清优化试纸条制备条件,... 详细信息

利用免疫层析技术建立快速检测兔出血症病毒(RHDV)抗体的方法,将胶体金标记重组RHDV VP60蛋白,抗VP60单抗A3C和金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)分别包被质控线(C线)和检测线(T线),通过检测强阳性、阳性、弱阳性、阴性血清优化试纸条制备条件,并验证其性能及与血凝抑制试验的符合率。结果显示,试纸条检测阳性血清时T线、C线颜色深度相同,强阳性血清T线比C线颜色深,弱阳性血清T线比C线颜色浅,阴性血清T线不显色、C线显色,检测强阳性、阳性、弱阳性、阴性血清与血凝抑制试验的符合率分别为93.75%、88.75%、91.25%、95.00%,总的符合率为91.54%;该试纸条具有较好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,为兔病毒性出血症流行病学调查和抗体水平监测提供了有力的检测工具。

关键词：兔病毒性出血症兔出血症病毒 VP60 胶体金试纸条抗体

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猪链球菌2型次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)重组蛋白的酶活性和免疫原性检测

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农业生物技术学报 2009年第6期17卷 943-947页

作者：张雪寒何孔旺周俊明倪艳秀俞正玉吕立新江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

通过PCR方法从猪链球菌2型(Streptococcus suis)05ZYH33分离株基因组中扩增出次黄嘌呤核苷酸脱氢酶基因(in-osine5-monophosphate dehydrogenase,impdh),长度1064bp。PCR产物和pET28a载体分别经过EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,连接,成功地构建了重组表达质粒pET28a-impdh,并转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中,经过1mmol/LIPTG诱导获得表达,蛋白大小35kD。表达蛋白具有良好的抗原性和酶活性。蛋白经过亲和层析纯化后,在37℃,pH7.0~9.0表现出较强酶活性,NADHA340介于0.662~0.816之间。

关键词：猪链球菌次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH) 克隆酶活性

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兔源抗凋亡蛋白Bcl-2的表达、抗体的制备及初步应用

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江苏农业学报 2019年第6期35卷 1397-1401页

作者：陈萌萌潘渊婷范志宇胡波宋艳华魏后军仇汝龙朱伟峰徐为中王芳江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心

为了原核表达兔源抗凋亡蛋白Bcl-2,并诱导表达纯化该蛋白后制备多抗,采用RT-PCR扩增Bcl-2编码序列,并将该序列克隆至pET-32a(+)载体,获得重组pET-32a-Bcl-2质粒转化BL21(DE3),筛选最佳表达条件,通过亲和层析纯化目的蛋白质,最后经Wester... 详细信息

为了原核表达兔源抗凋亡蛋白Bcl-2,并诱导表达纯化该蛋白后制备多抗,采用RT-PCR扩增Bcl-2编码序列,并将该序列克隆至pET-32a(+)载体,获得重组pET-32a-Bcl-2质粒转化BL21(DE3),筛选最佳表达条件,通过亲和层析纯化目的蛋白质,最后经Western blot鉴定后免疫小鼠。结果显示,成功扩增Bcl-2编码序列并构建了pET-32a-Bcl-2表达载体;SDS-PAGE结果显示,在16℃,5 h,0.5 mmol/L IPTG的表达条件下,重组蛋白Bcl-2能够高效可溶性表达;Western blot结果表明纯化后的表达产物为高纯度的Bcl-2重组蛋白,将该蛋白质免疫小鼠后获得了特异性抗体,该抗体能够特异性识别重组Bcl-2蛋白,并应用该抗体鉴定RK13-B细胞中Bcl-2蛋白的过表达。

关键词：兔源抗凋亡蛋白Bcl-2 原核表达亲和层析多抗制备

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4株猪链球菌2型分离株主要毒力因子(MRP、EF)的全基因序列分析

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江苏农业学报 2007年第3期23卷 204-207页

作者：倪艳秀段志涛何孔旺陆承平江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏南京210014 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

猪链球菌2型（SS2）是一种重要的人兽共患病病原菌，溶菌酶释放蛋白（MRP）和胞外因子（EF）是其重要的2种毒力因子。参照GenBank上已发表的MRP和EF基因序列，设计引物，对4株国内SS2分离株进行MRP和EF全基因序列测定并进行分析。结果... 详细信息

