检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：王芳薛家宾范志宇胡波魏后军宋艳华江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

目前,兔出血症组织灭活疫苗生产面临着非免兔来源不足的问题,这严重地制约着疫苗的生产及养兔业的发展。我们通过分子生物学等技术构建了重组兔出血症病毒VP60杆状病毒(BAC-VP60株)。将该重组毒作为生产用毒种,以兔出血症病毒皖阜株作... 详细信息

目前,兔出血症组织灭活疫苗生产面临着非免兔来源不足的问题,这严重地制约着疫苗的生产及养兔业的发展。我们通过分子生物学等技术构建了重组兔出血症病毒VP60杆状病毒(BAC-VP60株)。将该重组毒作为生产用毒种,以兔出血症病毒皖阜株作为检验用毒种,进行了兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗(BAC-VP60株)的研制。首先,我们对重组兔出血症病毒VP60杆状病毒(BAC-VP60株)、兔出血症病毒皖阜株以及生产用Sf9昆虫细胞进行了传代,并对它们进行了全面的鉴定和研究。结果显示,疫苗毒传代稳定、免疫原性良好;检验用毒种传代、毒力均稳定;生产用Sf9细胞传代稳定、无致瘤性。其次,通过生产工艺研究,确定了细胞的适用培养基、初始浓度、接毒剂量、收获时间以及培养方式。在以上研究基础上,实验室制备了5批次疫苗,并对疫苗产品的安全性、免疫效力、免疫期、保存期等进行了研究。结果显示,实验室产品对所有品种的家兔均安全;疫苗具有较好的免疫效力,免疫期(免疫持续期)可达7个月;产品在2～8℃保存,保存期至少为24个月。接下来,在疫苗生产企业进行中试生产,连续生产10批,共计约110万头份。使用6批中间试制产品在江苏、山东、浙江省内的6个规模化养兔场,对不同品种、不同日龄的家兔进行临床试验,通过疫苗注射后的临床观察、生产性能测定、攻毒保护等方法评估该疫苗的安全性及免疫效力。试验结果显示,该产品对不同品种、不同日龄的家兔均安全;在使用该疫苗期间,所有养殖场均未发生兔出血症疫情,实验结束后,将家兔取回实验室进行攻毒。结果显示,疫苗免疫7个月后,免疫家兔能抵抗强毒的攻击,达到100%的保护,对照兔至少死亡4只。临床试验结束后,我们递交了兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗(BAC-VP60株)新兽药注册申请材料。目前,该疫苗已通过初审。

关键词：兔出血症病毒杆状病毒生产工艺安全性免疫效力免疫期保存期

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Viperin对猪瘟病毒的抑制作用研究

Viperin对猪瘟病毒的抑制作用研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：李文良毛立杨蕾蕾郝飞张纹纹江杰元江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

引言干扰素是先天免疫的重要组成成分,其中Ⅰ型干扰素与特异受体结合后可以诱导产生多达300种的干扰素刺激基因（ISGs）。Viperin是近年来新发现的一种ISG,已有研究证明它对多种病毒具有抗病毒活性,如HCMV、流感病毒、丙型肝炎病毒（HC... 详细信息

