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生态环境与畜牧业可持续发展学术研讨会暨中国畜牧兽医学会2012年学术年会和第七届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会会议

作者：陆昌华胡肄农江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

中国的畜禽养殖业经过持续多年的快速发展,取得了令人瞩目的成绩。畜禽养殖业的发展在大大提高人们生活水平的同时,也给环境保护带来巨大压力。近年来,随着畜禽养殖业的经营方式和饲养规模发生的重大变化,畜禽养殖业日益朝着规模化方向... 详细信息

中国的畜禽养殖业经过持续多年的快速发展,取得了令人瞩目的成绩。畜禽养殖业的发展在大大提高人们生活水平的同时,也给环境保护带来巨大压力。近年来,随着畜禽养殖业的经营方式和饲养规模发生的重大变化,畜禽养殖业日益朝着规模化方向发展。规模化的畜禽养殖场产生的粪便污水量大而集中,未经处理即直接予以排放,养殖场周围没有相应的土地对畜禽粪便进行消化,传统的有机肥被大量的化肥代替,畜禽粪便还田利用率低。种植业与养殖业相分离,使得畜禽粪便由农业的"宝"变为环境的"废",致使环境污染问题日益严重,严重影响了畜牧业持续健康发展,极大威胁公共卫生安全,对人类文明产生了重大冲击,唤醒了全球对食品安全问题的关注。自世界贸易组织(WTO)和实施卫生和植物卫生措施(SPS协议)签署之后,风险分析已成为动物卫生管理领域的重要决策工具。WTO和世界动物卫生组织(OIE)力促各成员国应用风险分析技术。预防和控制重大动物疫病、提高动物源性食品安全水平、降低养殖业对环境的污染等,已成为全球亟待解决的动物卫生管理领域的热点问题。针对中国不同畜禽生产模式的环境污染问题,如何有效控制,采用什么途径与方法来评价环境污染的风险?本文借鉴国外经验,侧重用动物卫生风险分析思路浅析畜禽养殖业的环境污染风险。它包括危害识别、风险评估、风险管理和风险交流4个方面,构成科学的框架。动物卫生风险分析是研究动物卫生安全风险的产生与发展,对畜牧业生产和公共卫生的危害,以及人类如何有效控制风险的一门新型科学。其目的是有效预防和控制动物疫病、保障动物性食品安全和降低养殖业对环境的污染。同时简要介绍了国外畜牧业发达国家对环境风险的评价方法。提出亟需加强畜禽养殖对环境污染的风险评估研究。指出动物卫生风险分析与环境风险评价存在学科交叉互补优势,将其应用于畜禽养殖对生态环境污染的风险评估关键技术及应用研究,前景广阔,将为打造生态高效现代畜牧业提供科技支撑。

关键词：动物卫生风险分析畜禽养殖业环境污染

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肠出血性大肠杆菌O157:H7Tir基因的克隆、表达及生物学活性研究

肠出血性大肠杆菌O157:H7Tir基因的克隆、表达及生物学活性研究

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：张雪寒何孔旺周俊明温立斌茅爱华倪艳秀郭容利俞正玉吕立新江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

克隆、表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7转位紧密素受体(Tir)基因,并研究其抗原性.选用pET28原核表达载体,体外构建Tir原核表达重组菌,并在大肠杆菌中获得高效表达.以Tir免疫家兔获得了高效价多克隆抗体,Western blot分析此抗体能与Ti... 详细信息

克隆、表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7转位紧密素受体(Tir)基因,并研究其抗原性.选用pET28原核表达载体,体外构建Tir原核表达重组菌,并在大肠杆菌中获得高效表达.以Tir免疫家兔获得了高效价多克隆抗体,Western blot分析此抗体能与Tir发生特异性抗原抗体反应.选用Hep-2细胞对Tir重组蛋白进行粘附特性分析,表达Tir蛋白能够抑制O157:H7对Hep-2细胞的粘附.表达Tir蛋白免疫Balb/c小鼠,并进行攻毒保护评价,结果显示表达Tir蛋白具有良好的免疫原性和反应性和一定的免疫保护性.在大肠杆菌中成功克隆表达了Tir基因,所获Tir具有良好的抗原性,可能用于肠出血性大肠杆菌0157基因工程疫苗的研究。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7 转位紧密素受体基因表达免疫保护

