检索结果-内蒙古大学图书馆

江苏农业学报 2009年第6期25卷 1438-1441页

作者：冯志新刘茂军王海燕甘源吴叙苏邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

猪肺炎支原体（Mycoplasmahyopneumoniae，Mhp）与呼吸道黏膜纤毛的特异性吸附是引起猪支原体肺炎（Mycoplasmapneumoniaeofswilqe，MPS）的先决条件.Minmn等研究表明，97蛋白R1区直接参与支原体与呼吸道纤毛的黏附，同时P97的主要抗原... 详细信息

猪肺炎支原体（Mycoplasmahyopneumoniae，Mhp）与呼吸道黏膜纤毛的特异性吸附是引起猪支原体肺炎（Mycoplasmapneumoniaeofswilqe，MPS）的先决条件.Minmn等研究表明，97蛋白R1区直接参与支原体与呼吸道纤毛的黏附，同时P97的主要抗原决定簇也位于该区域。P97R1区在猪8市炎支原体的检测诊断与致病机理研究方面具有重要意义。本研究以纯化的猪肺炎支原体全菌蛋白作为免疫原，以大肠杆菌表达的P97R1融合蛋白作为筛选抗原制备锗肺炎支原体P97R1区的特异性单抗，为Mhp的诊断检测及致病机制研究提供基础。

关键词：猪肺炎支原体 P97R1区单克隆抗体

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鹅细小病毒LH株的分离鉴定

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江苏农业学报 2009年第5期25卷 1091-1094页

作者：刘宇卓李银魏雪涛张敬峰江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

采用鹅胚接种方法从南京六合具典型鹅细小病毒病病变的死亡雏鹅体内分离到1株鹅细小病毒(LH株)。在电镜下观察到该病毒液具细小病毒样粒子;8日龄健康易感雏鹅人工感染后100%发病、死亡,且具有典型鹅细小病毒病临床症状和剖检特征。在琼... 详细信息

采用鹅胚接种方法从南京六合具典型鹅细小病毒病病变的死亡雏鹅体内分离到1株鹅细小病毒(LH株)。在电镜下观察到该病毒液具细小病毒样粒子;8日龄健康易感雏鹅人工感染后100%发病、死亡,且具有典型鹅细小病毒病临床症状和剖检特征。在琼脂扩散试验中,用感染鹅胚液制备的待检沉淀抗原,能与鹅细小病毒阳性血清发生特异性反应。应用针对GPVVP3特异性引物对LH毒液进行PCR检测,扩增出的片段为1.6 kb,与目的条带大小相符。序列分析发现,扩增产物与已发表的GPV的VP3片段相比较,同源性达99%以上,表明所分离到的LH株是一株鹅细小病毒。

关键词：鹅细小病毒分离鉴定

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RAPD法分析猪肺炎支原体DNA多态性

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江苏农业学报 2009年第5期25卷 1058-1062页

作者：邵国青刘茂军甘源冯志新王海燕江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

应用RAPD技术，用7条随机引物对7株猪肺炎支原体和2株猪鼻支原体基因组DNA进行了多态性分析，结果表明，7条引物共产生244个扩增片段，其中有92个是多态性片段。相似系数分析结果显示，国际标准株J株和国内分离株之间相似性系数为0．139... 详细信息

应用RAPD技术，用7条随机引物对7株猪肺炎支原体和2株猪鼻支原体基因组DNA进行了多态性分析，结果表明，7条引物共产生244个扩增片段，其中有92个是多态性片段。相似系数分析结果显示，国际标准株J株和国内分离株之间相似性系数为0．139～0．333，猪肺炎支原体和猪鼻支原体之间相似性系数为0．203～0．400。

关键词：猪肺炎支原体 RAPD DNA多态性

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猪链球菌2型IMPDH基因功能结构域的研究

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2009年第2期30卷 5-8页

作者：刘亚彬何孔旺倪艳秀周俊明张雪寒陆承平江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

在猪链球菌毒力相关基因orf2和mrp之间发现一个新的开放阅读框,经酶活性染色试验证实该阅读框编码的蛋白具有次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)活性,该阅读框共计957 bp,编码319个氨基酸。经Interpro和PHD软件分析,推测该蛋白的功能结构域存... 详细信息

