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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：黄欣梅李银赵冬敏刘宇卓张敬峰韩凯凯钮慧敏江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

禽黄病毒是新发现的一种可引起家禽产蛋和采食量下降及死亡的黄病毒属病毒。本研究选取鹅黄病毒囊膜蛋白(E蛋白)基因进行克隆、表达和纯化,以获得能应用于血清学诊断和可作为亚单位疫苗的重组蛋白。根据鹅黄病毒JS804株全基因序列设计... 详细信息

禽黄病毒是新发现的一种可引起家禽产蛋和采食量下降及死亡的黄病毒属病毒。本研究选取鹅黄病毒囊膜蛋白(E蛋白)基因进行克隆、表达和纯化,以获得能应用于血清学诊断和可作为亚单位疫苗的重组蛋白。根据鹅黄病毒JS804株全基因序列设计了一对引物,采用RT-PCR方法扩增出了鹅黄病毒的E基因,将其克隆到表达载体pET32a(+)中,构建了重组表达质粒pET32a-E,转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG进行诱导表达。结果表明,鹅黄病毒E基因在大肠杆菌中获得高效表达,融合蛋白分子量约为70kDa,主要以包涵体形式存在于菌体中。WesternBlot和间接免疫荧光试验发现,重组E蛋白具有良好的反应原性和免疫原性。鹅黄病毒E蛋白的原核表达为进一步研究该蛋白功能、建立血清学检测方法及研制亚单位疫苗奠定了基础。

关键词：重组蛋白原核表达全基因序列间接免疫荧光试验大肠杆菌亚单位疫苗禽黄病毒重组表达质粒包涵体黄病毒属病毒反应原性抗组氨酸抗体囊膜蛋白免疫原性重组质粒产蛋下降

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口服O157:H7(△hly△stx△toxB)能够减少O157:H7在山羊体内的定殖

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华北农学报 2012年第3期27卷 123-125页

作者：张雪寒何孔旺俞正玉茅爱华江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了明确O157:H7(△hly △stx△toxB)口服能否减少亲本株O157:H7在山羊体内的定殖.选用3月龄山羊,首先口服接种O157:H7(△hly△stx△toxB),分别于第7,14天再次口服接种亲本株O157:H7,监测亲本株O157:H7的排菌持续时间和排菌量.结果表明:... 详细信息

为了明确O157:H7(△hly △stx△toxB)口服能否减少亲本株O157:H7在山羊体内的定殖.选用3月龄山羊,首先口服接种O157:H7(△hly△stx△toxB),分别于第7,14天再次口服接种亲本株O157:H7,监测亲本株O157:H7的排菌持续时间和排菌量.结果表明:O157:H7(△hly △stx△toxB)口服后第7天攻击亲本株O157:H7,第4天检测不到亲本株O157:H7的排菌;第14天攻击亲本株O157:H7,第9天检测不到亲本株O157:H7的排菌.直接口服亲本株O157:H7,排菌一直持续到第25天.口服O157:H7(△hly △stx△toxB)能够减少O157:H7在山羊体内的定殖,为研制EHEC O157:H7基因缺失疫苗奠定了基础.

关键词： O157:H7(△hly△stx△toxB) 山羊排菌

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猪肺炎支原体显色原位杂交研究方法的建立

猪肺炎支原体显色原位杂交研究方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：王占伟熊祺琰冯志新刘茂军白方方邵国青江苏省农业科学院兽医研究所·农业部兽用生物制品工程技术重点实验室／国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏南京 210014

为建立猪肺炎支原体(Mhp)显色原位杂交(CISH)定位检测方法，为本研究利用地高辛标记的MhpP36核酸探针和DAB／H2O2显色系统，对人工感染组、自然感染组和健康对照组的实验猪肺样品和临床样品进行显色原位杂交检测。结果显示，设计的地高... 详细信息

为建立猪肺炎支原体(Mhp)显色原位杂交(CISH)定位检测方法，为本研究利用地高辛标记的MhpP36核酸探针和DAB／H2O2显色系统，对人工感染组、自然感染组和健康对照组的实验猪肺样品和临床样品进行显色原位杂交检测。结果显示，设计的地高辛标记探针针对Mhp具有特异性，而与其他的猪病原菌无交叉反应;检测结果可以通过显微镜观测到Mhp定位在支气管／细支气管黏膜表面。此外，人工感染组、自然感染组和健康对照组的CISH结果与PcR检测结果一致，临床样品的CISH检测结果低于户CR检测结果。本研究建立的Mhp显色原位杂交法是一种集直观和敏感为一体的检测方法，可以用于Mhp的定位检测和致病机理研究。