猪链球菌2型（SS2）是一种重要的人兽共患病病原菌，溶菌酶释放蛋白（MRP）和胞外因子（EF）是其重要的2种毒力因子。参照GenBank上已发表的MRP和EF基因序列，设计引物，对4株国内SS2分离株进行MRP和EF全基因序列测定并进行分析。结果表明：4株SS2国内分离株MRP基因的完整开放阅读框（ORF）都为3771bp、编码1256个氨基酸，EF基因的完整ORF都为2532bp，编码843个氨基酸；与国外参考株D282之间的MRP核苷酸和蛋白质的同源性都为99．9％。EF核苷酸的同源性为99．9％、蛋白质的同源性为99．5％～100．0％。

关键词：猪链球菌2型 MRP基因 EF基因序列分析

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用抑制性差减杂交筛选鸭疫里氏杆菌2型可能毒力基因

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南京农业大学学报 2008年第4期31卷 102-106页

作者：吴芳蔡建平陆承平范红结南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 广东省农业科学院兽医研究所广东广州510640

为寻找鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)可能的毒力基因,以鸭疫里氏杆菌2型(RA2)毒力株RAF2及弱毒力株LY-58为研究对象,通过抑制性差减杂交(SSH)试验,从RAF2株中获得14个特异性差异基因片段。经同源性分析,其中6个差异基因片... 详细信息

为寻找鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)可能的毒力基因,以鸭疫里氏杆菌2型(RA2)毒力株RAF2及弱毒力株LY-58为研究对象,通过抑制性差减杂交(SSH)试验,从RAF2株中获得14个特异性差异基因片段。经同源性分析,其中6个差异基因片段分别与外膜蛋白、ATP结合蛋白、转录调节因子、氨基酸通透酶、胞外蛋白编码基因有同源性,为可能的毒力基因;4个差异基因片段与功能未知蛋白或假定蛋白编码基因有关;另外4个差异基因片段未找到同源序列。利用PCR对上述10个可能与毒力相关的差异基因片段在13株分别属于8个不同血清型RA中的分布进行了检测,结果表明除8型外,以上差异基因片段在RA中分布普遍。

关键词：鸭疫里氏杆菌抑制性差减杂交毒力基因

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猪肺炎支原体P36基因在毕赤酵母中的表达

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江苏农业学报 2011年第2期27卷 307-312页

作者：祝永琴刘茂军冯志新魏建超曹瑞兵周斌陈溥言邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

根据GenBank中猪肺炎支原体P36基因序列设计1对特异性引物,通过PCR扩增出猪肺炎支原体特异性蛋白基因P36,克隆入酵母表达载体pPICZα-A,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-P36。PICZα-A-P36经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌... 详细信息

根据GenBank中猪肺炎支原体P36基因序列设计1对特异性引物,通过PCR扩增出猪肺炎支原体特异性蛋白基因P36,克隆入酵母表达载体pPICZα-A,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-P36。PICZα-A-P36经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株X-33。PCR鉴定为阳性的酵母转化子经甲醇诱导分泌P36蛋白于发酵上清液中,通过SDS-PAGE电泳以及Western-blotting进行鉴定,结果表明,P36蛋白基因获得了分泌性表达,而且具有良好的反应原性,这为猪肺炎支原体免疫检测试剂盒和基因工程疫苗的研制奠定了基础。

关键词：猪肺炎支原体 P36基因毕赤酵母分泌表达

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兔出血症病毒RT-PCR检测方法的建立及其临床应用

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畜牧兽医学报 2010年第11期41卷 1442-1446页

作者：胡波魏后军王芳范志宇徐鹏徐为中薛家宾何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

本研究旨在建立检测兔群鼻拭子中兔出血症病毒(RHDV)的RT-PCR方法,研究健康免疫兔群是否存在携带RHDV现象。根据GenBank上公布的RHDVvp60基因保守序列,设计了1对特异性引物,经cDNA的合成和PCR扩增,目的片段大小为591bp。结果表明该方法... 详细信息

本研究旨在建立检测兔群鼻拭子中兔出血症病毒(RHDV)的RT-PCR方法,研究健康免疫兔群是否存在携带RHDV现象。根据GenBank上公布的RHDVvp60基因保守序列,设计了1对特异性引物,经cDNA的合成和PCR扩增,目的片段大小为591bp。结果表明该方法能检出最小RNA浓度为2.40ng·μL-1,敏感性为血凝试验(HA)的8×103倍。通过对自5个省采集的168份健康免疫兔鼻拭子样品进行检测,结果显示,阳性样品为22份,阳性率为13.09%。试验表明:RT-PCR方法能快速、敏感地从健康免疫兔鼻拭子样品中检出RHDV,提示健康免疫兔群存在携带RHDV的现象,该方法适合临床进行大规模病原学检测和兔群携带病毒的调查,具有良好的应用前景。

关键词：兔出血症病毒 RT-PCR 鼻拭子病毒携带

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