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大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制

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中国动物传染病学报 2010年第4期18卷 47-53页

作者：夏兴霞王永山孟祥升朱国强张雪寒何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 扬州大学兽医学院扬州225009

用***157∶H7菌体免疫BALB/c鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了16株分泌单克隆抗体（mAb）的杂交瘤细胞株。其中,1D3、2E7和2H7三株为O157∶H7特异单克隆抗体,Ig亚类分别为IgMκ、IgG2bκ和IgG2bκ,腹水抗体ELISA效价分别... 详细信息

用***157∶H7菌体免疫BALB/c鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了16株分泌单克隆抗体（mAb）的杂交瘤细胞株。其中,1D3、2E7和2H7三株为O157∶H7特异单克隆抗体,Ig亚类分别为IgMκ、IgG2bκ和IgG2bκ,腹水抗体ELISA效价分别为103、105和106。用纯化的单克隆抗体2E7标记胶体金,制备金标抗体玻璃纤维素膜;将纯化的2H7和羊抗鼠IgG分别作为检测和对照捕捉抗体包被于硝酸纤维素膜（NC）上;组装成双抗夹心法O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条。用该试纸条可特异检测O157∶H7,敏感度为106CFU/mL,与相同单克隆抗体2H7和2E7建立的O157∶H7夹心ELISA检测方法的敏感度相当,试纸条简便快速,在1~5 min内可得出检测结果,便于O157∶H7的临床快速诊断与现场检测样品的快速筛查。

关键词：大肠杆菌O157∶H7 单克隆抗体胶体金免疫层析试纸条人兽共患病

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犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因在昆虫细胞中的表达及其抗原性分析

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中国动物传染病学报 2011年第5期19卷 21-26页

作者：毕振威王永山范红结江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京农业大学动物医学院南京210095

将非典型犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)的核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,N)基因克隆到杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHTA中,构建含N基因的重组供体质粒pFastBac-N,转化*** DH10Bac感受态细胞,经筛选获得含N基因的重组Bacmid DNA(rBacmid-N),脂质体法转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒vBacmid-N。用vBacmid-N感染昆虫细胞Sf9,免疫印迹(Western blot)分析,在62kDa处出现一条特异蛋白条带,与重组N蛋白的理论值相符合;间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescent assay,IFA)检测,vBacmid-N感染的昆虫细胞sf9出现特异绿色荧光。以纯化的重组N蛋白为抗原建立CDV抗体间接ELISA检测方法,犬CDV阳性血清A450大于0.40,而犬CDV阴性血清A450小于0.05,显示了良好的抗原特异性与稳定性。

关键词：犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因昆虫细胞真核表达杆状病毒

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鸭瘟病毒PCR检测方法的建立

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浙江农业学报 2010年第6期22卷 750-753页

作者：魏雪涛张晓勇李银刘宇卓张敬峰聂文军江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 浙江省嘉兴市出入境检验检疫局浙江嘉兴314001 南京市浦口区兽医站江苏南京211800

根据GenBank发表的鸭瘟病毒(DPV)的基因序列,设计了针对DPV UL6 UL7保守区1对特异性引物。通过对反应条件的优化,建立了鸭瘟病毒快速鉴别诊断的PCR方法,扩增片段大小为1 293 bp。试验结果表明PCR法具有很强的特异性,且敏感性较高,最低DN... 详细信息

根据GenBank发表的鸭瘟病毒(DPV)的基因序列,设计了针对DPV UL6 UL7保守区1对特异性引物。通过对反应条件的优化,建立了鸭瘟病毒快速鉴别诊断的PCR方法,扩增片段大小为1 293 bp。试验结果表明PCR法具有很强的特异性,且敏感性较高,最低DNA模板检出量为15 pg/mL。对鸭瘟的临床病料检测证明,该方法具有特异、快速和敏感的特点,可有效鉴别DPV。

