检索结果-内蒙古大学图书馆

江西农业大学学报 2018年第5期40卷 1030-1036页

作者：陆吉虎张雪花梅梅侯继波唐应华江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

评价VA5免疫增强剂对禽用多联苗的免疫增强作用。将VA5与新城疫-传染性支气管炎-减蛋下降综合症-H9亚型禽流感(新-支-减-流)四联疫苗合用免疫海兰褐壳蛋鸡和罗曼蛋鸡、与新-支-流三联疫苗合用免疫海兰褐壳蛋鸡,评价免疫后的抗体效价和... 详细信息

评价VA5免疫增强剂对禽用多联苗的免疫增强作用。将VA5与新城疫-传染性支气管炎-减蛋下降综合症-H9亚型禽流感(新-支-减-流)四联疫苗合用免疫海兰褐壳蛋鸡和罗曼蛋鸡、与新-支-流三联疫苗合用免疫海兰褐壳蛋鸡,评价免疫后的抗体效价和攻毒后的保护效力。海兰褐壳蛋鸡或罗曼蛋鸡免疫含VA5的四联疫苗、三联疫苗后的第2、第3和第4周,针对新城疫、传支、减蛋综合征和禽流感的血清血凝抑制(HI)抗体效价均持续高于不加增强剂的常规疫苗组,且第3和第4周HI抗体效价均差异显著(P<0.05);针对新城疫、传支、减蛋综合征和禽流感的粘膜HI抗体效价均亦高于不加增强剂的常规苗组,且差异极显著(P<0.01)。免疫含VA5四联疫苗组的海兰褐壳蛋鸡,在新城疫强毒攻毒后,以临床症状判断,可以100%保护;在禽流感H9变异株攻毒后,可完全抑制不排毒。对上述2种病毒的攻毒保护力均高于常规疫苗。结果表明,VA5免疫增强剂能够提高鸡新-支-减-流四联疫苗、新-支-流三联疫苗对蛋鸡的免疫效力,具有很好的应用前景。

关键词：佐剂免疫增强剂多联疫苗抗体效价

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苏淮猪和外来品种猪肺炎支原体血清抗体变化规律研究

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兽医导刊 2019年第16期 223-224,245页

作者：毛爱民华利忠冯志新范锋邹建波姚黄江缪剑岭胡明英无锡市动物疫病预防控制中心江苏无锡214016 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 无锡市惠山区洛社动物监督站江苏无锡214000 南京农业大学江苏南京210095

本文通过检测不同周龄苏淮育肥猪和外三元猪、不同胎次苏淮母猪和二元猪血清中猪肺炎支原体抗体,调查苏淮猪与外来品种猪在自然感染猪肺炎支原体的情况下血清抗体的变化规律。结果发现:育肥猪群中,苏淮育肥猪和三元猪的猪肺炎支原体抗... 详细信息

本文通过检测不同周龄苏淮育肥猪和外三元猪、不同胎次苏淮母猪和二元猪血清中猪肺炎支原体抗体,调查苏淮猪与外来品种猪在自然感染猪肺炎支原体的情况下血清抗体的变化规律。结果发现:育肥猪群中,苏淮育肥猪和三元猪的猪肺炎支原体抗体阳性率在4周龄以内均有下降趋势,但7周龄以后均随周龄的增加而升高,且除20周龄外,苏淮猪在其余各个周龄阶段猪肺炎支原体阳性率均高于三元猪。母猪群中,苏淮母猪和二元母猪的猪肺炎支原体血清抗体均随着胎次的增加而下降,但无论哪个胎次,两品种猪之间比较,差异均不显著。结论:育肥猪群中,年龄、品种是猪肺炎支原体抗体变化的影响因素;母猪群中,胎次是猪肺炎支原体抗体变化的影响因素,该结果为临床不同品种、不同猪群猪支原体肺炎防治方法提供依据。

