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江苏省畜牧兽医学会成立60周年庆典暨2015年学术年会

作者：刘华洁杜希宁梅永杰王晓丽欧阳伟毕振威潘群兴姚火春王永山南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京师范大学生命科学学院江苏南京210046 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为分析传染性法氏囊病病毒(IBDV)重组VP3 蛋白的ELISA 抗原反应性，将IBDV vp3基因插入杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHTA 中，构建重组供体质粒pFastBacHTA-vp3 并转化*** DH10Bac 感受态细菌，经抗性筛选获得重组杆状病毒表达质粒p... 详细信息

为分析传染性法氏囊病病毒(IBDV)重组VP3 蛋白的ELISA 抗原反应性，将IBDV vp3基因插入杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHTA 中，构建重组供体质粒pFastBacHTA-vp3 并转化*** DH10Bac 感受态细菌，经抗性筛选获得重组杆状病毒表达质粒pBac-vp3.

关键词：传染性法氏囊病病毒(IBDV) VP3蛋白杆状病毒 ELISA

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兔源多杀性巴氏杆菌C_(51-17)株ompA基因表达与免疫原性鉴定

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安徽农业科学 2015年第35期43卷 227-228,237页

作者：徐为中王芳胡波范志宇魏后军宋艳华薛家宾仇汝龙刘星江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

[目的]研究兔源多杀性巴氏杆菌C_(51-17)株omp A基因表达与蛋白免疫原性鉴定。[方法]根据Gen Bank公布的多杀性巴氏杆菌序列AE004439设计引物,经PCR扩增出兔源多杀性巴氏杆菌外膜蛋白omp A基因,开放阅读框包含1 062 bp碱基,插入到p GEX-... 详细信息

[目的]研究兔源多杀性巴氏杆菌C_(51-17)株omp A基因表达与蛋白免疫原性鉴定。[方法]根据Gen Bank公布的多杀性巴氏杆菌序列AE004439设计引物,经PCR扩增出兔源多杀性巴氏杆菌外膜蛋白omp A基因,开放阅读框包含1 062 bp碱基,插入到p GEX-6p-1质粒,构建成功重组表达载体p GEX-domp A,转入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导高效表达出多杀性巴氏杆菌成熟重组外膜蛋白omp A。[结果]表达产物经SDS-PAGE分析,重组多杀性巴氏杆菌外膜蛋白omp A分子量在63 ku,Western blot分析显示,重组蛋白能与兔抗多杀性巴氏杆菌高免血清呈现免疫反应,表明表达的重组蛋白具有较好的免疫活性。[结论]获得的重组蛋白为家兔多杀性巴氏杆菌病诊断试剂盒和疫苗的进一步研究奠定基础。

关键词：兔多杀性巴氏杆菌 ompA 原核表达

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兔源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定

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安徽农业科学 2015年第33期43卷 108-109,145页

作者：徐为中王芳胡波范志宇魏后军宋艳华薛家宾仇汝龙刘星江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

从送检病死兔肺和肝中分离培养出5株细菌,经过细菌培养、染色镜检、生化试验、PCR鉴定和动物致病性试验对其进行鉴定。鉴定结果表明,分离到的菌株为荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌,对小鼠有较强的致病性。药敏试验结果表明,分离菌株对环丙... 详细信息

从送检病死兔肺和肝中分离培养出5株细菌,经过细菌培养、染色镜检、生化试验、PCR鉴定和动物致病性试验对其进行鉴定。鉴定结果表明,分离到的菌株为荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌,对小鼠有较强的致病性。药敏试验结果表明,分离菌株对环丙沙星、氧氟沙星、氟苯尼考、恩诺沙星和磺胺六甲氧嘧啶等药物敏感。

关键词：兔多杀性巴氏杆菌荚膜血清A型分离鉴定

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坦布苏病毒对鸭的致病性和传播特性研究

坦布苏病毒对鸭的致病性和传播特性研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：刘青涛李银赵冬敏刘宇卓黄欣梅杨婧韩凯凯安凤娇江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

