检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：刘茂军甘源孔猛刘冬霞王丽刘冬阳邵国青冯志新熊琪琰王海燕王占伟白昀吴叙苏孙佩元江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京天邦生物科技有限公司江苏南京 210014

根据Genbank中猪肺炎支原体J株模式株(ATCC 25934或NCTC10110)与168株P97基因序列进行同源性比较，设计一对特异性引物，通过聚合酶链式反应(PCR)扩增出猪肺炎支原体168株特异性蛋白P97基因序列的R1R2区序列，克隆入T载体，并进行测序... 详细信息

根据Genbank中猪肺炎支原体J株模式株(ATCC 25934或NCTC10110)与168株P97基因序列进行同源性比较，设计一对特异性引物，通过聚合酶链式反应(PCR)扩增出猪肺炎支原体168株特异性蛋白P97基因序列的R1R2区序列，克隆入T载体，并进行测序，将测序结果与NCBI上公布的序列进行比较，找出变异规律，这为MHP的毒力研究提供新的思路，也为MHP病的诊断提供依据。

关键词：猪肺炎支原体 P97基因基因克隆序列分析

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传染性法氏囊病病毒抗原表位与乙型肝炎病毒核心抗原嵌合体蛋白的表达及其免疫功能分析

传染性法氏囊病病毒抗原表位与乙型肝炎病毒核心抗原嵌合体蛋白的...

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第九届全国病毒学学术研讨会

作者：刘小娟王永山欧阳伟毕振威张海彬王忠灿南京农业大学动物医学院南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京农业大学动物医学院南京210095 南京军区军事医学研究所南京210002 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

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传染性法氏囊病病毒AH1株vp2基因在昆虫细胞中的表达与应用

传染性法氏囊病病毒AH1株vp2基因在昆虫细胞中的表达与应用

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：欧阳伟王永山周宇张海彬唐雨德江苏省农业科学院兽医研究所／农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室／国家兽用生物制品工程技术研究中心南京 210014 南京农业大学动物医学院南京 210095 江苏省农业科学院兽医研究所／农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室／国家兽用生物制品工程技术研究中心南京 210014 南京农业大学动物医学院南京 210095 南京军区军事医学研究所南京 210002

将近期引起IBD免疫预防失败的传染性法氏囊病病毒(IBDV)vp2基因，定向克隆入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中，构建重组供体质粒pFastBacHTA-vP2，转化Escherichia coli DH10Bac感受态，筛选重组杆状病毒表达质粒pBac-VP2。用p... 详细信息

将近期引起IBD免疫预防失败的传染性法氏囊病病毒(IBDV)vp2基因，定向克隆入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中，构建重组供体质粒pFastBacHTA-vP2，转化Escherichia coli DH10Bac感受态，筛选重组杆状病毒表达质粒pBac-VP2。用pBac-VP2转染sf9昆虫细胞，获得重组杆状病毒vBac-VP2。对重组杆状病毒vBac-VP2感染的Sf9细胞，用间接免疫荧光试验(IFA)检测，具有特异性荧光;用IBDV抗体夹心ELISA检测，呈阳性反应，抗原效价达到1.6×103;用Western blotting分析，在53kDa处出现一条特异蛋白条带;电镜观察，重组Vp2蛋白能够自组装成病毒样颗粒，在感染细胞中发现了“包涵体样”结构。用HisTrapHP亲和层析柱纯化的重组Vp2蛋白作为包被抗原，建立的IBDV抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性。用重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞裂解物，免疫2周龄SPF鸡，一次免疫14d后，ELISA检测抗体效价为8×102，中和抗体效价为1106，攻毒实验的存活率为30％;二次免疫14 d后，ELISA抗体效价为3.2×103，中和抗体效价为2536，存活率为100％.在实验观察7 d内，重组Vp2蛋白免疫保护鸡未显任何临床症状和病理变化，法氏囊/体重比高于对照组(P<0.05)。本实验制备的病毒样颗粒重组Vp2蛋白在研制新型IBD基因工程疫苗和检测试剂方面显示出了应用前景。

关键词：传染性法氏囊病病毒 Vp2基因病毒样颗粒包涵体样结构间接ELISA 免疫实验

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传染性法氏囊病病毒AH1株vp2基因在昆虫细胞中的表达与应用

传染性法氏囊病病毒AH1株vp2基因在昆虫细胞中的表达与应用

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：欧阳伟王永山周宇张海彬唐雨德江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院南京军区军事医学研究所

将引起传染性法氏囊病IBD免疫预防失败的IBD病毒(IBDV)vp2基因,定向克隆入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建重组供体质粒pFastBacHTA-VP2,转化Escherichia coli DH10Bac感受态,筛选重组杆状病毒表达质粒pBac-VP2。用pBac-... 详细信息