关键词：苏淮猪猪肺炎支原体血清抗体检测风险因素

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猪鼻支原体表面可变脂蛋白VlpB黏附宿主细胞功能研究

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中国预防兽医学报 2018年第11期40卷 1049-1054页

作者：胡永婷张必雄王佳冯志新邵国青熊祺琰山西农业大学动物科技学院山西太谷030801 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 肉类生产与加工质量安全控制协同创新中心江苏南京210095

猪鼻支原体表面可变脂蛋白(Vlp)家族在黏附宿主细胞中起重要作用。为研究Vlp家族成员VlpB的黏附细胞功能,包括不同区段的黏附能力,以及其Ⅲ区重复片段的重复次数对黏附能力的影响。本研究利用间接免疫荧光和微孔板黏附试验验证了VlpB的... 详细信息

猪鼻支原体表面可变脂蛋白(Vlp)家族在黏附宿主细胞中起重要作用。为研究Vlp家族成员VlpB的黏附细胞功能,包括不同区段的黏附能力,以及其Ⅲ区重复片段的重复次数对黏附能力的影响。本研究利用间接免疫荧光和微孔板黏附试验验证了VlpB的黏附细胞能力。然后根据GenBank中登录的vlpB基因序列,构建了仅含Ⅱ区基因的重组质粒pET-32a(+)/vlpBn,诱导表达后纯化,获得纯度较高的重组蛋白Vlp B0;同时化学合成Ⅲ区重复片段PepVlpB并与KLH偶联;进一步合成Ⅲ区重复次数分别为3、6、9、12的一系列vlpB基因,构建pET-VlpB,诱导表达获得相应的重组蛋白VlpB3、VlpB6、VlpB9和VlpB12。利用微孔板黏附试验定量检测上述重组蛋白和偶联蛋白的细胞黏附能力。结果显示,仅含Ⅱ区的重组蛋白Vlp B0及含Ⅲ区重复片段的偶联蛋白KLH-PepVlpB可黏附宿主细胞;比较不同Ⅲ区重复次数的VlpB蛋白的黏附水平,结果显示,随着Ⅲ区重复次数增多,VlpB黏附能力逐渐下降。本研究证实Vlp B作为猪鼻支原体的黏附因子之一,其Ⅱ区和Ⅲ区均含有黏附位点,而整体分子的黏附能力随Ⅲ区重复次数增加而降低。本研究结果为猪鼻支原体黏附及致病机制研究提供启示。

关键词：猪鼻支原体可变脂蛋白B(vlpB) 黏附能力重复次数

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伪结核棒状杆菌的分离鉴定及病原性研究

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江苏农业科学 2018年第4期46卷 158-162页

作者：李基棕李文良毛立郝飞杨蕾蕾张纹纹江杰元江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

从疑似羊干酪性淋巴结炎的肩前淋巴结脓肿中分离到1株细菌,经革兰氏染色为无芽孢的阳性棒状杆菌;伪结核棒状杆菌特异性引物进行PCR扩增测序表明,该细菌的序列与伪结核棒状杆菌同源性达99.0%以上,确定其为伪结核棒状杆菌。用15种常用抗... 详细信息

从疑似羊干酪性淋巴结炎的肩前淋巴结脓肿中分离到1株细菌,经革兰氏染色为无芽孢的阳性棒状杆菌;伪结核棒状杆菌特异性引物进行PCR扩增测序表明,该细菌的序列与伪结核棒状杆菌同源性达99.0%以上,确定其为伪结核棒状杆菌。用15种常用抗生素纸片进行药敏试验,结果显示,该菌对青霉素、头孢曲松、左氧氟沙星和氟苯尼考高度敏感;对链霉素、丁胺卡那霉素、环丙沙星、林可霉素和大观霉素耐药。致病性试验发现,腹腔注射小白鼠的半数致死量为1×10-6.0CFU/m L;皮下注射小白鼠2 d后出现大小不等的脓肿;分别用2×108、2×106CFU/m L 2种剂量皮下注射羊后出现体温持续升高,接种部位和周边的浅表淋巴结出现脓肿,切开后有干酪样脓汁,并从病变器官和脓汁中分离到细菌。组织病理学观察显示,皮肤和肌肉层有坏死灶及肉芽肿形成,肌纤维断裂坏死,淋巴细胞浸润,淋巴结出现化脓灶,并有大量上皮样细胞和成纤维细胞增生。本研究为伪结核棒状杆菌疫苗研制及致病机理研究奠定了基础。