关键词：猪肺炎支原体显色原位杂交法定位检测致病机理

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猪肺炎支原体和猪鼻支原体双重PCR检测方法的建立与应用

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中国兽药杂志 2012年第9期46卷 7-10页

作者：刘茂军王占伟韦艳娜马庆红杨莉莉周勇岐邵国青江苏省农业科学院兽医研究所.农业部兽用生物制品工程技术重点实验室.国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京天邦生物科技有限公司南京211102

根据猪肺炎支原体(Mhp)和猪鼻支原体(Mhr)的16S rRNA基因设计3条引物,建立Mhp和Mhr的双重PCR检测方法,并对该方法进行了特异性和敏感性试验。应用建立的方法检测了临床样品和疫苗样品。结果显示,该方法具有良好的特异性,最低可检测到0.6... 详细信息

根据猪肺炎支原体(Mhp)和猪鼻支原体(Mhr)的16S rRNA基因设计3条引物,建立Mhp和Mhr的双重PCR检测方法,并对该方法进行了特异性和敏感性试验。应用建立的方法检测了临床样品和疫苗样品。结果显示,该方法具有良好的特异性,最低可检测到0.66 ng的Mhp基因组DNA和0.58 ng Mhr基因组DNA。临床样品和疫苗样品检测结果与普通PCR检测结果一致。该双重PCR方法可用于Mhp与Mhr的鉴别、诊断以及疫苗纯粹性检查,快速而准确。

关键词：猪肺炎支原体猪鼻支原体 PCR 检测

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以疫苗免疫为核心的猪气喘病控制与净化技术

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中国兽药杂志 2012年第7期46卷 50-53页

作者：华利忠邵国青周勇岐江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京天邦生物科技有限公司南京211102

猪气喘病的控制和净化已成为养猪产业急需解决的难题,本文简述了国外的研究动态,提出控制和净化技术须从种猪、环境、疫苗和药物四个层次依次着手,介绍了常用的药物组合和用药策略,肯定了灭活疫苗的明显效果,报告了活疫苗(168株)在突破... 详细信息

猪气喘病的控制和净化已成为养猪产业急需解决的难题,本文简述了国外的研究动态,提出控制和净化技术须从种猪、环境、疫苗和药物四个层次依次着手,介绍了常用的药物组合和用药策略,肯定了灭活疫苗的明显效果,报告了活疫苗(168株)在突破母源抗体,占位效应和刺激粘膜免疫和细胞免疫的显著作用,提出我国从龙头企业核心种猪场实施净化猪气喘病的可行思路,并提出具体的建议措施。

关键词：猪气喘病疫苗免疫净化

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禽黄病毒套式RT-PCR检测方法的建立及应用

禽黄病毒套式RT-PCR检测方法的建立及应用

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第六届南京农业大学畜牧兽医学术年会——猪禽疫病综合防控研讨会

作者：黄欣梅赵冬敏刘宇卓张敬峰韩凯凯李银江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

禽黄病毒病是新发的可引起鸭、鹅和鸡等家禽产蛋和采食量下降及死亡的一种疫病。本研究旨在建立一种快速诊断方法用于临床诊断及流行病学调查。根据GenBank发表的鹅黄病毒JS804株全基因序列,应用Ptamer Premier 5.0软件设计了2对特异性... 详细信息

禽黄病毒病是新发的可引起鸭、鹅和鸡等家禽产蛋和采食量下降及死亡的一种疫病。本研究旨在建立一种快速诊断方法用于临床诊断及流行病学调查。根据GenBank发表的鹅黄病毒JS804株全基因序列,应用Ptamer Premier 5.0软件设计了2对特异性引物,建立了禽黄病毒套式RT-PCR检测方法。结果：该套式RT-PCR方法具有特异性强,敏感性高的特点,最低病毒检测量为101.89TCID50/0.1 mL,比普通RT-PCR方法敏感性高1000倍。应用该方法对江苏地区疑似禽黄病毒病的70份鹅病料、4份鸭病料、12份鸡病料进行检测,总阳性率为58.14%,而用普通RT-PCR方法检测的阳性率仅为17.44%。结果表明,禽黄病毒套式RT-PCR检测方法具有快速、特异、敏感的特点,可用于禽黄病毒感染的临床诊断和流行病学调查。

关键词：禽黄病毒基因序列套式RT-PCR检测临床应用

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猪支原体肺炎疫苗的免疫原理及应用效果概述

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中国兽药杂志 2012年第8期46卷 58-61页

作者：华利忠冯志新刘茂军熊祺琰甘源张小飞邵国青江苏省农业科学院兽医研究所.农业部兽用生物制品工程技术重点实验室.国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京天邦生物科技有限公司南京211102

猪支原体肺炎灭活疫苗和弱毒活疫苗的临床应用均有很好的效果。简述了猪支原体肺炎灭活疫苗以体液免疫为主、弱毒活疫苗以细胞免疫和粘膜免疫为主的不同免疫学特性,分析认为占位效应可能是猪支原体肺炎弱毒活疫苗独特的免疫原理之一,提... 详细信息

