检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2011年第7期31卷 955-960页

作者：李彬何孔旺温立斌俞正玉茅爱华王小敏张雪寒郭容利倪艳秀周俊明吕立新江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了分析2009年安徽省和江苏省周边地区流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传变异特征,采用RT-PCR方法对该地区分离的22株PRRSV的Nsp2和ORF5基因进行了扩增、克隆和测序,并进行序列分析。结果表明:22株PRRSV均属于美洲型毒株,其... 详细信息

为了分析2009年安徽省和江苏省周边地区流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传变异特征,采用RT-PCR方法对该地区分离的22株PRRSV的Nsp2和ORF5基因进行了扩增、克隆和测序,并进行序列分析。结果表明:22株PRRSV均属于美洲型毒株,其中21个毒株的Nsp2存在30个氨基酸的不连续缺失,与高致病性PRRSV有相同的缺失特征;而且此21个毒株的ORF5基因推导的氨基酸序列也发生多处突变,集中出现在毒力相关位点、抗原表位和糖基化位点序列中。只有HZNJ株与疫苗株的同源性较高。进化树分析显示,21个分离株与高致病性PRRSV处在同一进化分支,而HZNJ株与疫苗毒株有较近的亲缘关系,进一步说明高致病性PRRSV已成为该地区的优势流行毒株。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 Nsp2基因 ORF5基因遗传变异

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猪博卡病毒NP1基因的克隆与原核表达

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华北农学报 2011年第3期26卷 28-31页

作者：李彬毛立何孔旺温立斌茅爱华张雪寒倪艳秀郭容利马俊杰周俊明吕立新俞正玉江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

猪博卡病毒是近年来新发现的一种细小病毒。本研究根据其部分基因组序列(GenBank登录号GU902967-GU902971)设计了一对引物,采用PCR方法扩增出了猪博卡病毒的NP1基因,将其克隆到表达载体pET32a(+)中,构建了重组质粒pET32a-NP1,经测序鉴... 详细信息

猪博卡病毒是近年来新发现的一种细小病毒。本研究根据其部分基因组序列(GenBank登录号GU902967-GU902971)设计了一对引物,采用PCR方法扩增出了猪博卡病毒的NP1基因,将其克隆到表达载体pET32a(+)中,构建了重组质粒pET32a-NP1,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3)中,并进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌可表达分子量为46 kDa的融合蛋白,蛋白表达量较高,而且蛋白以可溶性形式存在于菌体中。表达产物经纯化后,目的蛋白纯度较好。Western Blot结果显示,表达的NP1蛋白能与His抗体发生特异性的免疫反应,表明原核表达的NP1蛋白具有良好的反应原性。

关键词：猪博卡病毒 NP1基因克隆原核表达

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2008-2010年中国华东地区PRRSV ORF5基因遗传变异分析

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中国农业科学 2011年第18期44卷 3886-3894页

作者：王小敏何孔旺张文文陈蔚茅爱华俞正玉温立斌倪艳秀张雪寒吕立新郭容利周俊明李彬江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院

【目的】对来自2008-2010年中国华东地区7个不同省市的疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪场送检的病料进行PRRSV检测,并对其ORF5基因进行测序,确定当前PRRSV在中国华东地区的分子流行病学特征,并分析PRRSV在中国的遗传演化规律。【方... 详细信息