关键词：鸭瘟病毒 PCR 检测

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大肠杆菌0157:H7单克隆抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制

大肠杆菌0157:H7单克隆抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制

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2011年中国微生物学会学术年会暨中国微生物学会第十次全国会员代表大会

作者：夏兴霞王永山孟祥升张雪寒何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心，南京 210014

用*** O157：H7菌体免疫BALB/c鼠,，制备免疫脾细胞，与SP2/0骨髓瘤细胞融合，获得了16株分泌单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株。其中，1D3、2E7和2H7三株为0157：H7特异单克隆抗体，Ig亚类分别为IgMK、IgG2bK和IgG2bK，腹水抗体ELISA效... 详细信息

用*** O157：H7菌体免疫BALB/c鼠,，制备免疫脾细胞，与SP2/0骨髓瘤细胞融合，获得了16株分泌单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株。其中，1D3、2E7和2H7三株为0157：H7特异单克隆抗体，Ig亚类分别为IgMK、IgG2bK和IgG2bK，腹水抗体ELISA效价分别为103、105和106。用胶体金标记纯化的单克隆抗体2E7，制备金标抗体玻璃纤维素膜;将纯化的2H7和羊抗鼠IgG分别作为检测和对照捕捉抗体包被于硝酸纤维素膜(NC)上;组装成双抗夹心法0157：H7胶体金免疫层析检测试纸条。用该试纸条可特异检测0157：H7，敏感度为106cFU/ml，与相同单克隆抗体2H7和2E7建立的0157：H7夹心ELISA检测方法的敏感度相当，试纸条简便快速，在1-5min内可得出检测结果，便于0157：H7的临床快速诊断与现场检测样品的快速筛查。

关键词：大肠杆菌单克隆抗体胶体金免疫层析检测试纸条

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用于猪个体身份识别和猪肉产品溯源的基因条形码研究

用于猪个体身份识别和猪肉产品溯源的基因条形码研究

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中国畜牧兽医学会信息技术分会2013年学术研讨会

作者：胡肄农邢光东陆昌华江苏省农业科学院兽医研究所、农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室、国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

目的:究用于猪个体身份识别和猪肉产品溯源的基因条形码编制方法.方法:建立微量猪毛毛囊细胞基因组DNA模板制备方法和猪基因组SNP高通量筛选方法;建立SNP位点的数字表达方法.结果:筛选出10个以上可特异扩增且扩增产物包含多个高杂合度SN... 详细信息

目的:究用于猪个体身份识别和猪肉产品溯源的基因条形码编制方法.方法:建立微量猪毛毛囊细胞基因组DNA模板制备方法和猪基因组SNP高通量筛选方法;建立SNP位点的数字表达方法.结果:筛选出10个以上可特异扩增且扩增产物包含多个高杂合度SNP位点的基因片段,使用于猪溯源所需的基因SNP位点达到50个以上;将SNP位点组合成SNP条形码,用阿拉伯数字0～9唯一替代SNP条形码中的10种SNP基因型:A/A、T/T、G/G、c/c、A/T、A/G、A/C、T/G、T/C、G/C,形成相应的数字条形码,实现动物个体身份与条形码的一一对应.结论:所筛选的SNP位点可实现猪的个体身份识别和产品溯源,建立的SNP条形码及相应的数字条形码,可用于猪个体身份识别和猪肉产品溯源的实现.