猪支原体肺炎灭活疫苗和弱毒活疫苗的临床应用均有很好的效果。简述了猪支原体肺炎灭活疫苗以体液免疫为主、弱毒活疫苗以细胞免疫和粘膜免疫为主的不同免疫学特性,分析认为占位效应可能是猪支原体肺炎弱毒活疫苗独特的免疫原理之一,提出了灭活疫苗可能的改良方向及保证弱毒疫苗高效免疫的三项措施,以期为猪支原体肺炎防控提供参考。

关键词：猪支原体肺炎灭活疫苗弱毒活疫苗应用效果

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猪支原体肺炎活疫苗(168株)的免疫效力研究

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中国兽药杂志 2012年第9期46卷 4-6,14页

作者：苏国东刘茂军周勇岐刘冬霞甘源朱晓玮毛火云邵国青江苏省农业科学院兽医研究所.农业部兽用生物制品工程技术重点实验室.国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京天邦生物科技有限公司南京211102

研究使用健康易感仔猪对3批猪支原体肺炎活疫苗(168株)分别进行了免疫效力试验、免疫期试验、临床效力试验、同类制品的免疫效力比较试验和免疫期比较试验,以及5批疫苗免疫商品猪的临床试验。结果表明:猪支原体肺炎活疫苗(168株)免疫仔... 详细信息

研究使用健康易感仔猪对3批猪支原体肺炎活疫苗(168株)分别进行了免疫效力试验、免疫期试验、临床效力试验、同类制品的免疫效力比较试验和免疫期比较试验,以及5批疫苗免疫商品猪的临床试验。结果表明:猪支原体肺炎活疫苗(168株)免疫仔猪60 d后,免疫组有80%以上的保护率,免疫后7个月,试验组仍有50%以上的保护率;同类制品免疫效力和免疫期比较试验结果表明两种猪支原体活疫苗差异不明显。临床观察和病理剖检结果表明免疫保护率在85%以上。以上结果都说明猪支原体肺炎活疫苗(168株)具有很好的免疫效力。

关键词：猪支原体肺炎活疫苗免疫效力免疫期

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猪支原体肺炎活疫苗(168株)肺内免疫机制研究

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中国兽药杂志 2012年第8期46卷 4-7,19页

作者：冯志新刘茂军熊祺琰华利忠王海燕甘源韦艳娜苏国东邵国青江苏省农业科学院兽医研究所.农业部兽用生物制品工程技术重点实验室.国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京天邦生物科技有限公司南京211102

为研究猪支原体肺炎活疫苗(168株)的免疫机制,通过肺内接种免疫5～10日龄仔猪,并于免疫后不同时间点检测血清中IgG抗体效价、全血中淋巴细胞转化效率、呼吸道局部的IFN-γ浓度和特异性SIgA滴度,于免疫后28 d剖杀采集呼吸道上皮组织,通... 详细信息

为研究猪支原体肺炎活疫苗(168株)的免疫机制,通过肺内接种免疫5～10日龄仔猪,并于免疫后不同时间点检测血清中IgG抗体效价、全血中淋巴细胞转化效率、呼吸道局部的IFN-γ浓度和特异性SIgA滴度,于免疫后28 d剖杀采集呼吸道上皮组织,通过扫描电镜法与原位杂交检测法观察疫苗株在呼吸道的存留以及对纤毛的影响情况。结果发现,免疫后猪血液中淋巴细胞转化增强1.52～2.01倍,支气管表面IFN-γ浓度和特异性SIgA滴度持续增加,但血清抗体一直未检测到。扫描电镜与原位杂交检测结果发现疫苗株能有效地黏附在支气管纤毛上皮细胞上,但对纤毛的影响较小。由此表明,猪支原体肺炎活疫苗(168株)通过肺内免疫可有效激活全身细胞免疫及呼吸道局部的黏膜免疫与细胞免疫反应,而且还可以通过黏附支气管纤毛上皮细胞产生占位效应而对上皮组织不产生损伤。

关键词：猪支原体肺炎活疫苗肺内免疫免疫机制

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近年我国兔瘟流行特点分析与疫苗研究动态

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中国养兔 2012年第6期 32-34页

作者：范志宇胡波魏后军徐为中王芳薛家宾江苏省农业科学院兽医研究所.农业部兽用生物制品工程技术重点实验室.国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京天邦生物科技有限公司南京211102

兔瘟是由兔病毒性出血性败血症病毒引起的一种急性、高度接触性、高致死性的疾病,对养兔业的危害巨大。介绍了兔瘟流行的特点及兔瘟疫苗的研究进展,分析了兔瘟疫苗免疫失败的原因,提出了综合防治的措施。

关键词：兔瘟疫苗流行特点研究进展

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