2010年春季,在我国东部省份主要养鸭地区的鸭群中暴发了由坦布苏病毒（Tembusu Virus,TMUV）引起的疫情,主要表现为种鸭、蛋鸭采食量和产蛋率迅速下降,肉鸭拉稀、神经症状和死亡,此次疫情一直持续到2010年冬季。此后,在江苏、山东、河... 详细信息

2010年春季,在我国东部省份主要养鸭地区的鸭群中暴发了由坦布苏病毒（Tembusu Virus,TMUV）引起的疫情,主要表现为种鸭、蛋鸭采食量和产蛋率迅速下降,肉鸭拉稀、神经症状和死亡,此次疫情一直持续到2010年冬季。此后,在江苏、山东、河南等地多次出现鸭坦布苏病毒病的流行,目前该病仍在不断发生,给我国养鸭业造成了巨大经济损失。据不完全统计,鸭坦布苏病毒病仅2010年造成的经济损失就达数十亿元。但是TMUV对鸭的致病机理和传播特性仍不清楚。为此,我们以21日龄樱桃谷鸭为动物模型,对TMUV（JS804株）的致病性和传播特性进行了研究。结果显示,通过滴鼻途经攻毒(10ELD/只),病毒JS804可以引起鸭的发病;攻毒后第3天攻毒鸭均表现出采食下降,拉绿色水样粪便和精神不振等症状;随着时间的推移,有些攻毒鸭还表现出步态不稳和鼻液增多等症状;而在攻毒后第9天发病鸭逐渐恢复正常,但是偶尔还会出现拉绿色稀粪的症状。此外,体重称量的结果显示,JS804攻毒组鸭的体重增长明显慢于对照组。增殖能力和炎性细胞因子的荧光定量RT-PCR测定结果显示,病毒JS804可以在鸭的心、肝、脾、肺、肾、脑内进行增殖,并且在心、脾、肺内的增殖能力要高于其它脏器;另外,对口腔拭子和泄殖腔拭子的测定结果显示,在攻毒后的第1天攻毒鸭就可以通过其口腔和泄殖腔向外排毒,并且至少可以持续1个月;而细胞因子的测定结果显示,在攻毒后的第3天和第5天病毒JS804可以引起鸭肺、脾、脑内的促炎性细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-8的过度应答;此外,病毒JS804在鸭肺、脑内同时也诱发了抑炎性细胞因子IL-10的过度应答,而脾内的IL-10仅仅在攻毒后第3天出现了上调表达,在攻毒后第5天又恢复至正常水平。鉴于TMUV在鸭群中的快速传播特性,我们对病毒JS804的传播途径也进行了研究。结果显示,病毒JS804可以在鸭之间进行直接触传播,这与先前的研究结果一致;此外,除了直接接触传播外病毒JS804还可以在鸭之间进行有效的粪-口传播和空气传播。因此,虽然基因系统进化树的分析结果将TMUV归属于蚊媒传播黄病毒,蚊媒传播也被认为是TMUV的一个主要传播途径,但是我们不应该忽视其它传播途径特别是粪-口途径和空气传播途径在该病毒传播过程中的作用,因为这可能与该病毒的快速传播和秋冬季节的流行有关。

关键词：坦布苏病毒测定结果鸭坦布苏病毒病传播特性

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兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌复合PCR方法的建立及临床应用

兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌复合PCR方法的建立及临床...

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中国畜牧兽医学会养兔学分会成立大会暨第一届学术交流大会

作者：范志宇魏后军胡波宋艳华王芳薛家宾徐为中苏国清江苏省农业科学院兽医研究所·农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心

本研究旨在建立检测家兔多杀性巴氏杆菌（Pm）和支气管败血波氏杆菌（Bb）的复合PCR方法。本实验室已经建立了支气管败血波氏杆菌PCR检测方法,特异性引物为P1:5'-TGAACAATGGCGTGAAAGC-3',P2:5'-TCGATAGTAGGACGGGAGGAT-3... 详细信息