关键词：羊伪结核棒状杆菌分离鉴定病源学特征药敏试验致病性试验组织病理学观察

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猪流行性腹泻病毒变异株RT-PCR检测方法的建立

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江苏农业科学 2018年第1期46卷 116-118页

作者：俞正玉逄凤娇孙冰徐向伟茅爱华郭容利范宝超杜露平温立斌倪艳秀何孔旺李彬江苏省农业科学院兽医研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014

猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)可引起猪呕吐、腹泻和脱水,各年龄段的猪均可发病,而哺乳仔猪发病和死亡最为严重。2010年末发生的仔猪腹泻综合征的主要病原为PEDV变异株。根据PEDV变异株S基因发生碱基缺失和... 详细信息

猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)可引起猪呕吐、腹泻和脱水,各年龄段的猪均可发病,而哺乳仔猪发病和死亡最为严重。2010年末发生的仔猪腹泻综合征的主要病原为PEDV变异株。根据PEDV变异株S基因发生碱基缺失和插入的特征设计并合成了1对特异性引物,首次建立了PEDV变异株的RT-PCR检测方法。结果表明,所建立的PCR检测方法特异性强,不和PEDV经典毒株反应,也不与其他动物病原反应;敏感性较高,最低可检测10^(-3)ng/μL,且重复性较好。用该方法对2013—2014年我国华东地区猪场的318份临床样品进行检测,结果发现109份样品(34.3%)为PEDV变异株阳性,表明我国腹泻猪群中PEDV变异株感染较为普遍。本研究建立的PCR方法可以作为PEDV变异株在临床上的一种鉴别诊断技术。

关键词：猪流行性腹泻病毒变异株,RT-PCR 检测特异性敏感性重复性

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新型鹅星状病毒AHQJ18株的分离鉴定

新型鹅星状病毒AHQJ18株的分离鉴定

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江苏省畜牧兽医学会首届“青年科技论坛”

作者：章丽娇黄欣梅刘飞刘青涛韩凯凯赵冬敏杨婧刘宇卓李银江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京 210014 山东鲁抗舍里乐药业有限公司山东济宁272000

新型鹅星状病毒是近期我国部分地区养鹅场新暴发的一种可引起雏鹅致死性痛风的新流行病原，给我国的商品鹅养殖业造成了严重的影响.2018 年7 月，安徽全椒某商品鹅场雏鹅出现精神沉郁、消瘦及四肢瘫痪等临床症状，严重的出现死亡，死亡... 详细信息

新型鹅星状病毒是近期我国部分地区养鹅场新暴发的一种可引起雏鹅致死性痛风的新流行病原，给我国的商品鹅养殖业造成了严重的影响.2018 年7 月，安徽全椒某商品鹅场雏鹅出现精神沉郁、消瘦及四肢瘫痪等临床症状，严重的出现死亡，死亡率5％-30％，剖检可见死亡雏鹅内脏表面、翅腿部关节和喙部出现明显的尿酸盐沉积.本研究通过采集患病鹅肝脏、肾脏等病变明显的组织样品，经鹅胚尿囊膜接种，分离到一株能引起鹅胚尿囊膜增厚和胚体肝脏坏死的病毒，经RT-PCR、序列比对及系统进化树分析，确定其为新型鹅星状病毒，命名为AAstV/Goose/CHN/2018/AHQJ(简称AHQJ18).该毒株的分离鉴定为雏鹅痛风流行病学的调查提供依据，同时也为其防控奠定了基础.