引言干扰素是先天免疫的重要组成成分,其中Ⅰ型干扰素与特异受体结合后可以诱导产生多达300种的干扰素刺激基因（ISGs）。Viperin是近年来新发现的一种ISG,已有研究证明它对多种病毒具有抗病毒活性,如HCMV、流感病毒、丙型肝炎病毒（HCV）、西尼罗河病毒（WNV）、登革热病毒等。猪瘟是危害养猪业发展的重要病毒病。本研究扩增猪Viperin基因,构建真核表达质粒,转染PK-15细胞构建稳定表达Viperin的细胞系,在此基础上研究Viperin对猪瘟病毒复制的抑制作用,丰富了Viperin抗病毒谱,为猪瘟的防控提供新的思路。材料与方法设计引物扩增猪Viperin完整基因序列,克隆入pEGFP-C1中构建真核表达质粒,转染PK-15细胞,经G418筛选克隆传代,获得稳定表达Viperin的细胞系PK-Vi,同时使用空质粒构建对照细胞系PK-C1,通过Western blot和IFA鉴定蛋白的表达情况。将两种细胞铺于24孔细胞培养板,接种100 TCID猪瘟石门株病毒,在12、24、48、72h后分别收获细胞,通过荧光定量RT-PCR和TCID检测比较病毒复制水平的差异。进而构建表达CSFV蛋白E2、NS3、NS5B的真核表达质粒,与Viperin表达质粒共转染BHK21细胞,通过激光共聚焦检测蛋白的共定位情况。结果与讨论RT-PCR成功获得猪Viperin编码基因,克隆入pEGFP-C1中,转染PK-15细胞后绿色荧光主要表达在细胞浆中,且表达蛋白定位于内质网上。质粒转染PK-15细胞后经过G418筛选、克隆、检测、传代获得稳定表达Viperin的细胞系PK-Vi,与对照细胞系PK-C1共同进行Western blot鉴定,分别获得28ku和70ku的目的条带,表明重组蛋白以正确的形式表达。接种CSFV后,PK-Vi组在12、24、48、72h病毒基因组相对含量比对照组分别降低1.5、3.2、4.8、3.5倍,TCID检测也显示相似的结果,病毒含量分别降低2、3.2、6.3、5倍。激光共聚焦检测结果表明Viperin与病毒E2和NS5B蛋白存在共定位。结论本研究成功克隆猪Viperin基因序列,并构建稳定表达Viperin的PK-15细胞系。接种猪瘟病毒后能够显著抑制病毒的增殖,且Viperin与CSFV E2、NS5B蛋白存在共定位,说明Viperin主要影响病毒基因组的复制,与病毒蛋白的相互作用可能介导其抗病毒作用的发挥。

关键词： Viperin 真核表达质粒基因序列猪瘟病毒细胞系抑制作用

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兔出血症病毒感染兔PBMC中细胞因子水平的变化及意义

兔出血症病毒感染兔PBMC中细胞因子水平的变化及意义

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中国畜牧兽医学会养兔学分会成立大会暨第一届学术交流大会

作者：仇汝龙宋艳华胡波范志宇魏后军薛家宾王芳江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

兔出血症病毒(RHDV)对家兔具有较高的感染性,家兔感染后死亡率可达70～90%。家兔感染的严重程度和病毒引起的以过度炎症反应为特征的细胞因子风暴密切相关。为证实细胞因子在RHDV致使家兔急性死亡中的作用,分析感染兔体内天然免疫的状态... 详细信息

兔出血症病毒(RHDV)对家兔具有较高的感染性,家兔感染后死亡率可达70～90%。家兔感染的严重程度和病毒引起的以过度炎症反应为特征的细胞因子风暴密切相关。为证实细胞因子在RHDV致使家兔急性死亡中的作用,分析感染兔体内天然免疫的状态,本研究对感染RHDV兔的外周血淋巴细胞(PBMC)中细胞因子表达水平进行了检测。将RHDV接种2月龄以上新西兰兔,分别于6、12、24、30、36小时采集并分离兔PBMC,采用荧光定量Q-PCR的方法,对细胞因子TNF-α、IFN-γ和IL-6进行定量检测。结果显示,(1)在RHDV感染的6小时内,兔体TNF-α快速上调,表明兔体内炎症反应发展迅速,而6-30小时表达减弱;(2)在RHDV感染的兔体内IL-6处于持续高水平表达状态。IL-6将会刺激炎症反应和肝脏的再生,并通过IL-6/Stat3途径保护肝脏免受损伤;(3)在病毒感染6小时内,兔体IFN-γ表达上调并达到峰值,在感染的中后期表达量减弱,其与TNF-α变化相似;病毒的感染进程及其在组织中的复制和停留,可能导致感染后期外周血中的病毒含量较少,进一步引起感染后期细胞因子水平的降低。本研究通过对感染RHDV的新西兰兔PBMC中细胞因子表达水平的检测,分析兔体内的天然免疫状况,并对RHDV的感染机制进行初步分析。此外,PBMC产生的细胞因子的定量分析也可用于疫苗免疫水平的检测,为RHDV致病及免疫机理的研究奠定基础。

关键词： RHDV PBMC 细胞因子 TNF-α IFN-γ IL-6

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坦布苏病毒E蛋白免疫原性及免疫机理的研究

坦布苏病毒E蛋白免疫原性及免疫机理的研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：赵冬敏黄欣梅韩凯凯刘宇卓杨婧刘青涛安凤娇李银江苏省农业科学院兽医研究所国家兽用生物制品工程技术研究中心农业部兽用生物制品工程技术重点实验室