本研究旨在建立检测家兔多杀性巴氏杆菌（Pm）和支气管败血波氏杆菌（Bb）的复合PCR方法。本实验室已经建立了支气管败血波氏杆菌PCR检测方法,特异性引物为P1:5'-TGAACAATGGCGTGAAAGC-3',P2:5'-TCGATAGTAGGACGGGAGGAT-3',预期扩增的DNA产物片段大小为425 bp。根据GenBank中多杀性巴氏杆菌ATP合成酶（atpB）基因的保守序列,设计一对特异性引物,P1:5'-TTCTGTTCGCTTCATCCT-3',P2:5'-CTGTTCTGTTCGCTTCATC-3',预期扩增的DNA产物片段大小为1141 bp,成功建立巴氏杆菌PCR检测方法。将两种PCR方法进行合并,对PCR反应中的Mg浓度、Taq酶浓度、DNA模板量、退火温度等进行筛选优化。反应体系:Taq DNA聚合酶0.5μL,10×PCR buffer 2.5μL,25mM MgCl2.5μL,2.5mM dNTPs2.0μL,P3、P4各1.0μL,DNA模板4.0μL,ddHO11.5μL。反应条件:94℃预热5 min;94℃变性30 s,53.9℃退火30 s,72℃复性80 s,30个循环;72℃延伸10min。经反应条件的优化,成功建立Pm、Bb复合PCR诊断方法。将Pm和Bb的DNA模板做10倍梯度稀释,连续稀释8个梯度,每个梯度取8μL模板加入复合PCR反应体系(单个反应体系含有支气管败血波氏杆菌和多杀性巴氏杆菌分别为4×10～5×10CFU)进行敏感性试验。结果显示,该方法检出的最小Pm和Bb菌数分别为40CFU和4CFU。对兔源产气荚膜梭菌、大肠杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、猪鼻支原体、链球菌的检测结果均为阴性,说明该方法具有良好的特异性。用建立的方法对2012年度至2014上半年在江苏、浙江、安徽及广东四省采集的临床鼻拭子样本共712份进行检测。结果显示,Pm阳性率为25.56%,Bb阳性率为34.55%,双阳性率为13.20%;各年度、各地区、不同品种的鼻拭子样品均能检测到支气管败血波氏杆菌和多杀性巴氏杆菌。肉兔品种的阳性率显著低于獭兔和毛兔,可能由于獭兔和毛兔比肉兔的饲养周期长有关;对南京市某兔场不同月份呼吸道鼻拭子样本检测。结果显示,在天气状况较好的4、10、11月（春秋季）和天气较热的6、7月（夏季）,Bb阳性率分别为31.21%和25.61%,Pm阳性率分别为21.47%和22.56%,Pm的检出率没有明显变化。而Bb检出率有明显差别,春秋季明显高于夏季。不同场次的临床样品检测显示,Bb的阳性率均明显高于Pm,有的阳性率甚至达到50%,可能是由于多杀性巴氏杆菌有疫苗可以用于免疫,而波氏杆菌暂时没有疫苗提供。综上结果显示,该复合PCR方法能快速、敏感地从家兔鼻拭子样品中检出Pm和Bb,为临床疾病检测和流行病学调查提供技术保障。

关键词：兔支气管败血波氏杆菌多杀性巴氏杆菌复合PCR

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Breeding of Mycoplasmal pneumonia-negative Swine Population Using Combination Therapy,Segregated Early Weaning(SEW) and Three-point Production System

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Agricultural Science & Technology 2015年第5期16卷 991-996页

作者：甘源华利忠冯志新熊祺琰刘茂军杜改梅马庆红王爱全韦艳娜姜平邵国青江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 金陵科技学院江苏南京210038 江苏省农业科学院六合动物科学基地江苏南京211501

In order to explore a breeding method for mycoplasmal pneumonia-negative swine population, the purifying effects of combination therapy, SEW and three-point breeding and management system on Mycoplasma hyopneumoniae were investigated in this study. After the processes of screening pregnant sows, programmed therapy for sows, SEW, three-point breeding and management in the barrier isolation system and programmed therapy for piglets, the newly-bred piglets were monitored as long as four months by serum antibody detection of Mycoplasma hyopneumoniae and fluorescent quantitative PCR of nose swabs. The results showed that when the newlybred five batches of piglets were older than 35 d, they were all negative by serum antibody detection and nose swab antigen detection. Therefore, the combination therapy, SEW and three-point production and management system can effectively purify Mycoplasma hyopneumoniae, providing theoretical basis and clinical experience for the control and purification of domestic mycoplasmal pneumonia.

