检索结果-内蒙古大学图书馆

江苏农业科学 2019年第23期47卷 78-81页

作者：陈萌萌范志宇胡波宋艳华魏后军仇汝龙朱伟峰徐为中王芳江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心

通过家兔体内感染兔出血症病毒(RHDV)后发现体内干扰素-β(Interferon-β,IFN-β)基因表达水平明显降低。为体外研究RHDV感染宿主后IFN-β启动子的调控机制,首先以家兔肝细胞总cDNA为模板,利用PCR扩增IFN-β基因启动子区的序列,经测序... 详细信息

通过家兔体内感染兔出血症病毒(RHDV)后发现体内干扰素-β(Interferon-β,IFN-β)基因表达水平明显降低。为体外研究RHDV感染宿主后IFN-β启动子的调控机制,首先以家兔肝细胞总cDNA为模板,利用PCR扩增IFN-β基因启动子区的序列,经测序确定全长为550bp;预测软件分析,与人源IFN-β基因启动子的转录上调区域(positive regulation domain,PRD)高度同源;随后将启动子全长和一系列转录元件克隆至pGL6-Basic荧光素酶表达载体中,成功构建重组体报告基因质粒后,瞬转RK-13细胞,利用试剂盒检测荧光素酶的相对活性。结果显示,克隆的IFN-β基因启动子区和AP-1、IRF3、NF-κB和IRF7等转录元件具有显著的活性,为研究兔出血症病毒对宿主IFN-β基因的转录调控机制提供了有效的工具。

关键词：家兔兔出血症病毒 IFN-β基因启动子荧光素酶转录调控

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国内外奶牛疫病预警监测技术发展现状

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中国动物检疫 2020年第10期37卷 80-86页

作者：王丰张波周明旭马芳卢宇江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地江苏省农业科学院动物免疫工程研究所国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 金陵科技学院智能科学与控制工程学院江苏南京211100 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为了解国内外奶牛疫病预警技术及其应用现状,归纳了奶牛疾病的预警要求,分析了国内外8种疫病预警技术的发展现状及其在奶牛养殖中存在的局限性。一是兽医巡检预警技术:该技术较为成熟,但不能满足大规模养殖牛场迅速、高效预警的需求。... 详细信息

为了解国内外奶牛疫病预警技术及其应用现状,归纳了奶牛疾病的预警要求,分析了国内外8种疫病预警技术的发展现状及其在奶牛养殖中存在的局限性。一是兽医巡检预警技术:该技术较为成熟,但不能满足大规模养殖牛场迅速、高效预警的需求。二是奶样体细胞数测定技术:可初步诊断隐性乳腺炎,但需要额外细菌培养和检测确诊。三是奶牛群体改良测定技术:以监测生产性能为主,仅可预警奶牛乳腺炎及酮病。四是计步器及发情、反刍项圈预警技术:同时具备发情与反刍监测功能,但仅适用于牛群的发情与反刍监测。五是大数据挖掘技术:在数据库基础上,利用各种模型或算法预测传染病的发生和发展,但预警效率受限。六是智能化体温连续远程监测及预警技术:可预警口蹄疫等重大传染病,但无法完全替代临床诊断,不能监测病原微生物。七是基于AI和群体热成像的奶牛行为分析技术:可以监视记录奶牛行为与温度特征,锁定病畜,但对发病初期无异常行为的牛只无效。八是生物气溶胶激光光谱测量技术:通过检测病原微生物种类和浓度,达到预警疫病的目的,目前主要用于军方监测人类重大疫病。未来的奶牛疫病预警技术需要进一步相互结合、取长补短,充分利用大数据、物联网等新兴技术进行奶牛重大疫病预警诊断。本文为预警监测技术的本地化发展提供了参考。

关键词：奶牛养殖动物疫病预警监测疫病防控实用技术

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新型猪瘟耐热活疫苗冻干工艺设计及放大研究

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中国农业科技导报 2019年第12期21卷 110-118页

作者：左晓昕赵艳红邓碧华胡来根宋伟吕芳卢宇侯继波江苏省农业科学院动物免疫工程研究所南京210014 江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 成都天邦生物制品有限公司成都610100 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地江苏扬州225009 江苏大学药学院江苏镇江212013

为了筛选耐热、安全的猪瘟活疫苗冻干工艺,探索工艺放大规律,为耐热冻干工艺从实验室到生产提供理论依据和技术支撑。根据新型猪瘟耐热配方的热参数科学设计冻干程序,通过冻形、加速耐老化实验、残余水分等指标筛选冻干程序并进行工艺... 详细信息

