检索结果-内蒙古大学图书馆

江苏农业科学 2019年第9期47卷 204-207页

作者：赵冬敏吴青赵翰飞刘青涛杨婧黄欣梅刘宇卓韩凯凯毕可然李银江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心

根据GenBank中H5、H7、H9亚型禽流感病毒血凝素蛋白(HA)编码基因,使用DNAStar软件比较分析筛选出特异的保守片段,设计3对引物H5-P1/H5-P2、H7-P3/P4和H9-P5/P6。在此基础上,建立了H5、H7、H9亚型禽流感的三重RT-PCR检测方法,本方法可同... 详细信息

根据GenBank中H5、H7、H9亚型禽流感病毒血凝素蛋白(HA)编码基因,使用DNAStar软件比较分析筛选出特异的保守片段,设计3对引物H5-P1/H5-P2、H7-P3/P4和H9-P5/P6。在此基础上,建立了H5、H7、H9亚型禽流感的三重RT-PCR检测方法,本方法可同时检测出样品中的H5、H7、H9亚型禽流感病毒。敏感性试验结果表明,该方法检测H5、H7、H9亚型禽流感RNA的敏感性分别达2.80、10.50、5.73pg/μL,该方法检测其他相关病毒时均为阴性,具有很高的特异性,此外,该方法具有良好的重复性。利用所建立方法对240份禽流感临床样品进行检测,结果与血凝试验和血凝抑制试验结果的符合率为100%。此诊断方法检出时间早,且特异、敏感、经济、快速,可普遍推广,在禽流感诊断和防制中具有重要意义和应用价值。

关键词：禽流感病毒 H5亚型 H7亚型 H9亚型三重RT-PCR

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新型鹅星状病毒AHQJ18株的分离鉴定

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江苏农业学报 2019年第5期35卷 1262-1264页

作者：章丽娇黄欣梅刘飞刘青涛韩凯凯赵冬敏杨婧刘宇卓李银江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 山东鲁抗舍里乐药业有限公司山东济宁272000

星状病毒于1975年在肠炎患儿的粪便样品中被首次发现[1],随着时间的推移和检测技术的不断进步,星状病毒的种类、宿主及流行范围相继扩大。目前,星状病毒在全世界不同地区不同种类哺乳动物中的感染非常普遍,并且还能感染各种禽类[2]。星... 详细信息

星状病毒于1975年在肠炎患儿的粪便样品中被首次发现[1],随着时间的推移和检测技术的不断进步,星状病毒的种类、宿主及流行范围相继扩大。目前,星状病毒在全世界不同地区不同种类哺乳动物中的感染非常普遍,并且还能感染各种禽类[2]。星状病毒主要引起感染哺乳动物的肠道疾病,对于感染的禽类,除肠道炎症外,还可引发鸡肾脏疾病,雏鸭的病毒性肝炎等[3-5]。星状病毒为无囊膜的单股正链RNA病毒,基因组变异较大,全长约6.1~7.9 kb,包括5′UTR,3个开放性阅读框(ORF1a、ORF1b和ORF2),3′UTR及多聚腺苷酸(PolyA)尾,不同种星状病毒之间存在基因重组现象。星状病毒基因组的高度变异使其对环境和宿主具有很强的适应能力,甚至可跨种传播,是威胁人类健康和动物养殖业的重要传染病原之一。

关键词：痛风新型鹅星状病毒分离鉴定

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传染性法氏囊病病毒VP2结构蛋白抗体ELISA检测方法的建立

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中国兽医学报 2018年第10期38卷 1864-1871页

作者：王晓丽王永山欧阳伟夏兴霞潘群兴毕振威诸玉梅江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心

为建立敏感、特异、稳定的传染性法氏囊病病毒（IBDV）VP2结构蛋白抗体ELISA检测方法,本试验以杆状病毒表达系统表达的重组IBDV-VP2结构蛋白为抗原,通过包被VP2单克隆抗体捕捉VP2结构蛋白的形式,建立鸡血清VP2结构蛋白抗体ELISA检测方法... 详细信息