关键词： SEW Early weaning Barrier system Three-point breeding and management system Drug purification Biosafety

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传染性法氏囊病病毒VP3基因在昆虫细胞中的表达及其ELISA抗原反应性分析

传染性法氏囊病病毒VP3基因在昆虫细胞中的表达及其ELISA抗原反应...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：刘华洁王永山杜希宁梅永杰王晓丽欧阳伟毕振威潘群兴姚火春江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院南京师范大学生命科学学院

为分析传染性法氏囊病病毒(IBDV)重组VP3蛋白的ELISA抗原反应性,将IBDV vp23基因插入杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHTA中,构建重组供体质粒pFastBacHTA-vp3并转化*** DH10Bac感受态细菌,经抗性筛选获得重组杆状病毒表达质粒pBac-vp... 详细信息

为分析传染性法氏囊病病毒(IBDV)重组VP3蛋白的ELISA抗原反应性,将IBDV vp23基因插入杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHTA中,构建重组供体质粒pFastBacHTA-vp3并转化*** DH10Bac感受态细菌,经抗性筛选获得重组杆状病毒表达质粒pBac-vp3。用pBac-vp3转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒vBac-vp3。对重组杆状病毒感染的Sf9细胞,用Weatern blot检测,在33ku处存在一条特异的蛋白条带;用间接免疫荧光(IFA)检测可见特异性荧光。以纯化的重组VP3蛋白为包被抗原建立IBDV抗体间接ELISA检测方法(VP3-ELISA),并与重组VP2蛋白包被抗原建立的VP2-ELISA和全病毒抗原ELISA(IDEXX-ELISA)比较,对42份不同鸡血清中的IBDV抗体进行检测,VP3-ELISA对阴阳性血清的区分度低于VP2-ELISA和IDEXX-ELISA;VP3-ELISA阳性检出率低于VP2-ELISA和IDEXX-ELISA;VP3-ELISA与IDEXX-ELISA的相关系数低于VP2-ELISA与IDEXX-ELISA的相关系数。本研究结果表明,在昆虫细胞中表达的重组VP3蛋白具有良好的特异性和抗原反应性,其ELISA抗原反应性弱于重组VP2蛋白和IBDV全病毒抗原。

关键词：传染性法氏囊病病毒(IBDV) VP3蛋白杆状病毒 ELISA

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生态健康养殖畜禽产品质量安全的经济学问题研究

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农业灾害研究 2015年第1期5卷 49-54,60页

作者：陆昌华胡肄农甘泉孙友珍谭业平郁达威臧一天刘亮田景福储新民江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 江苏省福润肉类加工有限公司江苏连云港222000 雨润控股集团有限公司江苏南京210041 江苏师范大学商学院江苏徐州221000

为保障畜禽产品有效供给和公共卫生安全,以稳步提升我国动物卫生安全水平为目标,文章采用动物卫生经济学思路,认为我国畜禽养殖的多元化经营存在着与规模经济理论相悖的情况。在描述和分析动物疫病及其畜禽产品供应链上质量安全监管机... 详细信息

为保障畜禽产品有效供给和公共卫生安全,以稳步提升我国动物卫生安全水平为目标,文章采用动物卫生经济学思路,认为我国畜禽养殖的多元化经营存在着与规模经济理论相悖的情况。在描述和分析动物疫病及其畜禽产品供应链上质量安全监管机制的同时,阐述国外畜禽产品质量安全研究概况。针对国内畜禽养殖业发展阶段与管理现状,指出我国畜禽安全管理的最薄弱环节是生产阶段。我国面临着对安全、优质畜禽产品市场及出口需求与众多分散、无组织的小规模家庭生产矛盾。探讨生态健康养殖畜禽产品质量安全的经济学问题,剖析了影响畜禽产品销售利润的因素。结合某养猪场的案例,从兽医角度与经济角度2个方面考虑,对疫病防控做成本—收益实证分析。最后提出解决畜禽及其产品质量安全问题的建议。