在猪链球菌毒力相关基因orf2和mrp之间发现一个新的开放阅读框,经酶活性染色试验证实该阅读框编码的蛋白具有次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)活性,该阅读框共计957 bp,编码319个氨基酸。经Interpro和PHD软件分析,推测该蛋白的功能结构域存在于9~798 bp基因片段所编码的多肽中,特对这790个碱基依次缺失,以找寻酶的催化部位和底物结合部位。4个缺失基因和全长基因经过基因克隆,表达出5种相应的蛋白。免疫印迹证实这5种蛋白可被猪链球菌2型(SS2)的抗血清识别,且其中的4种蛋白含有IMPDH单抗(1A8)识别表位;通过活性染色,初步确定了SS2中IMDPH的催化部位和底物结合部位。

关键词：猪链球菌2型次黄嘌呤核苷酸脱氢酶结构域活性染色

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刚地弓形虫NT株P30基因的克隆与表达

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江苏农业学报 2009年第1期25卷 147-150页

作者：张理航刘茂军吕芳李贺侠吴叙苏冯志新邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 金陵科技学院江苏南京211169

参考Genbank登录的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)P30全基因序列,设计合成1对引物,通过PCR在刚地弓形虫的基因组DNA中扩增出P30基因片段,然后构建重组表达质粒pET-32 a(+)/P30,用IPTG诱导,在表达菌BL21(DE3)表达出分子量为4.83×10... 详细信息

参考Genbank登录的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)P30全基因序列,设计合成1对引物,通过PCR在刚地弓形虫的基因组DNA中扩增出P30基因片段,然后构建重组表达质粒pET-32 a(+)/P30,用IPTG诱导,在表达菌BL21(DE3)表达出分子量为4.83×104的融合蛋白,经W estern-b lotting鉴定目的蛋白具有良好的免疫学活性,为刚地弓形虫疫苗的制备及猪弓形虫抗体ELISA检测方法的建立奠定了基础。

关键词：刚地弓形虫 P30基因克隆表达

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白介素2基因与猪圆环病毒2型ORF2基因真核双表达质粒的构建

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南京农业大学学报 2009年第1期32卷 100-104页

作者：潘群兴何孔旺温立斌郭容利黄克和江苏省农业科学院兽医研究所／农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室／国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

应用基因重组技术,构建猪圆环病毒2型ORF2基因与白介素2基因(IL-2)的真核双表达载体并将其转染CHO细胞,通过RT-PCR、间接ELISA、Western-blot、间接免疫荧光检测(IFA)等方法验证基因的表达情况。结果表明:成功构建了猪圆环病毒2型ORF2... 详细信息

应用基因重组技术,构建猪圆环病毒2型ORF2基因与白介素2基因(IL-2)的真核双表达载体并将其转染CHO细胞,通过RT-PCR、间接ELISA、Western-blot、间接免疫荧光检测(IFA)等方法验证基因的表达情况。结果表明:成功构建了猪圆环病毒2型ORF2基因和IL-2基因的真核双表达质粒pIRES-ORF2-IL-2,该质粒可在体外同时表达ORF2和IL-2。

关键词：猪圆环病毒2型 ORF2基因 IL-2基因 DNA疫苗

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一株猪肺炎支原体强毒株的分离和鉴定

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江苏农业学报 2009年第2期25卷 308-310页

作者：刘茂军邵国青周勇岐苏国东王继春孙佩元冯志新刘冬霞江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京天邦生物科技有限公司江苏南京211102

从猪支原体肺炎病例病料中分离得到1株支原体,对其进行培养试验、代谢抑制试验、PCR鉴定和动物回归试验。分离株攻毒猪后,该猪出现典型的猪支原体肺炎临床症状和病变,证明该分离株为猪肺炎支原体。这为猪肺炎支原体的研究提供了条件。

关键词：猪肺炎支原体分离鉴定毒力

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SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测类猪圆环病毒因子P1

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华北农学报 2009年第4期24卷 31-35页

作者：温立斌何孔旺杨汉春郭容利周俊明钟书霖江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 中国农业大学动物医学院农业部预防兽医学重点开放实验室北京100094