为了筛选耐热、安全的猪瘟活疫苗冻干工艺,探索工艺放大规律,为耐热冻干工艺从实验室到生产提供理论依据和技术支撑。根据新型猪瘟耐热配方的热参数科学设计冻干程序,通过冻形、加速耐老化实验、残余水分等指标筛选冻干程序并进行工艺放大。结果表明,新型猪瘟耐热活疫苗溶液的共晶点为-26.4七、塌陷温度-22.4--20.4 X.,筛选得到冻干程序3,当预冻温度为-42 t,主干燥温度为-10 t时为最优曲线。将程序3在0.15 m2-0.5 m2-2 m?进行逐级工艺放大摸索,规模放大3倍(0.5 n/)时程序可不变,放大到13倍(2 m2)时需在主干燥阶段下调隔板温度、延长干燥时间。采用新型猪瘟耐热配方及程序3制备的冻干活疫苗产品可在37 t保存20 d、45 t保存14 d;动物实验安全。上述结果表明成功筛选出新型猪瘟耐热配方的配套冻干工艺,并实现了工艺的逐级放大。

关键词：猪瘟冷冻干燥工艺放大耐热性能安全性

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检测兔出血症病毒抗体胶体金试纸条的研制及初步应用

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畜牧兽医学报 2018年第3期49卷 614-619页

作者：魏后军范志宇王芳宋艳华胡波仇汝龙陈萌萌徐为中薛家宾江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

利用免疫层析技术建立快速检测兔出血症病毒(RHDV)抗体的方法,将胶体金标记重组RHDV VP60蛋白,抗VP60单抗A3C和金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)分别包被质控线(C线)和检测线(T线),通过检测强阳性、阳性、弱阳性、阴性血清优化试纸条制备条件,... 详细信息

利用免疫层析技术建立快速检测兔出血症病毒(RHDV)抗体的方法,将胶体金标记重组RHDV VP60蛋白,抗VP60单抗A3C和金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)分别包被质控线(C线)和检测线(T线),通过检测强阳性、阳性、弱阳性、阴性血清优化试纸条制备条件,并验证其性能及与血凝抑制试验的符合率。结果显示,试纸条检测阳性血清时T线、C线颜色深度相同,强阳性血清T线比C线颜色深,弱阳性血清T线比C线颜色浅,阴性血清T线不显色、C线显色,检测强阳性、阳性、弱阳性、阴性血清与血凝抑制试验的符合率分别为93.75%、88.75%、91.25%、95.00%,总的符合率为91.54%;该试纸条具有较好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,为兔病毒性出血症流行病学调查和抗体水平监测提供了有力的检测工具。

关键词：兔病毒性出血症兔出血症病毒 VP60 胶体金试纸条抗体

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产低毒性脂多糖大肠杆菌J5基因重组株的构建

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江苏农业科学 2020年第17期48卷 54-58页

作者：徐悦周明旭朱纯尹文竹马芳鲍熹张金秋卢宇江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省食品质量安全重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地江苏南京210014 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 江苏大学药学院江苏镇江212013

细菌脂多糖(LPS)对宿主细胞具有一定的毒性,但经修饰后的单磷酸类脂A(MPLA)却是一种无毒性的高效免疫佐剂。选择天然O抗原不完全的大肠杆菌J5疫苗株为出发菌株,利用λ-Red同源重组技术导入外源弗朗西斯菌(Francisella novicida)lpxE基因... 详细信息

细菌脂多糖(LPS)对宿主细胞具有一定的毒性,但经修饰后的单磷酸类脂A(MPLA)却是一种无毒性的高效免疫佐剂。选择天然O抗原不完全的大肠杆菌J5疫苗株为出发菌株,利用λ-Red同源重组技术导入外源弗朗西斯菌(Francisella novicida)lpxE基因,缺失大肠杆菌lpxM基因。结果显示,J5ΔlacI::lpxEΔlpxM基因重组株的LPS鲎试剂活性较DH5α和J5原菌显著降低;对4周龄的ICR小鼠腹腔注射LPS提取物,重组菌和PBS组的小鼠体征及肝脏切片均正常。同时,腹腔注射大肠杆菌J5和DH5α的小鼠被毛凌乱、精神抑郁、肝脏细胞肿大,发生炎性浸润,有明显的毒性反应。以上结果说明,J5重组菌的LPS已经区别于原菌,是低毒性的MPLA产物。上述重组株的成功构建,能为生产廉价的兽用MPLA免疫佐剂奠定工作基础。