【目的】对来自2008-2010年中国华东地区7个不同省市的疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪场送检的病料进行PRRSV检测,并对其ORF5基因进行测序,确定当前PRRSV在中国华东地区的分子流行病学特征,并分析PRRSV在中国的遗传演化规律。【方法】利用RT-PCR方法对采集的样品进行PRRSV检测,并对PRRSV检测呈阳性的36份病料进行ORF5基因的序列测定和分析。【结果】260份病料中共检测到118份PRRSV阳性样品,阳性率为45.4%。ORF5序列分析和系统进化树分析结果表明,本试验所获得的36株PRRSV毒株序列均属于北美型,与GenBank中高致病性PRRSV(HP-PRRSV)参考毒株的氨基酸同源性为94.6%-100%,并可分为5个亚群,亚群III与HP-PRRSV同源性最高,几乎所有的亚群中和表位(primary neutralizing epitope,PNE)都存在变异,亚群III和IV相对于其它亚群具有更多的糖基化位点。由于36个毒株是于2008-2010年间采集自安徽、江苏、上海等7省,进化树分析结果表明,病毒的分型并没有呈现明显的地域性。【结论】2008-2010年间中国华东地区普遍存在PRRSV感染,PRRSV流行株为HP-PRRSV,其遗传演化相对稳定,但也具有不同的遗传特征。来源于不同省市的PRRSV毒株的遗传关系存在交叉,虽然亚群IV和V只出现在部分省市,但PRRSV的分布没有呈现明显的地域特征。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征(PRRS) 华东地区 ORF5基因遗传变异

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免疫刺激复合物基质为佐剂的猪支原体肺炎活疫苗肌肉注射免疫效果评价

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江苏农业学报 2011年第6期27卷 1310-1315页

作者：熊祺琰王占伟甘源孔猛冯志新刘茂军邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

试验旨在探讨免疫刺激复合物基质(ISCOM-基质)作为猪支原体肺炎168株活疫苗佐剂使用的可行性,并考察其配合疫苗肌肉注射时的免疫效力和攻毒保护效力。首先以Quil A、胆固醇和磷脂为原料,采用透析法制备ISCOM-基质,然后将制备好的ISCOM-... 详细信息

试验旨在探讨免疫刺激复合物基质(ISCOM-基质)作为猪支原体肺炎168株活疫苗佐剂使用的可行性,并考察其配合疫苗肌肉注射时的免疫效力和攻毒保护效力。首先以Quil A、胆固醇和磷脂为原料,采用透析法制备ISCOM-基质,然后将制备好的ISCOM-基质与活疫苗混合孵育,检验其对活疫苗的毒性。于体外用ISCOM-matrix直接刺激或与刀豆蛋白共同刺激淋巴细胞,观察细胞的增殖应答情况。而后将添加ISCOM-matrix佐剂的猪支原体肺炎活疫苗肌肉注射免疫动物,检测血清抗体水平及淋巴细胞增殖应答水平,于免疫后8周攻毒,评价攻毒保护效力。结果表明,所制备的ISCOM-基质不影响活疫苗的活力,并且在体外可直接或协同刀豆蛋白刺激淋巴细胞产生明显的增殖反应,最低起效浓度为0.01 ng/ml;当作为佐剂与活疫苗配合肌肉注射免疫时,可以显著诱导动物对疫苗抗原的细胞免疫应答,体液免疫应答亦有一定程度增强。用肺炎支原体强毒攻毒后25 d剖检,免疫组病变明显较攻毒对照组减轻,显示出较好的攻毒保护效果。

关键词：免疫刺激复合物基质猪支原体肺炎活疫苗肌肉注射

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猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)江苏分离株NJGC ORF5基因的克隆及遗传变异分析

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江苏农业学报 2011年第4期27卷 775-781页

作者：李彬毛立何孔旺刘彦玲温立斌俞正玉茅爱华王小敏张雪寒郭容利周俊明倪艳秀吕立新江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了分析江苏省流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传变异特征,采用RT-PCR方法对江苏地区分离的PRRSV NJGC株的ORF5基因进行了克隆和测序,利用DNAstar软件与国内外代表性毒株进行了同源性分析与序列对比,并绘制了系统进化树。结... 详细信息