为建立敏感、特异、稳定的传染性法氏囊病病毒（IBDV）VP2结构蛋白抗体ELISA检测方法,本试验以杆状病毒表达系统表达的重组IBDV-VP2结构蛋白为抗原,通过包被VP2单克隆抗体捕捉VP2结构蛋白的形式,建立鸡血清VP2结构蛋白抗体ELISA检测方法（VP2-ELISA）。条件优化结果显示：单克隆抗体最适包被质量浓度为3mg/L,VP2最佳稀释度为1∶20,夹心ELISA效价1∶12.8,被捡血清的稀释度为1∶400。该方法与禽流感、鸡新城疫、鸡马立克氏病、鸡传染性喉气管炎病毒及杆状病毒阳性血清无交叉反应,对琼扩效价为1∶32的IBDV阳性血清的最低检出量为1∶12 800,ROC曲线确定的D450nm临界值为0.236,组内、组间重复性试验变异系数均小于10%。用本试验建立的VP2-ELISA方法与进口IBDV-ELISA抗体试剂盒平行检测100份背景已知的临床鸡血清样品,总符合率VP2-ELISA（97%）高于进口ELISA试剂盒（96%）。本试验为进一步研制鸡传染性法氏囊病病毒VP2结构蛋白抗体ELISA检测试剂盒奠定基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒 VP2 单克隆抗体 ELISA

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巴氏杆菌利用宿主分子Plg致病的初步研究

巴氏杆菌利用宿主分子Plg致病的初步研究

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第九届(2019)中国兔业发展大会

作者：朱伟峰陈露魏后军仇汝龙范志宇胡波陈萌萌徐为中薛家宾王芳江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

巴氏杆菌是造成兔巴氏杆菌病的病原,其中以多杀性巴氏杆菌危害最大。一些致病菌能够利用宿主血浆纤维蛋白溶解酶原(Plasminogen,Plg)穿过组织屏障进行迁移或逃避宿主的先天免疫。然而目前还没有关于巴氏杆菌利用宿主Plg致病的研究。本... 详细信息

巴氏杆菌是造成兔巴氏杆菌病的病原,其中以多杀性巴氏杆菌危害最大。一些致病菌能够利用宿主血浆纤维蛋白溶解酶原(Plasminogen,Plg)穿过组织屏障进行迁移或逃避宿主的先天免疫。然而目前还没有关于巴氏杆菌利用宿主Plg致病的研究。本研究采用ELISA法检测了3株兔源多杀性巴氏杆菌对Plg的结合活性,并对菌体结合的Plg的活性进行了检测;原核表达了多杀性巴氏杆菌GAPDH,并通过Far Western blot检测其结合Plg的活性;通过ELISA检测了GAPDH多克隆抗体对多杀性巴氏杆菌结合Plg的抑制作用。实验结果表明,多杀性巴氏杆菌能结合Plg,该Plg可表现酶活性;巴氏杆菌的GAPDH分子能够结合Plg;GAPDH抗体能显著降低多杀性巴氏杆菌结合Plg的活性。因此,多杀性巴氏杆菌能够通过GAPDH利用宿主Plg进而促进兔巴氏杆菌病的发生。

关键词：多杀性巴氏杆菌巴氏杆菌病血浆纤维蛋白溶解酶原(Plg) 甘油醛3-磷酸脱氢酶(GAPDH)

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兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗临床免疫效力试验

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中国兽医杂志 2019年第7期55卷 30-33,I0003,I0004页

作者：范志宇王芳胡波魏后军薛家宾姜平南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了评估兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗在临床使用中的保护效力,试验选择3批次中试产品,分别在6家临床试验兔场对不同品种、不同日龄家兔进行免疫效力评价。结果显示,6家临床试验兔场试验期间均没有发生兔出血症;免疫持续期攻毒试... 详细信息

为了评估兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗在临床使用中的保护效力,试验选择3批次中试产品,分别在6家临床试验兔场对不同品种、不同日龄家兔进行免疫效力评价。结果显示,6家临床试验兔场试验期间均没有发生兔出血症;免疫持续期攻毒试验结果显示,疫苗对肉兔、獭兔、毛兔免疫期均可以达到7个月。结果表明,兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗(BAC-VP60株)临床效力检验合格,免疫期为7个月。

关键词：兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗效力检验免疫期

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多杀性巴氏杆菌利用宿主血浆纤维蛋白溶解酶原的致病作用研究

多杀性巴氏杆菌利用宿主血浆纤维蛋白溶解酶原的致病作用研究

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江苏省畜牧兽医学会首届“青年科技论坛”

作者：朱伟峰陈露魏后军仇汝龙范志宇胡波陈萌萌徐为中薛家宾王芳江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

多杀菌巴氏杆菌是多种动物疾病(巴氏杆菌病)的病原,也是人畜共患病病原.一些致病菌能够利用宿主血浆纤维蛋白溶解酶原(Plasminogen,Plg)穿过组织屏障进行迁移或逃避宿主的先天免疫,然而目前还没有关于多杀性巴氏杆菌利用宿主Plg 的研究... 详细信息