引言坦布苏病毒(GTMUV)是2010年我国新发现的一种可引起鸭鹅产蛋下降、采食量下降、生长迟缓及死亡的黄病毒属病毒。黄病毒属病毒基因组编码3中结构蛋白,其中囊膜蛋白(E蛋白)含有病毒的抗原决定簇,E蛋白与病毒对宿主细胞的嗜性、病毒与... 详细信息

引言坦布苏病毒(GTMUV)是2010年我国新发现的一种可引起鸭鹅产蛋下降、采食量下降、生长迟缓及死亡的黄病毒属病毒。黄病毒属病毒基因组编码3中结构蛋白,其中囊膜蛋白(E蛋白)含有病毒的抗原决定簇,E蛋白与病毒对宿主细胞的嗜性、病毒与宿主细胞膜融合或与受体结合以及病毒的致病性相关。材料与方法利用PCR方法扩增得到目的片段,构建重组表达质粒pET32a-E。转化至BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达目的蛋白并进行SDS-PAGE分析和western-blot鉴定。将纯化的E蛋白免疫雏鸭,免疫2周后分别进行如下检测:①间接ELISA检测雏鸭血清中特异性抗体水平;②采集免疫鸭抗凝血,分离淋巴细胞,进行淋巴细胞转化实验;③利用ELISA试剂盒检测雏鸭血清中免疫因子的含量;④E蛋白免疫组和对照组雏鸭分别接种坦布苏病毒,攻毒后收集血清,利用荧光定量RT-PCR方法检测坦布苏病毒核酸。结果与讨论扩增坦布苏病毒E蛋白构建原核表达载体pET32a-E,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导获得目的蛋白,Western blot鉴定发现,重组E蛋白具有较好的反应原性和良好的免疫原性。间接ELISA检测雏鸭血清中特异性抗体水平,结果显示,抗体水平均大于1:51200。采集免疫鸭抗凝血,分离淋巴细胞,进行淋巴细胞转化实验,结果显示,E蛋白免疫组雏鸭淋巴细胞增殖刺激指数显著高于对照组。利用ELISA试剂盒检测雏鸭血清中免疫因子IL-2、TNF-α、IFN-γ的含量,结果显示,E蛋白免疫组雏鸭三种免疫因子含量与对照组相比均有所提高,统计学分析显示,免疫组TNF-α含量与对照组相比差异显著。用荧光定量RT-PCR方法检测坦布苏病毒核酸。采用相对定量法,以GAPDH为内参,计算各样本△Ct值(目的基因△Ct值-内参△Ct值),目的基因的相对定量则以2-△△Ct表示,计算目的基因相对于对照组的变化倍数(对照组=1)。结果显示,E蛋白免疫组雏鸭血清中病毒核酸含量显著低于对照组。结论本研究成功表达GTMUVE蛋白,纯化的重组E蛋白免疫雏鸭后可诱导机体产生显著的免疫反应并有效抵御GTMUV的感染。

关键词：坦布苏病毒 ELISA 目的蛋白免疫原性免疫机理

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降低养猪生产风险,合理优化资源配置

降低养猪生产风险,合理优化资源配置

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中国猪业科技大会暨中国畜牧兽医学会2015年学术年会

作者：陆昌华胡肄农谭业平郁达威江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

为适应我国畜禽养殖生产向高产出、高效益、低消耗方向发展。针对动物疫病风险与当前养殖经营管理现状,作者以生猪和猪肉产品为例,采用动物卫生经济学的思路、对养猪业风险加大的主要表现、生猪产销体系风险加大的根本原因、猪场经济效... 详细信息

为适应我国畜禽养殖生产向高产出、高效益、低消耗方向发展。针对动物疫病风险与当前养殖经营管理现状,作者以生猪和猪肉产品为例,采用动物卫生经济学的思路、对养猪业风险加大的主要表现、生猪产销体系风险加大的根本原因、猪场经济效益、"养、贩、宰"之间利润分割进行剖析。并指出农户散养和小规模专业户养殖是中国当前生猪主要养殖模式,该模式的市场波动性大,难以创造品牌产品

关键词：养猪业优化资源配置养猪生产

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表达山羊副流感病毒3型F蛋白重组杆状病毒的构建与鉴定

表达山羊副流感病毒3型F蛋白重组杆状病毒的构建与鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：李文良徐艳毛立郝飞杨蕾蕾张纹纹江杰元江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