为了分析江苏省流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传变异特征,采用RT-PCR方法对江苏地区分离的PRRSV NJGC株的ORF5基因进行了克隆和测序,利用DNAstar软件与国内外代表性毒株进行了同源性分析与序列对比,并绘制了系统进化树。结果表明:NJGC株属于美洲型PRRSV,其ORF5基因与美洲型代表毒株VR-2332的同源性为90.5%,与中国的经典毒株CH-1a的同源性为92.5%,与中国高致病性PRRSV毒株的同源性在98.0%以上;进化树分析结果显示,NJGC株和高致病性PRRSV在同一进化分支,推测其属于高致病性PRRSV,且与2006年分离的SY0608有更近的亲缘关系,体现了PRRSV具有一定的地域性。同时,该基因编码蛋白的抗原表位和抗原性也发生了变化。依据序列推断PRRSV NJGC株属于具有明显地域性的高致病性PRRSV。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因遗传变异抗原分析

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猪初乳中SIgA纯化及其单抗制备

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江苏农业学报 2011年第5期27卷 1026-1030页

作者：冯志新王海燕刘茂军甘源吴叙苏邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为制备猪SIgA的特异性单克隆抗体,该研究采用饱和硫酸铵盐析法从猪初乳中提取猪SIgA蛋白,分别经Sephadex G-200凝胶层析、DEAE52纤维柱离子层析及Protein A柱亲合层析纯化。以纯化的猪SIgA蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠制备抗猪SIgA的单克... 详细信息

为制备猪SIgA的特异性单克隆抗体,该研究采用饱和硫酸铵盐析法从猪初乳中提取猪SIgA蛋白,分别经Sephadex G-200凝胶层析、DEAE52纤维柱离子层析及Protein A柱亲合层析纯化。以纯化的猪SIgA蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠制备抗猪SIgA的单克隆抗体。结果显示:已获得6株特异的抗猪SIgA的单克隆抗体,分别命名为2D9E6、2D9E9、3E1G2、3E1H5、4H5B7和4H5B10,6株单抗均为IgG1,κ型。将其中1株2D9E6制备腹水,经纯化后ELISA效价可达1∶81 000以上。表明以猪SIgA天然蛋白为免疫原,成功制备了6株高特异性的单克隆抗体,可为猪黏膜免疫研究提供基础材料。

关键词：猪SIgA 纯化单克隆抗体

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兔出血症诊治病例

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中国兽医杂志 2011年第6期47卷 88-89,102页

作者：徐鹏范志宇王芳胡波薛家宾魏后军江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病免疫与诊断重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

兔出血症（rabbit hemorrhagic disease,RHD）俗称兔瘟,是由兔出血症病毒（rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV）引起的以急性、高度传染性、大面积死亡为特征的烈性家兔传染病。目前,使用兔出血症疫苗后该病得到了很好防控,但由于... 详细信息

兔出血症（rabbit hemorrhagic disease,RHD）俗称兔瘟,是由兔出血症病毒（rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV）引起的以急性、高度传染性、大面积死亡为特征的烈性家兔传染病。目前,使用兔出血症疫苗后该病得到了很好防控,但由于免疫程序不适当或因主观因素不免疫疫苗等原因,该病呈零星散发态势,给发病兔场造成严重损失。

关键词：兔出血症病毒病例诊治免疫疫苗 virus 大面积死亡免疫程序传染性

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猪肺炎支原体P36基因在毕赤酵母中的表达

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江苏农业学报 2011年第2期27卷 307-312页

作者：祝永琴刘茂军冯志新魏建超曹瑞兵周斌陈溥言邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

根据GenBank中猪肺炎支原体P36基因序列设计1对特异性引物,通过PCR扩增出猪肺炎支原体特异性蛋白基因P36,克隆入酵母表达载体pPICZα-A,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-P36。PICZα-A-P36经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌... 详细信息