多杀菌巴氏杆菌是多种动物疾病(巴氏杆菌病)的病原,也是人畜共患病病原.一些致病菌能够利用宿主血浆纤维蛋白溶解酶原(Plasminogen,Plg)穿过组织屏障进行迁移或逃避宿主的先天免疫,然而目前还没有关于多杀性巴氏杆菌利用宿主Plg 的研究.据报道,甘油醛3-磷酸脱氢酶(GAPDH)是多种致病菌的Plg 受体,但其在多杀性巴氏杆菌利用Plg 过程中的作用还不清楚.本研究的目的是检测多杀性巴氏杆菌利用宿主Plg 的活性,并评估GAPDH 在这一过程中作为受体的能力.本研究采用ELISA 法检测了3 株多杀性巴氏杆菌的Plg 结合活性,并对多杀性巴氏杆菌菌体的Plg 进行了激活和活性检测.本研究重组表达了多杀性巴氏杆菌GAPDH,并通过Far Western blot检测其对结合Plg 的活性.最后通过ELISA 检测GAPDH 多克隆抗体对多杀性巴氏杆菌的Plg 结合活性的抑制作用.我们的实验中多杀性巴氏杆菌菌株表现出显着的宿主Plg 结合活性,所结合的Plg 在尿激酶刺激下表现出血浆纤维蛋白溶解酶活性.我们成功表达了重组GAPDH 并证实其对Plg 的结合活性.GAPDH 抗体显着降低多杀性巴氏杆菌的Plg 招募活性.综上所述,多杀性巴氏杆菌能够通过GAPDH 利用宿主Plg.据我们所知,这是首次对多杀性巴氏杆菌利用宿主Plg 的报道.

关键词：甘油醛3-磷酸脱氢酶多杀性巴氏杆菌巴氏杆菌病血浆纤维蛋白溶解酶原

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猪乙型脑炎病毒SYBR-GreenⅠ实时荧光定量PCR方法的建立

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江苏农业科学 2020年第18期48卷 81-85页

作者：常晨张道华唐波刘国阳华涛王海燕江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心/江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地江苏南京210095 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为建立猪乙型脑炎病毒(JEV)的定量检测方法,根据E基因序列,设计1对特异性引物,建立检测JEV的荧光定量PCR方法。结果显示,该方法灵敏度达到103拷贝/μL,对猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病毒(PRV)均无... 详细信息

为建立猪乙型脑炎病毒(JEV)的定量检测方法,根据E基因序列,设计1对特异性引物,建立检测JEV的荧光定量PCR方法。结果显示,该方法灵敏度达到103拷贝/μL,对猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病毒(PRV)均无交叉反应,具有良好的特异性和重复性;采用JEV攻毒小鼠,荧光定量PCR比普通PCR更能灵敏地检出组织带毒量。该方法可用于组织样品中乙脑病毒的定量检测以及临床乙脑病毒感染的早期检测和定量分析猪乙脑病毒感染程度。

关键词：猪乙脑病病毒 SYBR-GreenⅠ 荧光定量PCR 检测

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乙型脑炎病毒感染猪睾丸细胞的miRNA表达谱差异分析

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南京农业大学学报 2019年第4期42卷 734-739页

作者：张元鹏杨占娜杨利李兰于晓明杜露平陈瑾侯立婷乔绪稳侯继波郑其升江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京市栖霞区动物卫生监督所江苏南京210046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 江苏省食品质量安全重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地江苏南京210014

[目的]本试验旨在分析乙型脑炎病毒(JEV)感染猪睾丸(ST)细胞和正常ST细胞miRNA差异表达谱,以探索miRNA在JEV感染过程中的作用及其调控机制。[方法]分别提取正常ST细胞和JEV感染8h后的ST细胞总RNA,利用高通量测序技术检测分析ST细胞中的m... 详细信息

[目的]本试验旨在分析乙型脑炎病毒(JEV)感染猪睾丸(ST)细胞和正常ST细胞miRNA差异表达谱,以探索miRNA在JEV感染过程中的作用及其调控机制。[方法]分别提取正常ST细胞和JEV感染8h后的ST细胞总RNA,利用高通量测序技术检测分析ST细胞中的miRNA表达谱并进行差异分析。使用miRanda软件对表达差异显著miRNA的靶基因进行预测并对靶基因进行GO分析。选取6个显著性差异表达的miRNA通过RT-qPCR进行验证。[结果]与正常ST细胞相比,JEV感染后的ST细胞有112个差异表达miRNA,其中80个miRNA上调表达,32个miRNA下调表达。经RT-qPCR方法验证6个差异表达的miRNA结果与高通量测序结果一致。差异表达miRNA靶基因的生物学功能相对集中在细胞代谢、细胞黏附等生物过程。[结论]检测和分析JEV感染后猪睾丸细胞的miRNA表达谱,获得了大量的与JEV感染相关的miRNA表达谱数据,为揭示JEV感染生殖系统致病机制提供了有效的数据和理论基础。