关键词：痛风新型鹅星状病毒分离鉴定

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血清4型禽腺病毒六邻体蛋白的原核表达及鉴定

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华北农学报 2018年第5期33卷 106-110页

作者：刘娜刘青涛李银杨婧李祥瑞江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

通过原核表达的方法得到血清4型禽腺病毒的主要结构蛋白六邻体蛋白;根据GenBank中血清4型禽腺病毒六邻体蛋白的基因序列,设计一对特异性引物,利用普通PCR方法扩增得到hexon基因的全长序列。将PCR扩增得到的血清4型禽腺病毒六邻体基因片... 详细信息

通过原核表达的方法得到血清4型禽腺病毒的主要结构蛋白六邻体蛋白;根据GenBank中血清4型禽腺病毒六邻体蛋白的基因序列,设计一对特异性引物,利用普通PCR方法扩增得到hexon基因的全长序列。将PCR扩增得到的血清4型禽腺病毒六邻体基因片段,在其两端插入酶切位点后克隆至载体pMD18T中,经PCR鉴定和测序分析正确后,与原核表达载体pET-32 a进行连接,构建pET-32 a-hexon原核表达载体,并对其进行双酶切和测序鉴定。将构建成功的表达载体转化至BL21(DE3)中,用1 mmol/L的IPTG进行诱导表达,对得到的重组蛋白进行SDS-PAGE分析和Western Blot鉴定;经双酶切鉴定和测序鉴定,pET-32a-hexon原核表达载体构建成功,插入的六邻体蛋白基因片段大小为2 814 bp,在1 mmol/L浓度IPTG诱导3 h时重组蛋白表达量最高,且重组蛋白主要以包涵体形式存在于沉淀中。SDS-PAGE分析结果显示,融合蛋白分子量为118 ku。免疫印迹分析结果显示,融合蛋白可被抗FAdV-4的血清和HIS标签抗体特异性识别;成功表达了血清4型禽腺病毒的主要结构蛋白六邻体蛋白,且得到的重组蛋白具有良好的反应原性,可用于血清4型禽腺病毒的进一步研究中,为血清4型禽腺病毒病的预防和治疗奠定了良好的基础。

关键词：血清4型禽腺病毒六邻体蛋白原核表达

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新型猪瘟耐热活疫苗冻干工艺设计及放大研究

新型猪瘟耐热活疫苗冻干工艺设计及放大研究

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中国生物工程学会第十三届学术年会暨2019年全国生物技术大会

作者：左晓昕赵艳红邓碧华胡来根宋伟吕芳卢宇侯继波江苏省农业科学院动物免疫工程研究所江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心成都天邦生物制品有限公司江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地江苏大学药学院

本文筛选耐热、安全的猪瘟活疫苗冻干工艺,探索工艺放大规律,为耐热冻干工艺从实验室到生产提供理论依据和技术支撑。根据新型猪瘟耐热配方的热参数科学设计冻干程序,通过冻形、加速耐老化实验、残余水分等指标筛选冻干程序并进行工艺... 详细信息

本文筛选耐热、安全的猪瘟活疫苗冻干工艺,探索工艺放大规律,为耐热冻干工艺从实验室到生产提供理论依据和技术支撑。根据新型猪瘟耐热配方的热参数科学设计冻干程序,通过冻形、加速耐老化实验、残余水分等指标筛选冻干程序并进行工艺放大。结果表明,新型猪瘟耐热活疫苗溶液的共晶点为-26.4℃、塌陷温度-22.4～-20.4℃,筛选得到冻干程序3,当预冻温度为-42℃,主干燥温度为-10℃时为最优曲线。将程序3在0.15 M2-0.5 M2-2 M2进行逐级工艺放大摸索,规模放大3倍(0.5 M2)时程序可不变,放大到13倍(2 M2)时需在主干燥阶段下调隔板温度、延长干燥时间。采用新型猪瘟耐热配方及程序3制备的冻干活疫苗产品可在37℃保存20 d、45℃保存14 d;动物实验安全。上述结果表明成功筛选出新型的无外源蛋白、安全无副反应猪瘟耐热配方的配套冻干工艺,并实现了工艺的逐级放大。为耐热冻干工艺从实验室到生产提供理论依据和技术支撑。

