检索结果-内蒙古大学图书馆

江苏农业学报 2010年第1期26卷 91-95页

作者：逯晓敏冯志新刘茂军吴叙苏甘源张映邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 山西农业大学动物科技学院山西太谷030801

根据GenBank中登录的猪肺炎支原体P36(L-乳酸脱氢酶)全基因序列,设计合成了2对引物,建立套式PCR方法。运用该方法对猪肺炎支原体不同菌株培养物进行了扩增,并对经肺内免疫猪支原体肺炎活疫苗后支气管肺泡灌洗液进行了检测。结果表明,不... 详细信息

根据GenBank中登录的猪肺炎支原体P36(L-乳酸脱氢酶)全基因序列,设计合成了2对引物,建立套式PCR方法。运用该方法对猪肺炎支原体不同菌株培养物进行了扩增,并对经肺内免疫猪支原体肺炎活疫苗后支气管肺泡灌洗液进行了检测。结果表明,不同菌种均能扩增出427 bp的目的条带,而其他病原菌未出现特异性扩增条带。建立的套式PCR方法检测猪肺炎支原体的最低检测限度为10个CCU(颜色变化单位)。支气管肺泡灌洗液检测结果表明,经肺内免疫的猪支气管肺泡灌洗液扩增结果均为阳性。

关键词：猪肺炎支原体 P36 套式PCR

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引起免疫失败的传染性腔上囊病病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达

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中国兽医科学 2010年第2期40卷 130-134页

作者：曹冰玉王永山范红结欧阳伟王忠灿唐雨德江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 南京军区军事医学研究所江苏南京210002

将从安徽省传染性腔上囊病(IBD)免疫失败的病鸡腔上囊组织中扩增的VP2基因定向克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中,构建了原核表达质粒pGEX-VP2,并转化大肠杆菌Rosetta(DE3);经IPTG诱导后,用IBDV双抗体夹心ELISA检测,结果呈阳性反应;SDS-PAG... 详细信息

将从安徽省传染性腔上囊病(IBD)免疫失败的病鸡腔上囊组织中扩增的VP2基因定向克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中,构建了原核表达质粒pGEX-VP2,并转化大肠杆菌Rosetta(DE3);经IPTG诱导后,用IBDV双抗体夹心ELISA检测,结果呈阳性反应;SDS-PAGE分析结果显示,重组VP2融合蛋白的分子质量为68ku,表达量约占菌体总蛋白量的16.0%,表达产物主要以包涵体形式存在于菌体内;Western-blotting结果显示,重组VP2蛋白与IBDV抗体发生反应,形成一条特异性蛋白带,表明获得的重组蛋白具有良好的抗原反应性。

关键词：传染性腔上囊病病毒 VP2基因原核表达

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传染性法氏囊病病毒抗原表位与乙型肝炎病毒核心抗原嵌合基因的构建及其表达产物分析

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中国预防兽医学报 2010年第11期32卷 879-883页

作者：刘小娟王永山欧阳伟张海彬王忠灿唐雨德江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 南京军区军事医学研究所江苏南京210002

为提高传染性法氏囊病病毒(IBDV)多表位基因5epis的免疫效力,本研究应用重叠延伸PCR技术,在乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)基因的231位～232位核苷酸(77位～78位氨基酸残基)之间插入BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点,构建基于HBcAg修饰基因(mHBc)... 详细信息

为提高传染性法氏囊病病毒(IBDV)多表位基因5epis的免疫效力,本研究应用重叠延伸PCR技术,在乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)基因的231位～232位核苷酸(77位～78位氨基酸残基)之间插入BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点,构建基于HBcAg修饰基因(mHBc)的抗原表位嵌合体基因分子载体pET-mHBc。将编码IBDV多表位基因5epis定向插入到pET-mHBc的mHBc基因中,获得嵌合体基因mHBc-5epis表达重组质粒pET-mHBc-5epis,并在大肠杆菌中表达。经SDS-PAGE分析,重组嵌合体蛋白的分子量约29 ku,表达量约占菌体总蛋白的47.6%;Western blot结果表明,重组嵌合体蛋白可与IBDV抗体反应形成1条特异性蛋白带;重组嵌合体蛋白呈病毒样颗粒(VLP),直径约100 nm～120 nm;用IBDV抗体夹心ELISA检测,抗原效价达到1∶200。本实验成功构建了5epis与HBcAg嵌合体基因,并在大肠杆菌中高效表达,具有IBDV抗原反应性的重组病毒样颗粒嵌合体蛋白,为研究其表位型基因工程疫苗提供了新途径。

关键词：传染性法氏囊病病毒抗原表位乙肝病毒核心抗原(HBcAg) 嵌合体

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兔支气管败血波氏杆菌双夹心ELISA检测方法的建立

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江苏农业学报 2010年第1期26卷 120-125页

作者：熊富强王芳恽时锋林焱范志宇胡波赵宁江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病免疫与诊断重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京军区南京总医院比较医学科江苏南京210002 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为建立特异性好、敏感性高、稳定可靠的兔支气管败血波氏杆菌(Bb)双夹心ELISA检测方法,制备了兔抗Bb免疫血清和小鼠抗Bb腹水单抗(Bb McAb),并将它们提纯。用方阵法筛选最佳反应浓度,用特异性试验、敏感性试验和重复性试验对该方法进行鉴... 详细信息