关键词：乙型脑炎病毒猪睾丸细胞 miRNA 高通量测序

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通用型H5亚型禽流感病毒亚单位疫苗抗原表达和免疫效力研究

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病毒学报 2019年第6期35卷 864-872页

作者：张雪花陆吉虎华涛卢宇侯继波梅梅江苏省农业科学院动物免疫工程研究所南京 210014 江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心南京 210014 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州 225009 江苏省食品质量安全重点实验室‐省部共建国家重点实验室培育基地南京 210014 教育部禽类预防医学重点实验室江苏省动物预防医学重点实验室扬州大学兽医院扬州 225009

H5亚型高致病性禽流感病毒因其变异快、感染性和致病性强等特点严重威胁着家禽业和人类健康。为研制具有广谱保护性的H5亚型禽流感病毒通用型亚单位疫苗,本研究分析和对比各分支H5亚型禽流感病毒的HA蛋白基因,获得HA蛋白基因共有序列,... 详细信息

H5亚型高致病性禽流感病毒因其变异快、感染性和致病性强等特点严重威胁着家禽业和人类健康。为研制具有广谱保护性的H5亚型禽流感病毒通用型亚单位疫苗,本研究分析和对比各分支H5亚型禽流感病毒的HA蛋白基因,获得HA蛋白基因共有序列,采用杆状病毒表达系统构建和表达重组HA蛋白。经IFA、Western Blot、微量血凝试验等方法鉴定重组HA蛋白,结果显示重组HA蛋白在昆虫细胞中得到正确表达,血凝效价达13log2,且与禽流感Re6、Re7和Re8阳性血清均具有较好的交叉反应活性。免疫效力试验结果显示,重组HA蛋白疫苗组血清抗体能与H5亚型禽流感病毒Re6、Re7和Re8检测抗原反应,且能诱导机体产生较高水平IFN-γ和IL-4。该研究结果可为H5亚型禽流感通用型亚单位疫苗研发提供试验基础和科学依据。

关键词： H5亚型禽流感病毒亚单位疫苗抗原表达免疫效力

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猪瘟耐热活疫苗节能冻干曲线的优化研究

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江苏农业科学 2020年第5期48卷 156-161页

作者：左晓昕赵艳红邓碧华牟和平胡来根宋伟吕芳卢宇侯继波江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 成都天邦生物制品有限公司四川成都610100 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地江苏扬州225009 江苏大学药学院江苏镇江212013

猪瘟疫苗真空冷冻干燥工艺,可减少冻干对制品活性的影响,降低制品冻干过程的耗能,缩短冻干周期,故研制安全、耐热、节能的猪瘟减毒冻干疫苗极为重要。选用甘露醇、甘氨酸等成分设计猪瘟耐热保护剂配方,通过间接免疫荧光法比较制品在37℃... 详细信息

猪瘟疫苗真空冷冻干燥工艺,可减少冻干对制品活性的影响,降低制品冻干过程的耗能,缩短冻干周期,故研制安全、耐热、节能的猪瘟减毒冻干疫苗极为重要。选用甘露醇、甘氨酸等成分设计猪瘟耐热保护剂配方,通过间接免疫荧光法比较制品在37℃、10 d的冻干和耐热损失,并用兔体热反应法复核。检测优化配方的共晶点和塌陷温度设计冻干程序,比较不同预冻方式对猪瘟耐热疫苗冻干的影响,调整冻干周期。猪瘟耐热保护剂配方A-4的冻干和耐热损失最小,分别为0.30 lg和0.45 lg。根据制品的共晶点-27.51℃,对预冻方式筛选,发现快冻冻干和耐热损失最小,分别为0.17 lg和0.38 lg,根据塌陷温度-24.3℃,成功将冻干曲线缩短至24 h。调整后的配方可使猪瘟活苗在37℃保存15 d、45℃保存7 d;内毒素和动物试验表明该疫苗安全、无副反应。上述结果表明,试验成功筛选出猪瘟耐热保护剂配方A-4,在保证疫苗质量的前提下优化冻干曲线,调整后的保护剂配方保证疫苗耐热性能,安全无副反应。

关键词：猪瘟病毒耐热保护剂配方冻干工艺耐热性能安全性

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