关键词：大肠杆菌 MPLA Red同源重组佐剂疫苗细菌脂多糖

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猪肺炎支原体抗体胶体金免疫层析检测方法的建立

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中国兽医学报 2018年第9期38卷 1693-1698页

作者：赵肖白昀陈蓉王海燕刘茂军田瑞雨杨浩吴猛韦艳娜王文绍邵国青雷治海冯志新江苏省农业科学院兽医研究所国家兽用生物制品工程技术研究中心农业部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014 南京农业大学动物医学学院江苏南京210095

旨在建立猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp）抗体胶体金免疫层析检测方法,从而快速地对Mhp的感染和免疫情况进行监测,预防和控制猪支原体肺炎传播。通过柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,确定Mhp特异性抗原P46蛋白的最适标记p... 详细信息

旨在建立猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp）抗体胶体金免疫层析检测方法,从而快速地对Mhp的感染和免疫情况进行监测,预防和控制猪支原体肺炎传播。通过柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,确定Mhp特异性抗原P46蛋白的最适标记pH和标记浓度并进行标记,作为金标液。将P46蛋白包被检测线T线,抗P46蛋白单抗包被质控线C线,组装检测试纸条。经优化,建立可同时用于Mhp血清抗体和黏膜抗体检测的胶体金免疫层析检测方法。利用该检测方法对76份临床血清样品和40份临床鼻拭子样品进行检测,并与ELISA检测结果进行比较。用该试纸条检测血清样品时,灵敏性、特异性、重复性较好,与商品化Mhp ELISA抗体检测试剂盒符合率为96.1%;该方法检测呼吸道鼻拭子样品时,存在微弱的非特异性反应,检测结果与本实验室建立的sIgAELISA检测方法符合率为87.5%。本研究成功建立了Mhp抗体胶体金免疫层析检测方法,整个过程只需10 min。检测血清样品具有较好的特异性和灵敏性,检测鼻拭子样品时特异性还有待提高。

关键词： Mhp 血清抗体黏膜抗体免疫胶体金试纸条

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血清4型禽腺病毒fiber-2基因在昆虫细胞中的表达及其免疫原性分析

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中国预防兽医学报 2019年第12期41卷 1251-1255页

作者：梅梅陆吉虎张雪花唐应华卢宇侯继波江苏省农业科学院动物免疫工程研究所江苏南京210014 江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 扬州大学兽医学院教育部禽类预防医学重点实验室/江苏省动物预防医学重点实验室江苏扬州225009 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为研究I群血清4型禽腺病毒(FAdV-4)fiber-2蛋白的免疫原性,本研究利用杆状病毒表达系统构建了含fiber-2基因的重组杆状病毒穿梭载体,将其转染Sf9细胞后获得重组杆状病毒rBA-fiber-2,并采用悬浮放大工艺表达重组fiber-2蛋白。通过间接免... 详细信息

为研究I群血清4型禽腺病毒(FAdV-4)fiber-2蛋白的免疫原性,本研究利用杆状病毒表达系统构建了含fiber-2基因的重组杆状病毒穿梭载体,将其转染Sf9细胞后获得重组杆状病毒rBA-fiber-2,并采用悬浮放大工艺表达重组fiber-2蛋白。通过间接免疫荧光试验(IFA)和western blot鉴定重组蛋白fiber-2的表达,并采用免疫琼扩试验(AGP)检测fiber-2蛋白效价。以fiber-2蛋白作为免疫原制备油乳剂疫苗免疫SPF鸡进行免疫效力试验,分别设fiber-2疫苗组、fiber-2疫苗配伍免疫增强剂CVCVA5组及生理盐水对照组。免疫后14 d、21 d和28 d采集SPF鸡外周血分离血清,利用AGP法检测其血清抗体水平。IFA结果显示fiber-2蛋白在昆虫细胞中获得表达;western blot结果显示该蛋白能够与FAdV-4阳性血清发生特异性免疫反应,蛋白分子量约62 ku;AGP结果显示fiber-2蛋白AGP效价达1:16。免疫后14 d两组实验组鸡均可检测到特异性琼扩抗体,免疫后28 d fiber-2疫苗组SPF鸡抗体AGP效价平均值可达1:24,配伍CVCVA5疫苗组SPF鸡抗体AGP效价平均值可达1:104。以上结果表明fiber-2蛋白具有一定的免疫原性,免疫后可诱导机体产生特异性抗体,本研究为进一步研制FAdV-4亚单位疫苗提供实验依据。

关键词：血清4型禽腺病毒纤突蛋白表达免疫原性

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一株携带犬细小病毒VP2融合基因的重组狂犬病毒的构建

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江苏农业学报 2018年第4期34卷 866-870页

作者：谭业平赵静郭霄峰何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 华南农业大学兽医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510642