为建立特异性好、敏感性高、稳定可靠的兔支气管败血波氏杆菌(Bb)双夹心ELISA检测方法,制备了兔抗Bb免疫血清和小鼠抗Bb腹水单抗(Bb McAb),并将它们提纯。用方阵法筛选最佳反应浓度,用特异性试验、敏感性试验和重复性试验对该方法进行鉴定,并与PCR检测方法比较。结果表明,兔抗Bb IgG的最佳稀释度为1∶6 400,浓度为2.5 mg/L;单抗的最佳稀释度为1∶800,浓度为5.0 mg/L。特异性试验和重复性试验结果表明,该方法特异性强、重复性好,与兔常见病菌大肠埃希氏菌、多杀性巴氏杆菌和产气荚膜梭菌均不发生反应,同时与PCR检测方法的符合率为100%。

关键词：支气管败血波氏杆菌免疫血清单克隆抗体双夹心ELISA

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弓形虫NT株猪体人工发病实验研究

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中国人兽共患病学报 2010年第11期26卷 1016-1020页

作者：孔猛白昀冯志新刘茂军熊祺琰王海燕甘源王占伟吴叙苏刘冬阳刘冬霞邵国青江苏省农业科学院兽医研究所.农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室.国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 江苏省畜禽产品安全性研究重点实验室南京210014 南京天邦生物科技有限公司南京211102

目的探讨猪弓形虫病人工发病条件。方法将8头30日龄断奶仔猪分为A1组:腹腔注射1000万个弓形虫速殖子;A2组:腹腔注射5000万个弓形虫速殖子;A3组:腹腔注射1亿个弓形虫速殖子;A4组:空白对照。将8头5月龄育肥猪分为B1组:腹腔注射1000万个弓... 详细信息

目的探讨猪弓形虫病人工发病条件。方法将8头30日龄断奶仔猪分为A1组:腹腔注射1000万个弓形虫速殖子;A2组:腹腔注射5000万个弓形虫速殖子;A3组:腹腔注射1亿个弓形虫速殖子;A4组:空白对照。将8头5月龄育肥猪分为B1组:腹腔注射1000万个弓形虫速殖子;B2组:腹腔注射5000万个弓形虫速殖子;B3组:腹腔注射1亿个弓形虫速殖子;B4组:空白对照。以猪源刚地弓形虫强毒虫株南京汤山株(NT株)F275代攻毒观察临床症状及剖检变化。结果 A组实验猪3～7d后三种感染方式均出现典型的弓形虫病症状:持续高温、精神倦怠、呼吸困难、食欲不振等临床症状,A2、A3组感染猪弓形虫病症状明显且出现实验猪死亡,肺脏、肝脏、脾脏、淋巴结肿大、出血,并从血液和淋巴结中分离到了弓形虫。B组实验猪则没出现典型的临床症状。结论 30日龄断奶仔猪腹腔注射5000万个～1亿个弓形虫速殖子可出现典型的猪弓形虫病症状。

关键词：弓形虫猪弓形虫病人工发病条件

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检测兔出血症病毒抗体间接ELISA方法的建立

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江苏农业学报 2010年第3期26卷 546-550页

作者：李超美王芳蔡少平任雪枫胡波范志宇徐为中何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病免疫与诊断重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京出入境检验检疫局江苏南京210001 江苏省动物疫病预防控制中心江苏南京210036

为建立检测兔出血症病毒(RHDV)抗体的间接ELISA方法,应用杆状病毒表达系统表达的RHDV VP60包被酶标板,经间接ELISA的最佳反应条件优化试验确定:抗原的包被浓度为4.62μg/ml,标准阴、阳性血清稀释度为1∶200,封闭液选用2%明胶;羊抗兔IgG... 详细信息

为建立检测兔出血症病毒(RHDV)抗体的间接ELISA方法,应用杆状病毒表达系统表达的RHDV VP60包被酶标板,经间接ELISA的最佳反应条件优化试验确定:抗原的包被浓度为4.62μg/ml,标准阴、阳性血清稀释度为1∶200,封闭液选用2%明胶;羊抗兔IgG最佳稀释度为1∶4 000。阻断试验、特异性试验、敏感性试验、重复性试验结果显示,该方法具有较高的特异性、敏感性和重复性。用建立的ELISA方法与血凝抑制试验对临床血清样品进行检测,结果显示,ELISA与HI检测兔血清的RHDV抗体阳性率分别为84.7%(955/1 127)和76.0%(857/1 127),符合率为91.3%。该方法的建立为检测RHDV抗体提供了一种安全、特异、敏感、快速、操作简便经济的检测方法,为兔出血症免疫监测和预防控制提供了科学的技术手段。

关键词：兔出血症病毒 VP60 间接ELISA

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I型鸭肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立

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浙江农业学报 2010年第1期22卷 10-13页

作者：魏雪涛张晓勇李银刘宇卓张敬峰江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 浙江省嘉兴市出入境检验检疫局浙江嘉兴314001