引言副流感病毒3型属副黏病毒科呼吸道病毒属,是人和动物呼吸道重要病原。其中年副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)是引起牛呼吸道疾病的主要病原,危害巨大。2013年底本实验室首次从江苏、安徽多地患呼吸道疾病... 详细信息

引言副流感病毒3型属副黏病毒科呼吸道病毒属,是人和动物呼吸道重要病原。其中年副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)是引起牛呼吸道疾病的主要病原,危害巨大。2013年底本实验室首次从江苏、安徽多地患呼吸道疾病的山羊中分离鉴定出山羊PIV3,成为该病毒属的新成员。HN、F、M、N是病毒的主要结构蛋白,其中糖蛋白F是由F1、F2组成的异源二聚体,包括糖基和脂肪酸,分子量在60-65ku之间,起着融合细胞的作用,也是主要保护性抗原。本研究克隆JS2013分离株F基因,构建重组杆状病毒,获得重组蛋白,为病毒F蛋白的功能研究以及疫苗和检测方法的建立提供有力工具。材料方法根据病毒基因组序列设计引物通过RT-PCR扩增F蛋白基因,克隆入Bac-to-Bac表达系统质粒pFastBacHT B中,经PCR、酶切和测序鉴定正确的阳性重组质粒转化DH10Bac,经两次蓝白菌落筛选,挑取白色菌落提取Bacmid,将PCR鉴定正确重组的Bacmid(rBac-F)转染Sf9昆虫细胞,连续传代观察细胞病变情况并采用PCR鉴定目的基因的存在,从而获得重组杆状病毒。进一步使用His标签单抗和原核表达F蛋白制备的小鼠多抗通过Westemblot和IFA鉴定重组蛋白的表达情况。结果 RT-PCR成功扩增出F基因序列,克隆入pFastBacHTB中,挑取菌落经PCR、酶切鉴定为阳性的质粒进一步经测序鉴定序列正确无误,符合阅读框。经两次蓝白菌落筛选,挑取白色菌落提取Bacmid,正确重组的Bacmid经M13引物扩增获得约4100bp的条带。转染Sf9细胞后连续传代观察,至第3代接种后3天开始出现细胞病变,细胞变大变圆、脱落,证明获得重组病毒,并将其继续传代扩增。提取病毒DNA,通过F基因的引物进行PCR检测获得1640bp的目的条带。两种抗体进行Westem blot检测均可显示63ku的重组蛋白条带,IFA检测均可见特异的荧光分布于Sf9细胞内,说明目的蛋白获得正确的表达,具有良好的抗原性。讨论成功构建表达CPIV3 F蛋白的重组杆状病毒,蛋白获得正确表达,这将为进一步研究该病毒F蛋白的功能及CPIV3疫苗和诊断方法的研究提供基础和材料。

关键词：重组杆状病毒细胞病变副流感病毒

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规模化猪场传染性胸膜肺炎放线杆菌血清5型的分离与鉴定

规模化猪场传染性胸膜肺炎放线杆菌血清5型的分离与鉴定

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江苏省畜牧兽医学会成立60周年庆典暨2015年学术年会

作者：俞正玉周俊明倪艳秀茅爱华祝昊丹吕立新李彬何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京 210014

从江苏镇江某猪场出现呼吸困难、肺脏有出血性纤维渗出性病变的死猪中分离出1 株革兰阴性球杆菌,PCR 鉴定该菌为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清5 型。小鼠毒力试验显示其有较强的致病力。药敏试验显示该分离菌株对氟哌酸、头孢噻呋、庆... 详细信息

从江苏镇江某猪场出现呼吸困难、肺脏有出血性纤维渗出性病变的死猪中分离出1 株革兰阴性球杆菌,PCR 鉴定该菌为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清5 型。小鼠毒力试验显示其有较强的致病力。药敏试验显示该分离菌株对氟哌酸、头孢噻呋、庆大霉素等11 种药物敏感,对头孢曲松、万古霉素、卡那霉素、氯霉素和呋喃妥因为中介,而对洁霉素、大观霉素、链霉素、复方新诺明呈现耐药现象。

关键词：猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清5型PCR鉴定

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兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗(BAC-VP60株)的研制

兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗(BAC-VP60株)的研制

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江苏省畜牧兽医学会成立60周年庆典暨2015年学术年会

作者：王芳薛家宾范志宇胡波魏后军宋艳华江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

目前，兔出血症组织灭活疫苗生产面临着非免兔来源不足的问题，这严重地制约着疫苗的生产及养兔业的发展。我们通过分子生物学等技术构建了重组兔出血症病毒VP60 杆状病毒(BAC-VP60 株)。将该重组毒作为生产用毒种，以兔出血症病毒皖阜... 详细信息

目前，兔出血症组织灭活疫苗生产面临着非免兔来源不足的问题，这严重地制约着疫苗的生产及养兔业的发展。我们通过分子生物学等技术构建了重组兔出血症病毒VP60 杆状病毒(BAC-VP60 株)。将该重组毒作为生产用毒种，以兔出血症病毒皖阜株作为检验用毒种，进行了兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗(BAC-VP60 株)的研制。

关键词：兔出血症病毒杆状病毒生产工艺安全性免疫效力

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传染性法氏囊病病毒对鸡法氏囊组织中干扰素和p53转录的影响

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中国兽医学报 2015年第6期35卷 862-867页

作者：欧阳伟王永山刘华洁杜希宁张海彬江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京农业大学动物医学院南京210095 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 南京师范大学生命科学学院南京210046

为了分析传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染对鸡体抗病毒天然免疫能力的影响,本研究应用IBDV弱毒(B87)和强毒(QL/12)分别感染4周龄SPF鸡,每隔12h(12~84h)取3只鸡的法氏囊组织作为1个pool,用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测其感染前后干扰素(IFN)和... 详细信息

为了分析传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染对鸡体抗病毒天然免疫能力的影响,本研究应用IBDV弱毒(B87)和强毒(QL/12)分别感染4周龄SPF鸡,每隔12h(12~84h)取3只鸡的法氏囊组织作为1个pool,用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测其感染前后干扰素(IFN)和p53的mRNA水平,同时分析法氏囊组织的病理变化和病毒载量。结果显示:在QL/12组,IFN-α和IFN-βmRNA水平随着时间的增加逐渐升高,48h达到峰值,随后降低;IFN-γmRNA水平随着时间的增加逐渐升高,60h达到峰值,随后逐渐降低;p53mRNA含量迅速升高,60h达到峰值,随后降低。在B87组,IFN-αmRNA水平先降低后升高(48h达到最低值),而IFN-βmRNA水平变化不规则,72h含量最高;IFN-γmRNA水平先逐渐升高后降低(72h达到峰值);p53mRNA含量变化较小,36h含量最高。QL/12组诱导法氏囊组织产生的IFN mRNA(IFN-α、IFN-β和IFN-γmRNA)以及p53mRNA水平均显著高于B87组。病理组织学检查,QL/12组法氏囊淋巴滤泡呈不同程度的损伤,而B87组法氏囊组织未见明显的组织病变。qRT-PCR检测,QL/12组法氏囊组织中病毒含量48h达到峰值(8.4×106拷贝/mg),而B87组法氏囊组织中病毒含量72h达到峰值(6.6×104拷贝/mg)。本研究结果表明IBDV感染严重干扰了鸡体IFN和p53介导的抗病毒天然免疫反应。

关键词：传染性法氏囊病病毒(IBDV) 干扰素 p53 天然免疫

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猪肉生产过程中质量损耗分析与预冷过程优化

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江苏农业学报 2015年第2期31卷 468-470页

作者：陆昌华何振峰甘泉胡肄农孙友珍谭业平刘亮田景福郁达威江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 福州大学数学与计算机学院福建福州350108 江苏省福润肉类加工有限公司江苏连云港222000 雨润控股集团有限公司江苏南京210041

中国是世界第一肉类生产大国,却不是肉类加工强国,存在产业加工率低、质量安全保障程度不高等重大问题[1]。为此,要实现企业猪肉的利用最大化,就需控制影响猪肉质量的诸多因素,以保证猪肉品质量的安全,减少不同生产阶段猪肉质量的损耗。... 详细信息

中国是世界第一肉类生产大国,却不是肉类加工强国,存在产业加工率低、质量安全保障程度不高等重大问题[1]。为此,要实现企业猪肉的利用最大化,就需控制影响猪肉质量的诸多因素,以保证猪肉品质量的安全,减少不同生产阶段猪肉质量的损耗。1猪肉质量损失因素分析猪肉生产全过程在时间上是连续的。按时间顺序可分为：宰前饲养、运输、宰前静养、屠宰和分割、冷却成熟、猪肉运输6个阶段。

关键词：片猪肉预冷损耗

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