关键词：猪瘟冷冻干燥工艺放大耐热性能安全性

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猪伪狂犬病毒Real-time PCR检测方法的建立和弱毒疫苗病毒含量的检测

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江西农业学报 2019年第9期31卷 73-78页

作者：华涛唐波黄江常晨刘国阳张雪花侯继波张道华江苏省农业科学院动物免疫工程研究所江苏南京210014 江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 省部共建国家重点实验室培育基地/江苏省食品质量安全重点实验室江苏南京210014 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

根据伪狂犬病毒的gB基因设计引物,将含gB基因的质粒作为标准品,绘制标准曲线,建立了伪狂犬病毒PRV的荧光定量PCR检测方法。该检测方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,不与PCV2、PPV、CSFV、JEV和PRRSV发生反应。用该方法对不同滴度... 详细信息

根据伪狂犬病毒的gB基因设计引物,将含gB基因的质粒作为标准品,绘制标准曲线,建立了伪狂犬病毒PRV的荧光定量PCR检测方法。该检测方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,不与PCV2、PPV、CSFV、JEV和PRRSV发生反应。用该方法对不同滴度病毒液的基因拷贝数进行检测,发现病毒滴度和病毒拷贝数之间存在较好的相关性。采用该方法对7种商品化PRV弱毒疫苗进行病毒含量检测,结果显示不同商品化弱毒疫苗的病毒含量存在显著差异,与说明书标注的病毒含量基本一致。

关键词：猪伪狂犬病毒 gB基因荧光定量PCR 病毒滴度基因拷贝数疫苗含量

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樱桃谷鸭OASL基因全长cDNA的克隆及其生物信息学分析

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江苏农业学报 2017年第2期33卷 -页

作者：毕可然韩凯凯李银刘青涛赵冬敏刘宇卓黄欣梅杨婧江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了获得樱桃谷鸭寡腺苷酸合成酶样蛋白质基因(OASL)全长cDNA,并且初步了解其生物学特性,采用RT-PCR和RACE方法从鸭脾脏组织总RNA中扩增OASL基因cDNA片段,应用生物信息学方法,系统分析鸭OASL的遗传进化以及蛋白质的理化性质、二级结构... 详细信息

为了获得樱桃谷鸭寡腺苷酸合成酶样蛋白质基因(OASL)全长cDNA,并且初步了解其生物学特性,采用RT-PCR和RACE方法从鸭脾脏组织总RNA中扩增OASL基因cDNA片段,应用生物信息学方法,系统分析鸭OASL的遗传进化以及蛋白质的理化性质、二级结构和亚细胞定位。结果表明,樱桃谷鸭OASL基因(Gen Bank登录号:KX255654)全长1 630 bp,其中包含19 bp的5'UTR(Untranslated region,UTR)、99 bp的3'UTR(Untranslated region,UTR)和PolyA尾巴、1 512 bp的编码区(Coding region,CDS),翻译编码504个氨基酸多肽。鸭OASL蛋白具有寡腺苷酸合成酶(OAS)蛋白家族的典型特征,即N端为寡腺苷酸合成酶样结构域(OAS-like domain,OLD),C端为2个串联的泛素化样结构域(Ubiquitin-like domains,Ub LDs),不具有信号肽和跨膜区。序列比对和系统进化分析结果表明,OASL氨基酸序列在同种之间比较保守,与已报道的鸭OASL的同源性高达100%,与鹅同源性为78%,与人、鼠和猪等哺乳动物的同源性仅为43%~45%。

关键词：樱桃谷鸭 OASL基因 RACE 生物信息学分析

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