根据GenBank发表的DHVI的基因序列,设计了1对针对DHVI保守区的特异性引物。通过对反应条件的优化,建立了鸭病毒性肝炎病毒快速鉴别诊断的RT-PCR方法,扩增片段大小为632bp。试验表明,RT-PCR法具有很强的特异性,且该方法的敏感性明显高于... 详细信息

根据GenBank发表的DHVI的基因序列,设计了1对针对DHVI保守区的特异性引物。通过对反应条件的优化,建立了鸭病毒性肝炎病毒快速鉴别诊断的RT-PCR方法,扩增片段大小为632bp。试验表明,RT-PCR法具有很强的特异性,且该方法的敏感性明显高于常规的检测方法。对鸭病毒性肝炎的病料检测证明,该方法能有效鉴别DHV,特异性良好。

关键词： I型鸭肝炎病毒 RT-PCR 诊断

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应用高分辨熔点曲线分析区分类猪圆环病毒因子P1和猪圆环病毒2型

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江苏农业学报 2010年第2期26卷 315-319页

作者：温立斌何孔旺杨汉春郭容利钟书霖周俊明李成仁陈梦海江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 中国农业大学动物医学院北京100094 扬州大学生物科学与技术学院江苏扬州225009

为评价高分辨熔点曲线分析在快速鉴别类猪圆环病毒因子P1和猪圆环病毒2型中的应用。在Cor-bett Rotor-Gene 6000定量PCR仪上,利用EvaGreen荧光染料对靶核苷酸序列进行扩增,建立HRM分析P1和PCV2的工作流程。在优化各种条件基础上,利用HR... 详细信息

为评价高分辨熔点曲线分析在快速鉴别类猪圆环病毒因子P1和猪圆环病毒2型中的应用。在Cor-bett Rotor-Gene 6000定量PCR仪上,利用EvaGreen荧光染料对靶核苷酸序列进行扩增,建立HRM分析P1和PCV2的工作流程。在优化各种条件基础上,利用HRM分析可区分相差1个碱基的靶序列。因此,HRM分析可为P1和PCV2的分子诊断提供一种新的技术手段。

关键词：高分辨熔点曲线类猪圆环病毒因子P1 猪圆环病毒2型鉴别

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鸭瘟病毒PCR检测方法的建立

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浙江农业学报 2010年第6期22卷 750-753页

作者：魏雪涛张晓勇李银刘宇卓张敬峰聂文军江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 浙江省嘉兴市出入境检验检疫局浙江嘉兴314001 南京市浦口区兽医站江苏南京211800

根据GenBank发表的鸭瘟病毒(DPV)的基因序列,设计了针对DPV UL6 UL7保守区1对特异性引物。通过对反应条件的优化,建立了鸭瘟病毒快速鉴别诊断的PCR方法,扩增片段大小为1 293 bp。试验结果表明PCR法具有很强的特异性,且敏感性较高,最低DN... 详细信息

根据GenBank发表的鸭瘟病毒(DPV)的基因序列,设计了针对DPV UL6 UL7保守区1对特异性引物。通过对反应条件的优化,建立了鸭瘟病毒快速鉴别诊断的PCR方法,扩增片段大小为1 293 bp。试验结果表明PCR法具有很强的特异性,且敏感性较高,最低DNA模板检出量为15 pg/mL。对鸭瘟的临床病料检测证明,该方法具有特异、快速和敏感的特点,可有效鉴别DPV。

关键词：鸭瘟病毒 PCR 检测

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RFID电子射频耳标在种猪场的对比试验

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江苏农业学报 2010年第2期26卷 446-448页

作者：白红武白云峰胡肄农陆昌华王冉赵国华冯国兴薛渊崔娥吕海云江苏省农业科学院农业资源与环境研究所江苏南京210014 江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 江苏省农业科学院食品质量安全检测研究所江苏南京210014 上海盛锐软件技术有限公司上海201203 江苏省农业科技实业总公司江苏南京210014 上海生物电子标识有限公司上海200231 南京高通科技发展有限公司江苏南京210002

世界动物疫情在最近10多年来不断暴发,给人民身体健康带来严重危害,影响全球畜牧业发展.为此,各国政府迅速制定政策,加强动物的管理,其中动物识别与跟踪是重大措施之一.例如,英国政府规定对牛、猪、羊、马等饲养动物均必须采取跟踪与识... 详细信息

世界动物疫情在最近10多年来不断暴发,给人民身体健康带来严重危害,影响全球畜牧业发展.为此,各国政府迅速制定政策,加强动物的管理,其中动物识别与跟踪是重大措施之一.例如,英国政府规定对牛、猪、羊、马等饲养动物均必须采取跟踪与识别手段[1-2];澳大利亚的"国家牲畜认证系统"(NLIS),规定澳大利亚境内所有牛均使用全国统一编码、统一外形、内置感应芯片的耳标,存储在耳标芯片中的号码是不可改变的,可以扫描记录并存储到全国牛NLIS数据库中[3].中国政府从2002年开始逐步实行动物免疫标

关键词： RFID 电子耳标种猪

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