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第六届(2016)中国兔业发展大会

作者：王芳陈萌萌宋艳华范志宇胡波魏后军仇汝龙徐为中薛家宾江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京 210014

兔出血症病毒(RHDV)可引起兔病毒性出血症(RHD).RHD是一种急烈性、高度致死性兔传染病,给家兔养殖业造成巨大经济损失.2010年,研究人员在法国兔场发现一种新型兔出血症病毒RHDV2.与经典RHDV不同,该毒株能够感染幼龄家兔,甚至跨物种感染... 详细信息

兔出血症病毒(RHDV)可引起兔病毒性出血症(RHD).RHD是一种急烈性、高度致死性兔传染病,给家兔养殖业造成巨大经济损失.2010年,研究人员在法国兔场发现一种新型兔出血症病毒RHDV2.与经典RHDV不同,该毒株能够感染幼龄家兔,甚至跨物种感染野兔,并突破经典RHDV疫苗的免疫防线,迅速在世界范围内流行.目前中国还未有RHDV2的报道,但随时面临发生该疫情的风险.本文综述RHDV2的病原学、流行病学特征、临床症状、诊断和防控等方面的研究进展,旨在提高对RHDV2的认识,加强对RHDV2的监测,提前做好防控措施.

关键词：兔出血症病毒毒株流行病学特征临床表现病理诊断疾病防控

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快速鉴别兔出血症病毒经典毒株和变异毒株RT-PCR方法的建立

快速鉴别兔出血症病毒经典毒株和变异毒株RT-PCR方法的建立

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第六届(2016)中国兔业发展大会

作者：宋艳华魏后军范志宇左园园胡波仇汝龙陈萌萌李明勇薛家宾徐为中王芳江苏省农业科学院兽医研究所·农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心南京 210014 山东青岛康大欧洲兔业育种有限公司青岛 266400

本研究旨在建立鉴别兔出血症病毒经典毒株和变异毒株的RT-PCR检测方法,根据GenBank中经典RHDV和RHDV2的VP60基因序列,设计两对分别结合两种基因的特异性引物.利用两对引物,以人工合成RHDV2VP60基因构建的pMD19-T-VP60-2和本实验室保存... 详细信息

本研究旨在建立鉴别兔出血症病毒经典毒株和变异毒株的RT-PCR检测方法,根据GenBank中经典RHDV和RHDV2的VP60基因序列,设计两对分别结合两种基因的特异性引物.利用两对引物,以人工合成RHDV2VP60基因构建的pMD19-T-VP60-2和本实验室保存含经典RHDVVP60基因的pMD19-T-VP60为模板,进行反应条件的优化、敏感性试验、特异性试验以及RHDV人工感染样品和疑似临床样品的检测.结果显示,该方法具有良好的特异性和敏感性;经典RHDV和RHDV2的检测限度分别为95和76个拷贝的靶基因片段,且支气管败血波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、产气荚膜梭菌、大肠杆菌等病原以及重组质粒pMD19-T-EBHSV的检测结果均为阴性;RHDV人工感染的组织样品检出率为100％;检测临床样品15份,其中3份为经典RHDV阳性,其他样品均为经典RHDV及RHDV2阴性.该方法的建立能够实现快速、特异及敏感地检测RHDV和RHDV2,为监测RHDV变异株的流行情况提供技术支撑.

关键词：兔出血症经典毒株变异毒株鉴别诊断 RT-PCR检测

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兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌复合PCR方法的建立及临床应用

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江苏农业学报 2015年第2期31卷 376-381页

作者：范志宇魏后军胡波宋艳华王芳薛家宾徐为中苏国清江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

根据Gen Bank中多杀性巴氏杆菌ATP合成酶基因(atp B)的保守序列设计特异性引物,建立巴氏杆菌PCR检测方法,并与已建立的支气管败血波氏杆菌PCR检测方法进行合并,经反应条件的优化,成功建立多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌复合PCR诊... 详细信息

根据Gen Bank中多杀性巴氏杆菌ATP合成酶基因(atp B)的保守序列设计特异性引物,建立巴氏杆菌PCR检测方法,并与已建立的支气管败血波氏杆菌PCR检测方法进行合并,经反应条件的优化,成功建立多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌复合PCR诊断方法。该方法检出的最小多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌菌数分别为40 CFU和4 CFU;对兔源产气荚膜梭菌、大肠杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、猪鼻支原体、链球菌的检测结果均为阴性,说明该方法具有良好的特异性。用该方法对中国4个省份采集的临床鼻拭子样本共712份进行检测,结果显示,多杀性巴氏杆菌阳性率为25.56%,支气管败血波氏杆菌阳性率为34.55%,双阳性率为13.20%。该复合PCR方法能快速、敏感地从家兔鼻拭子样品中检出多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌,为临床疾病检测和流行病学调查提供了技术保障。