关键词：猪基因条形码身份识别产品质量

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H9亚型禽流感病毒静脉注射攻击鸭的试验研究

H9亚型禽流感病毒静脉注射攻击鸭的试验研究

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第一次全国鸭病防控高级研讨会

作者：刘宇卓李银张敬峰黄欣梅赵冬敏江苏省农业科学院兽医研究所·农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心，南京 210014

取H9亚型禽流感NJ05株及F株病毒液，静脉注射攻击易感鸭，并用SPF鸡胚分离攻毒后1-5天喉拭子，研究病毒在鸭体内的复制情况。研究结果表明：NJ05株攻毒后1-5天病毒分离阳性情况为0／10、0／10、8／10、6／10、0／10、F株为7／10、8／10... 详细信息

取H9亚型禽流感NJ05株及F株病毒液，静脉注射攻击易感鸭，并用SPF鸡胚分离攻毒后1-5天喉拭子，研究病毒在鸭体内的复制情况。研究结果表明：NJ05株攻毒后1-5天病毒分离阳性情况为0／10、0／10、8／10、6／10、0／10、F株为7／10、8／10、10／10、2／10、4／10。

关键词： H9亚型禽流感静脉注射易感鸭

来源：评论

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一株鹅源副粘病毒分离株全基因组序列的克隆与序列分析

一株鹅源副粘病毒分离株全基因组序列的克隆与序列分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：魏雪涛李银刘宇卓张敬峰江苏省农业科学院兽医研究所.农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室.国家兽用生物制品工程技术研究中心南京 210014

从发病的鹅分离到一株鹅源副粘病毒(GPMV)，血清学鉴定表明该分离病毒为禽副粘病毒-Ⅰ型(PMV-Ⅰ)。运用RT-PCR方法荻取了E01株鹅副粘病毒全基因组序列，并对其进行了比较分析。此株鹅副粘病毒(E01)的全基因组序列由15192个碱基组成，与... 详细信息

从发病的鹅分离到一株鹅源副粘病毒(GPMV)，血清学鉴定表明该分离病毒为禽副粘病毒-Ⅰ型(PMV-Ⅰ)。运用RT-PCR方法荻取了E01株鹅副粘病毒全基因组序列，并对其进行了比较分析。此株鹅副粘病毒(E01)的全基因组序列由15192个碱基组成，与鸡NDV一致，基因由6个ORF组成，3’-NP-P-M-F-HN-L-5’，但是在NP基因和P基因之间的非翻译区多了6个核苷酸ACACTC。测序后拼接的F基因长1672bp，包含完整的开放阅读框(1662bp)，编码553个氨基酸，F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为112R-R-Q-K-R-F117，具有强毒株序列特性，同时也与本实验分离该株鹅副粘病毒分离株致病性试验结果相符。根据NDV基因分型标准，鹅副粘病毒E01株归属基因Ⅷ型副粘病毒。F基因与国内外NDV代表株的核苷酸同源性为80.9％～97.7％测序后拼接的HN基因长为1716 bp，编码571个氨基酸，与国内外NDV代表株的核苷酸同源性为80.0％～98.1％。

关键词：鹅源副粘病毒基因序列遗传变异 F蛋白

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我国鸡传染性支气管炎流行现状及疫苗使用

我国鸡传染性支气管炎流行现状及疫苗使用

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：刘宇卓李银魏雪涛张敬峰江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京 210014

因鸡传染性支气管炎病毒血清型众多，目前已报道的血清型有30余种，不同血清型毒株在毒力、致病性和组织嗜性上存在着很大差异，相互间没有或仅有部分交叉免疫性，同时新的血清型不断出现，尤其是近些年，国内广泛地流行H9亚型禽流感,... 详细信息

因鸡传染性支气管炎病毒血清型众多，目前已报道的血清型有30余种，不同血清型毒株在毒力、致病性和组织嗜性上存在着很大差异，相互间没有或仅有部分交叉免疫性，同时新的血清型不断出现，尤其是近些年，国内广泛地流行H9亚型禽流感,在临床表现上也有相似的呼吸道及产蛋鸡产蛋下降的症状，同时，临床上混合感染的增加，给鸡传染性支气管病的诊断带来了诸多困难，因此，加强免疫预防显得尤为重要。本文将国内外常见的血清型、免疫特点及常用疫苗使用情况进行了介绍。

关键词：鸡传染性支气管炎临床表现血清诊断免疫预防疫苗使用

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