将引起传染性法氏囊病IBD免疫预防失败的IBD病毒(IBDV)vp2基因,定向克隆入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建重组供体质粒pFastBacHTA-VP2,转化Escherichia coli DH10Bac感受态,筛选重组杆状病毒表达质粒pBac-VP2。用pBac-VP2转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒vBac-VP2。对重组杆状病毒vBac-VP2感染的Sf9细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)检测,具有特异性荧光;用IBDV抗体夹心ELISA检测,呈阳性反应,抗原效价达到1.6×10～3;用western blot分析,在53 ku处出现一条特异蛋白条带;电镜观察,重组Vp2蛋白能够自组装成病毒样颗粒,在感染细胞中发现了"包涵体样"结构。用HisTrap HP亲和层析柱纯化的重组Vp2蛋白作为包被抗原,建立的IBDV抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性。用重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞裂解物,免疫2周龄SPF鸡,一次免疫14 d后,ELISA检测抗体效价为8×10～2,中和抗体效价为1106,攻毒实验的存活率为30%;二次免疫14 d后,ELISA抗体效价为3.2×10～3,中和抗体效价为2536,存活率为100%。在实验观察7 d内,重组Vp2蛋白免疫保护鸡未显任何临床症状和病理变化,法氏囊/体重比高于对照组(p<0.05)。本实验制备的病毒样颗粒重组Vp2蛋白在研制新型IBD基因工程疫苗和检测试剂方面显示出了应用前景。

关键词：传染性法氏囊病病毒 Vp2基因病毒样颗粒包涵体样结构间接ELISA 免疫实验

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母猪精细养殖管理物联网平台的建立

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物联网技术 2013年第3期3卷 65-68页

作者：胡肄农张启迪黄小国江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 青岛农业大学山东青岛266109 常州市康乐农牧有限公司江苏常州213149

借鉴畜牧业发达国家的经验,将传统养殖设施和技术与物联网技术结合,同时集成养殖设施监控、母猪生理参数监测的无线传感网系统、电子标签与阅读器等动物标识系统、移动终端技术以及基于SaaS的云平台架构技术,建立了一种基于物联网的母... 详细信息

借鉴畜牧业发达国家的经验,将传统养殖设施和技术与物联网技术结合,同时集成养殖设施监控、母猪生理参数监测的无线传感网系统、电子标签与阅读器等动物标识系统、移动终端技术以及基于SaaS的云平台架构技术,建立了一种基于物联网的母猪精细饲养管理平台,也就是"网上猪场"平台。

关键词：母猪精细养殖物联网管理平台

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传染性法氏囊病病毒AH1株vp2基因在昆虫细胞中的表达与应用

传染性法氏囊病病毒AH1株vp2基因在昆虫细胞中的表达与应用

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会

作者：欧阳伟王永山周宇张海彬唐雨德江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院南京军区军事医学研究所

将近期引起IBD免疫预防失败的传染性法氏囊病病毒(IBDV)vp2基因,定向克隆入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建重组供体质粒pFastBacHTA-VP2,转化Escherichia coli DH10Bac感受态,筛选重组杆状病毒表达质粒pBac-VP2。用pBac-... 详细信息

将近期引起IBD免疫预防失败的传染性法氏囊病病毒(IBDV)vp2基因,定向克隆入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建重组供体质粒pFastBacHTA-VP2,转化Escherichia coli DH10Bac感受态,筛选重组杆状病毒表达质粒pBac-VP2。用pBac-VP2转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒vBac-VP2。对重组杆状病毒vBac-VP2感染的Sf9细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)检测,具有特异性荧光;用IBDV抗体夹心ELISA检测,呈阳性反应,抗原效价达到1.6×103;用Western blotting分析,在53kDa处出现一条特异蛋白条带;电镜观察,重组Vp2蛋白能够自组装成病毒样颗粒,在感染细胞中发现了"包涵体样"结构。用HisTrap HP亲和层析柱纯化的重组Vp2蛋白作为包被抗原,建立的IBDV抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性。用重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞裂解物,免疫2周龄SPF鸡,一次免疫14d后,ELISA检测抗体效价为8×102,中和抗体效价为1106,攻毒实验的存活率为30%;二次免疫14d后,ELISA抗体效价为3.2×103,中和抗体效价为2536,存活率为100%。在实验观察7d内,重组Vp2蛋白免疫保护鸡未显任何临床症状和病理变化,法氏囊/体重比高于对照组(P<0.05)。本实验制备的病毒样颗粒重组Vp2蛋白在研制新型IBD基因工程疫苗和检测试剂方面显示出了应用前景。

关键词：传染性法氏囊病病毒 Vp2基因病毒样颗粒包涵体样结构间接ELISA 免疫实验

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近期引起免疫失败的传染性法氏囊病病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达

近期引起免疫失败的传染性法氏囊病病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达

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第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛

作者：曹冰玉王永山范红结欧阳伟王忠灿唐雨德江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院南京军区军事医学研究所

为制备近期IBDV毒株的重组VP2蛋白,将近期安徽IBD免疫预防失败的病鸡法氏囊组织中扩增的VP2基因定向克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中,构建原核表达质粒pGEX-VP2,转化大肠杆菌Rosetta(DE3);经IPTG诱导后,用IBDV双抗体夹心ELISA检测,呈阳... 详细信息