关键词：兔支气管败血波氏杆菌多杀性巴氏杆菌复合PCR

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动物疫病损失模型及治疗的经济评估模型构建

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家畜生态学报 2015年第6期36卷 5-10页

作者：陆昌华胡肄农谭业平臧一天朱学锋江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

借鉴国外在动物卫生经济学方面应用的成功经验,探讨养猪场疫病发生造成巨大经济损失问题。通过疫病对种猪生产性能和育肥猪生产能力的损害,从兽医角度与经济角度两个方面去考虑:剖析诸因素相互间的关系及对猪只的经济影响,构建适宜地数... 详细信息

借鉴国外在动物卫生经济学方面应用的成功经验,探讨养猪场疫病发生造成巨大经济损失问题。通过疫病对种猪生产性能和育肥猪生产能力的损害,从兽医角度与经济角度两个方面去考虑:剖析诸因素相互间的关系及对猪只的经济影响,构建适宜地数学模型,为不同疫病对猪只造成的不同经济损失进行计算。以决策树法建立治疗控制措施的经济评估模型,对患某一种疫病的猪只做出治疗与否的最优辅助决策。并以江苏某大型规模化猪场为案例,运用成本收益分析对猪场2010-2012年疫病防控投入与产出进行估算和衡量。提出防控资源配置优化的建议。

关键词：疫病猪场经济评估治疗模型

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一步法SYBR Green实时定量RT-PCR检测坦布苏病毒方法的建立

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江苏农业学报 2015年第4期31卷 829-833页

作者：刘青涛李银赵冬敏刘宇卓黄欣梅杨婧韩凯凯安凤娇江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为建立快速检测坦布苏病毒（Tembusu virus，TMUV）的一步法SYBRGreen实时定量RT-PCR方法，本研究根据TMUVNS2A基因的保守序列，设计并合成了1对特异性引物，以体外转录的NS2A基因作为标准品，采用一步法实时定量RT-PCR方法检测TMUV。... 详细信息

为建立快速检测坦布苏病毒（Tembusu virus，TMUV）的一步法SYBRGreen实时定量RT-PCR方法，本研究根据TMUVNS2A基因的保守序列，设计并合成了1对特异性引物，以体外转录的NS2A基因作为标准品，采用一步法实时定量RT-PCR方法检测TMUV。结果显示该方法标准曲线的决定系数为0．997，具有良好的线性关系；灵敏度为1ul10拷贝，是常规RT-PCR方法的100倍；并且与其他病毒无交叉反应，批内和批间变异系数分别为0．11％～0．30％和0．88％～1．31％，具有良好的特异性和稳定性。该方法对于TMUV人工感染鸭泄殖腔棉拭子的检测阳性率为100％，而常规RT-PCR检测的阳性率只有71％。因此，本研究所建立的一步法实时定量RT-PCR方法灵敏度高、重复性、特异性好，可以用于TMUV的临床检测。

关键词：坦布苏病毒实时定量RT-PCR NS2A基因

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兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗安全性及效力试验

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江苏农业科学 2015年第11期43卷 272-275页

作者：范志宇魏后军胡波宋艳华王芳薛家宾江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

本研究旨在对实验室制备的兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗的安全性和效力进行全面系统的研究。实验室制备了5批次兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗,按照现行《中国兽药典》附录对疫苗进行了性状、无菌检验、甲醛残留量、安全及效力... 详细信息

本研究旨在对实验室制备的兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗的安全性和效力进行全面系统的研究。实验室制备了5批次兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗,按照现行《中国兽药典》附录对疫苗进行了性状、无菌检验、甲醛残留量、安全及效力试验。结果显示,5批次疫苗无菌检验、甲醛残留量均合格;疫苗对肉兔、獭兔、毛兔3个品种家兔均安全,接种疫苗后30、60 d,剖检注射部位未见炎症反应,疫苗吸收良好,并且疫苗对怀孕母兔、未断奶仔兔、断奶幼兔也安全;对肉兔各项生产性能也没有影响,说明该疫苗具有较好的安全性。疫苗免疫21 d后,易感家兔和母兔均能抵抗兔出血症强毒攻击,说明该疫苗免疫原性良好。

关键词：兔出血症病毒杆状病毒灭活疫苗安全性试验效力试验

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肉兔阶段性使用抗球虫药物的可行性研究

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畜牧与兽医 2015年第10期47卷 121-123页

作者：魏后军范志宇薛家宾王芳胡波宋艳华胡春晖江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 江苏省金陵种兔场江苏南京211103

对妊娠期前3周母兔及56-80日龄幼兔不给球虫药进行了可行性研究。在相同的饲养管理条件下,试验组妊娠期前3周母兔及56-80日龄幼兔饲喂不加药的饲料,其余时间饲喂含地克珠利1 mg/kg的饲料;同时设对照组,饲喂添加地克珠利1 mg/kg的饲料,... 详细信息