关键词：动物卫生经济学健康养殖畜禽产品质量安全管理

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不同毒力猪肺炎支原体侵入宿主细胞的观察

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畜牧兽医学报 2014年第6期45卷 981-988页

作者：车巧林刘蓓蓓刘茂军熊祺琰邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

旨在研究不同毒力猪肺炎支原体对宿主细胞的侵入以及侵入后在宿主细胞内的分布位置。首先用猪肺炎支原体野毒株XLW-1感染PK15细胞不同时间后,间接免疫荧光染色,激光扫描共聚焦显微镜对PK15细胞进行断层扫描,以观察XLW-1能否侵入细胞以... 详细信息

旨在研究不同毒力猪肺炎支原体对宿主细胞的侵入以及侵入后在宿主细胞内的分布位置。首先用猪肺炎支原体野毒株XLW-1感染PK15细胞不同时间后,间接免疫荧光染色,激光扫描共聚焦显微镜对PK15细胞进行断层扫描,以观察XLW-1能否侵入细胞以及感染时间对XLW-1侵入细胞的影响。然后,在能侵入细胞的基础上,用不同毒力的猪肺炎支原体感染宿主细胞STEC、PK15、SJPL和3D4/21,观察它们对宿主细胞的侵入情况。结果表明,猪肺炎支原体野毒株XLW-1与PK15细胞作用8h时不能侵入PK15,作用10h以上时可以侵入PK15,并且随着作用时间的延长侵入的猪肺炎支原体也在增加。研究还表明猪肺炎支原体野毒株XLW-1、168致弱株和168疫苗株均能侵入STEC、PK15、SJPL和3D4/21。并且,STEC中3个菌株均随机分布在细胞质中;PK15中3个菌株均主要分布在靠近细胞膜和细胞两端狭长的细胞质中;SJPL中XLW-1和168疫苗株主要分布在贴近细胞膜内侧的细胞质中,168致弱株则散布在细胞质中;3D4/21中XLW-1和168致弱株主要分布在贴近细胞膜内侧的细胞质中,168疫苗株则在整个细胞质中分布较多。结果提示不同毒力的猪肺炎支原体均能侵入宿主细胞STEC、PK15、SJPL和3D4/21。

关键词：猪肺炎支原体不同毒力宿主细胞侵入

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通用引物检测志贺毒素和紧密素多个基因亚型

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中国人兽共患病学报 2014年第6期30卷 607-611,617页

作者：张雪寒汪伟何孔旺倪艳秀温立斌李彬王小敏周俊明江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

目的旨在建立同时检测stx2和intimin两个基因多个变型的双重PCR快速检测技术，更好满足实验室和临床检测的需求。方法以stx2主要的6个亚型和intimin主要的27个基因亚型为靶序列，设计引物，建立双重PCR方法，分析其敏感性、特异性，并... 详细信息

目的旨在建立同时检测stx2和intimin两个基因多个变型的双重PCR快速检测技术，更好满足实验室和临床检测的需求。方法以stx2主要的6个亚型和intimin主要的27个基因亚型为靶序列，设计引物，建立双重PCR方法，分析其敏感性、特异性，并检测模拟制备的阳性样品。结果stx2-intimin双重PCR扩增片段分别为388bp和609bp，检测大肠杆菌纯培养物最低限介于10～100cFu／mL，增菌样品最低检测限介于1～10CFU／g，特异性检测intimin和stx2的多个亚型。结论Stx2-Intimin二重PCR技术灵敏、特异、通用和高效。

关键词：大肠杆菌致病群志贺毒素紧密素变异型 PCR

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