为制备近期IBDV毒株的重组VP2蛋白,将近期安徽IBD免疫预防失败的病鸡法氏囊组织中扩增的VP2基因定向克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中,构建原核表达质粒pGEX-VP2,转化大肠杆菌Rosetta(DE3);经IPTG诱导后,用IBDV双抗体夹心ELISA检测,呈阳性反应;以SDS-PAGE分析,重组VP2融合蛋白的分子量为68ku,表达量约占菌体总蛋白的16.0%,表达产物主要以包涵体形式存在于菌体内;在Western-blotting中,重组VP2蛋白与IBDV抗体反应形成1条特异性蛋白带。本实验为研制针对近期流行IBDV毒株的新型基因工程疫苗和检测试剂奠定了基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒 IBDV VP2 原核表达

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弓形虫疫苗的研究进展

弓形虫疫苗的研究进展

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：孔猛孙佩元白昀邵国青江苏省农业科学院兽医研究所·农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心·江苏省畜禽产品安全性研究重点实验室南京农业大学动物医学院

弓形虫病作为一种严重的人畜共患病,无论在畜牧业还是在公共卫生学上都有着重要的意义。本文就弓形虫疫苗的类型及研究现状作一综述,为进一步研究弓形虫疫苗提供参考。

关键词：弓形虫疫苗

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IBDV抗原表位与VP2组合基因的分子构建及其在昆虫细胞中的表达

IBDV抗原表位与VP2组合基因的分子构建及其在昆虫细胞中的表达

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第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛

作者：周宇王永山范红结欧阳伟唐雨德王忠灿江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院南京军区军事医学研究所

运用PCR重叠延伸技术将传染性法氏囊病病毒(IBDV)多表位5e与VP2基因连接构建组合基因VP2-5e,将其插入到杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHT中,转化*** DH10Bac感受态细胞,经三抗性筛选获得重组杆状病毒表达质粒pBacHT-VP2-5e,用脂质体... 详细信息

运用PCR重叠延伸技术将传染性法氏囊病病毒(IBDV)多表位5e与VP2基因连接构建组合基因VP2-5e,将其插入到杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHT中,转化*** DH10Bac感受态细胞,经三抗性筛选获得重组杆状病毒表达质粒pBacHT-VP2-5e,用脂质体法转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒vBacHT-VP2-5e。对vBacHT-VP2-5e感染的Sf9细胞,以间接免疫荧光试验(IFA)检测,具有特异性荧光;电镜检查,重组VP2-5e蛋白能够自组装成病毒样颗粒(VLP);用免疫印迹分析(Western-blotting),在59kD处出现一条特异性蛋白条带。本实验为组合基因型重组IBD多价疫苗的研究奠定了基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒 VP2基因抗原表位组合基因表达

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IBDV抗原表位与HBcAg嵌合基因的分子设计及其表达产物分析

IBDV抗原表位与HBcAg嵌合基因的分子设计及其表达产物分析

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第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛

作者：刘小娟王永山欧阳伟张海彬王晓丽王忠灿唐雨德江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院南京军区军事医学研究所

为了提高模拟IBDV多表位基因5epis的免疫效力,运用重叠延伸PCR技术,在乙型肝炎病毒核心抗原(Hepatitis B core antigen,HBcAg)基因的231位～232位核苷酸(77位～78位氨基酸残基)之间插入BamH I和EcoR I酶切位点,构建HBcAg修饰基因(Modifi... 详细信息

为了提高模拟IBDV多表位基因5epis的免疫效力,运用重叠延伸PCR技术,在乙型肝炎病毒核心抗原(Hepatitis B core antigen,HBcAg)基因的231位～232位核苷酸(77位～78位氨基酸残基)之间插入BamH I和EcoR I酶切位点,构建HBcAg修饰基因(Modified HBc,mHBc)表达质粒pET-mHBc。然后,将5epis基因定向插入到该表达质粒mHBc基因中,获得嵌合基因mHBc-5epis表达质粒pET-mHBc-5epis,并在大肠杆菌中表达。用SDS-PAGE分析,重组嵌合蛋白的分子量约为29kDa,表达量约占菌体总蛋白的47.6%;在Western-blotting试验中,重组嵌合蛋白与IBDV抗体反应形成1条特异性蛋白带。将重组菌超声破碎后,用电镜观察,可见重组嵌合蛋白呈病毒样颗粒(VLP),直径约60 nm～80 nm;用IBDV抗体夹心ELISA检测,抗原效价达到2.0×10～2。本研究成功构建了5epis与HBcAg嵌合基因,在大肠杆菌中高效表达了具有IBDV抗原反应性的重组嵌合蛋白并形成了VLP,具有成为颗粒化表位型IBD基因工程疫苗的应用前景。

关键词：传染性法氏囊病病毒(IBDV) 乙肝病毒核心抗原(HBcAg) 抗原表位嵌合基因

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