对妊娠期前3周母兔及56-80日龄幼兔不给球虫药进行了可行性研究。在相同的饲养管理条件下,试验组妊娠期前3周母兔及56-80日龄幼兔饲喂不加药的饲料,其余时间饲喂含地克珠利1 mg/kg的饲料;同时设对照组,饲喂添加地克珠利1 mg/kg的饲料,比较不同时期试验兔死亡情况、球虫卵囊数及增重情况。结果显示：试验组及对照组均未发生球虫病,增重与对照组差异不显著（P〉0.05）。研究表明,妊娠期前3周母兔及56-80日龄幼兔不给抗球虫药是可行的,能降低成本,减少兔肉药物残留,提高经济效益。

关键词：肉兔兔球虫病地克珠利

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6日龄雏鸡混合感染坦布苏病毒和多杀性巴氏杆菌的病原学研究

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江西农业学报 2015年第4期27卷 81-84页

作者：刘宇卓宋子梁李银黄欣梅赵冬敏韩凯凯杨婧江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

对一例疑似坦布苏病毒和多杀性巴氏杆菌混合感染的6日龄鸡进行病原的分离鉴定。用套氏RT-PCR方法和常规细菌分离鉴定方法进行病毒、细菌的分离、鉴定,并对其病原的主要生物学特性进行了研究。结果表明:病毒经鉴定为坦布苏病毒,与鹅源坦... 详细信息

对一例疑似坦布苏病毒和多杀性巴氏杆菌混合感染的6日龄鸡进行病原的分离鉴定。用套氏RT-PCR方法和常规细菌分离鉴定方法进行病毒、细菌的分离、鉴定,并对其病原的主要生物学特性进行了研究。结果表明:病毒经鉴定为坦布苏病毒,与鹅源坦布苏病毒JS804株核苷酸同源性达99%;分离到的细菌为多杀性巴氏杆菌。细菌对鸡的回归试验显示,0.1mL的菌液可致20周龄SPF鸡死亡;对6周龄Balb/c小鼠的致病性试验结果表明,含约10 CFU的毒液即可在24h内致其4/4死亡。

关键词：雏鸡坦布苏病毒多杀性巴氏杆菌

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兔源多杀性巴氏杆菌C_(51-17)株ompA基因表达与免疫原性鉴定

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安徽农业科学 2015年第35期43卷 227-228,237页

作者：徐为中王芳胡波范志宇魏后军宋艳华薛家宾仇汝龙刘星江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

[目的]研究兔源多杀性巴氏杆菌C_(51-17)株omp A基因表达与蛋白免疫原性鉴定。[方法]根据Gen Bank公布的多杀性巴氏杆菌序列AE004439设计引物,经PCR扩增出兔源多杀性巴氏杆菌外膜蛋白omp A基因,开放阅读框包含1 062 bp碱基,插入到p GEX-... 详细信息

[目的]研究兔源多杀性巴氏杆菌C_(51-17)株omp A基因表达与蛋白免疫原性鉴定。[方法]根据Gen Bank公布的多杀性巴氏杆菌序列AE004439设计引物,经PCR扩增出兔源多杀性巴氏杆菌外膜蛋白omp A基因,开放阅读框包含1 062 bp碱基,插入到p GEX-6p-1质粒,构建成功重组表达载体p GEX-domp A,转入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导高效表达出多杀性巴氏杆菌成熟重组外膜蛋白omp A。[结果]表达产物经SDS-PAGE分析,重组多杀性巴氏杆菌外膜蛋白omp A分子量在63 ku,Western blot分析显示,重组蛋白能与兔抗多杀性巴氏杆菌高免血清呈现免疫反应,表明表达的重组蛋白具有较好的免疫活性。[结论]获得的重组蛋白为家兔多杀性巴氏杆菌病诊断试剂盒和疫苗的进一步研究奠定基础。

关键词：兔多杀性巴氏杆菌 ompA 原核表达

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兔源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定

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安徽农业科学 2015年第33期43卷 108-109,145页

作者：徐为中王芳胡波范志宇魏后军宋艳华薛家宾仇汝龙刘星江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

从送检病死兔肺和肝中分离培养出5株细菌,经过细菌培养、染色镜检、生化试验、PCR鉴定和动物致病性试验对其进行鉴定。鉴定结果表明,分离到的菌株为荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌,对小鼠有较强的致病性。药敏试验结果表明,分离菌株对环丙... 详细信息

从送检病死兔肺和肝中分离培养出5株细菌,经过细菌培养、染色镜检、生化试验、PCR鉴定和动物致病性试验对其进行鉴定。鉴定结果表明,分离到的菌株为荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌,对小鼠有较强的致病性。药敏试验结果表明,分离菌株对环丙沙星、氧氟沙星、氟苯尼考、恩诺沙星和磺胺六甲氧嘧啶等药物敏感。

关键词：兔多杀性巴氏杆菌荚膜血清A型分离鉴定

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