该研究旨在建立快速、敏感和特异的检测类猪圆环病毒因子P1的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR法,用于P1的早期诊断。以感染P1的猪血清DNA提取物为模板,采用PCR扩增P1 101 bp的基因片段,将其克隆至pMD18-T载体,重组质粒测序并进行同源性分析;... 详细信息

该研究旨在建立快速、敏感和特异的检测类猪圆环病毒因子P1的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR法,用于P1的早期诊断。以感染P1的猪血清DNA提取物为模板,采用PCR扩增P1 101 bp的基因片段,将其克隆至pMD18-T载体,重组质粒测序并进行同源性分析;以阳性质粒为模板,建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法,并进行敏感性和特异性检测。经测序证实扩增片段属于P1,所建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测P1的反应在101-108拷贝/μL之间具有良好的线性关系,反应的检出下限为10拷贝/μL,而对猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等的检测为阴性,表明该方法敏感、特异。成功建立了SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测P1载量的方法,为P1致病机制和机体免疫保护机制的研究提供了技术平台。

关键词：类猪圆环病毒因子 P1 荧光定量PCR 熔解曲线检测

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兔出血症病毒衣壳蛋白重组腺病毒的构建、表达及其免疫原性

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江苏农业学报 2009年第6期25卷 1320-1324页

作者：胡波王芳秦爱建范志宇徐为中张则斌薛家宾何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 扬州大学兽医学院江苏扬州225009

通过RT-PCR方法扩增上海地区兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白基因(VP60)。将其克隆入腺病毒表达载体系统中,构建成重组腺病毒质粒,用脂质体法转染HEK293细胞,得到重组病毒pAd-VP60,经RT-PCR、IFA、HA、SDS-PAGE和Western-blotting鉴定,结果... 详细信息

通过RT-PCR方法扩增上海地区兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白基因(VP60)。将其克隆入腺病毒表达载体系统中,构建成重组腺病毒质粒,用脂质体法转染HEK293细胞,得到重组病毒pAd-VP60,经RT-PCR、IFA、HA、SDS-PAGE和Western-blotting鉴定,结果表明重组VP60蛋白在HEK293细胞中获得表达。表达产物与铝胶佐剂混合后注射3月龄非免疫健康家兔,结果表明,免疫后21 d兔体内产生抗RHDV抗体,其HI效价可达2~6～2~7,能抵御HA≥2^(10)致死剂量RHDV强毒的攻击,保护率为100%。

关键词：兔出血症病毒重组腺病毒表达免疫原性

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Ghrelin对大鼠胃黏膜上皮细胞中H^＋ -K^＋ -ATP酶基因表达和活性的影响

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江苏农业学报 2009年第4期25卷 803-806页

作者：杜改梅刘茂军罗碧平蒋加进胡志华戴鼎震陈钟鸣金陵科技学院动物科学与技术学院江苏南京210038 江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为揭示Ghrelin对胃酸分泌的作用,从断奶大鼠中分离新鲜胃黏膜,培养胃黏膜上皮细胞,培养30 h后,试验组培养液更换为分别含有1×10-4μmol/L、1×10-3μmol/L、1×10-2μmol/L和1×10-1μmol/L Ghrelin的新鲜培养液,对照... 详细信息

为揭示Ghrelin对胃酸分泌的作用,从断奶大鼠中分离新鲜胃黏膜,培养胃黏膜上皮细胞,培养30 h后,试验组培养液更换为分别含有1×10-4μmol/L、1×10-3μmol/L、1×10-2μmol/L和1×10-1μmol/L Ghrelin的新鲜培养液,对照组换为不含Ghrelin的正常新鲜培养液。继续培养4 h后,收集培养液和细胞,分别测定细胞中H+-K+-ATPasemRNA表达和活性。结果表明:1×10-3μmol/LGhrelin可显著增加细胞中H+-K+-ATPasemRNA的表达(P<0.05),1×10-4μmol/L、1×10-3μmol/L和1×10-2μmol/L Ghrelin明显增加了胃黏膜上皮细胞中H+-K+-ATPase的活性。这表明Ghrelin体外作用于胃黏膜上皮细胞可刺激胃酸的分泌。

关键词： ghrelin 胃黏膜上皮细胞大鼠 H+-K+-ATPase

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