根据GenBank中猪肺炎支原体P36基因序列设计1对特异性引物,通过PCR扩增出猪肺炎支原体特异性蛋白基因P36,克隆入酵母表达载体pPICZα-A,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-P36。PICZα-A-P36经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株X-33。PCR鉴定为阳性的酵母转化子经甲醇诱导分泌P36蛋白于发酵上清液中,通过SDS-PAGE电泳以及Western-blotting进行鉴定,结果表明,P36蛋白基因获得了分泌性表达,而且具有良好的反应原性,这为猪肺炎支原体免疫检测试剂盒和基因工程疫苗的研制奠定了基础。

关键词：猪肺炎支原体 P36基因毕赤酵母分泌表达

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肠出血性大肠杆菌O157∶H7鞭毛可变区基因片段的克隆、表达与免疫原性

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江苏农业学报 2011年第5期27卷 1021-1025页

作者：张雪寒何孔旺赵攀登栾晓婷叶青温立斌李彬王小敏郭容利倪艳秀周俊明俞正玉茅爱华吕立新江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7是食源感染的人兽共患病原菌。鞭毛蛋白(H7)是EHEC O157∶H7重要的毒力因子,其编码基因为flic。该研究在体外克隆和表达flic基因的可变区,并检测其免疫原性,旨在为EH... 详细信息

肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7是食源感染的人兽共患病原菌。鞭毛蛋白(H7)是EHEC O157∶H7重要的毒力因子,其编码基因为flic。该研究在体外克隆和表达flic基因的可变区,并检测其免疫原性,旨在为EHEC O157∶H7疫苗的研制提供候选抗原。PCR扩增到flic基因538～1 483bp的可变区,成功克隆入冷诱导表达载体pColdⅠ中,构建重组表达质粒。重组菌BL21(pCold I-flic)0.5 mmol/LIPTG过夜诱导,SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定。Balb/c小鼠免疫和攻毒试验评价重组H7蛋白的免疫原性。结果显示:H7基因(flic)片段945 bp在pColdⅠ中成功表达,大小为31 000,能够与天然EHEC O157∶H7全抗血清反应;免疫小鼠存活率可以达到80%,而非免疫小鼠存活率仅为20%;免疫组粪便排菌数量显著低于对照组(P<0.05)。以上结果说明,H7鞭毛的可变区与菌体黏附密切相关,并且其诱导产生的抗体具有一定的抑制黏附作用,可以作为亚单位疫苗研制的候选抗原,在EHEC O157∶H7早期黏附时,协同Ⅲ型分泌系统蛋白降低菌体在肠道内的黏附。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157∶H7 flic基因表达小鼠

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靶向传染性法氏囊病病毒VP1基因siRNA对病毒复制的抑制

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中国兽医学报 2011年第10期31卷 1404-1409页

作者：欧阳伟王永山刘小娟张海彬江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

根据传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP1基因保守区序列,选择设计了3个靶向VP1的小干扰RNA序列(siR-NA):VP1-siRNA668、VP1-siRNA1034和VP1-siRNA2250,化学合成DNA序列,体外转录合成siRNA,转染鸡胚成纤维细胞(CEF)后接种IBDV,分析siRNA对病毒复制的影响。结果显示,病毒接种后72h,3个VP1-siRNA转染组未出现明显的细胞病变(CPE),病毒滴度分别为102.75,102.00,101.75 TCID50/0.1mL,而siRNACON转染和单纯IBDV接种对照组均出现明显CPE,病毒滴度均为106 TCID50/0.1mL;用荧光定量RT-PCR分析VP1基因水平,3个VP1-siRNA转染组比对照组分别降低了73.10%,81.79%,90.28%。结果表明,本试验选择设计的3个siRNA具有明显抑制IBDV复制功能,其中2 250位点的siRNA抑制效果最明显,推测该区域是VP1基因的重要功能区,是新型抗IBDV药物与疫苗设计的重要靶标。

关键词： RNA干扰(RNAi) 小干扰RNA(siRNA) 传染性法氏囊病病毒(IBDV) VP1基因

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