为构建预防狂犬病毒和犬细小病毒的疫苗候选毒株,将编码狂犬病毒G蛋白的中和抗原表位的碱基序列插入犬细小病毒VP2基因中,再将VP2融合基因插入狂犬病毒全基因组的G和L基因之间,然后应用反向遗传操作技术构建重组狂犬病毒。直接免疫荧光... 详细信息

为构建预防狂犬病毒和犬细小病毒的疫苗候选毒株,将编码狂犬病毒G蛋白的中和抗原表位的碱基序列插入犬细小病毒VP2基因中,再将VP2融合基因插入狂犬病毒全基因组的G和L基因之间,然后应用反向遗传操作技术构建重组狂犬病毒。直接免疫荧光染色结果显示成功获得重组狂犬病毒r HEP-r VP2;生物学特性研究结果显示重组病毒随着在BHK-21细胞上传代次数的增加,病毒滴度逐渐升高,呈现良好繁殖特性;RT-PCR结果显示携带VP2融合基因的重组病毒具有良好遗传稳定性,重组病毒免疫小鼠可诱导产生保护性抗狂犬病毒和犬细小病毒抗体。

关键词：狂犬病毒犬细小病毒VP2基因反向遗传技术

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生猪屠宰风险因素及信息化监管模式

生猪屠宰风险因素及信息化监管模式

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中国畜牧兽医学会兽医食品卫生学分会第十五次学术交流会

作者：谭业平赵宁陆昌华胡肆农肖颖江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏雨润肉类产业集团有限公司重庆市动物疫病预防控制中心

加强生猪屠宰及上下游环节风险因素识别、评估和监管,有助于降低产业链的重大疫病传播风险,提升猪肉质量安全水平。本文对生猪屠宰及上下游环节影响生猪产品质量安全的风险因素进行了分析,提出从生猪全产业链条角度运用"互联网&qu... 详细信息

加强生猪屠宰及上下游环节风险因素识别、评估和监管,有助于降低产业链的重大疫病传播风险,提升猪肉质量安全水平。本文对生猪屠宰及上下游环节影响生猪产品质量安全的风险因素进行了分析,提出从生猪全产业链条角度运用"互联网"思维,嵌入风险评估的理念,加强物联网技术和大数据应用,建立全程信息化追溯监管模式,以促进生猪产业链健康发展。

关键词：生猪屠宰风险因素信息化监管

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猪伪狂犬病病毒IgA抗体间接ELISA检测方法的建立

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中国兽医科学 2019年第11期49卷 1346-1353页

作者：黄雨晴华涛唐波常晨刘国阳张雪花卢宇侯继波张道华许家荣南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农业科学院动物免疫工程研究所江苏南京210014 江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 省部共建国家重点实验室培育基地—江苏省食品质量安全重点实验室江苏南京210014 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为了建立检测猪伪狂犬病病毒(PRV)黏膜免疫时特异的IgA抗体的间接ELISA方法,本研究采用PCR方法扩增了PRV gB基因截短片段,并将其连入原核表达质粒pGEX-6P-1,构建的表达质粒转化至大肠杆菌Transetta(DE3)菌株后,采用IPTG进行诱导表达,得... 详细信息

为了建立检测猪伪狂犬病病毒(PRV)黏膜免疫时特异的IgA抗体的间接ELISA方法,本研究采用PCR方法扩增了PRV gB基因截短片段,并将其连入原核表达质粒pGEX-6P-1,构建的表达质粒转化至大肠杆菌Transetta(DE3)菌株后,采用IPTG进行诱导表达,得到gB重组蛋白的可溶性表达,并用谷胱甘肽亲和层析柱进行蛋白纯化。以纯化的gB重组蛋白作为包被抗原,以山羊抗猪IgA-HRP为二抗,建立了猪伪狂犬病病毒IgA的间接ELISA检测方法。经ELISA反应条件优化,确定抗原包被浓度为2.4μg/mL,封闭液为10 g/L明胶,一抗37℃孵育1.5 h,二抗1∶20 000稀释后37℃孵育0.5 h,TMB显色液显色10 min。该方法的批内和批间变异系数均小于10%,重复性较好。利用该间接ELISA方法对PRV黏膜免疫的仔猪进行检测,结果可以在鼻腔黏液中检测出特异的IgA抗体。本试验为PRV黏膜免疫提供了初步检测方法。

关键词：伪狂犬病病毒 gB基因原核表达 IgA 间接ELISA

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