检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：欧阳伟王永山周宇张海彬唐雨德江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院南京军区军事医学研究所

将近期引起IBD免疫预防失败的传染性法氏囊病病毒(IBDV)vp2基因,定向克隆入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建重组供体质粒pFastBacHTA-VP2,转化Escherichia coli DH10Bac感受态,筛选重组杆状病毒表达质粒pBac-VP2。用pBac-... 详细信息

将近期引起IBD免疫预防失败的传染性法氏囊病病毒(IBDV)vp2基因,定向克隆入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建重组供体质粒pFastBacHTA-VP2,转化Escherichia coli DH10Bac感受态,筛选重组杆状病毒表达质粒pBac-VP2。用pBac-VP2转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒vBac-VP2。对重组杆状病毒vBac-VP2感染的Sf9细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)检测,具有特异性荧光;用IBDV抗体夹心ELISA检测,呈阳性反应,抗原效价达到1.6×103;用Western blotting分析,在53kDa处出现一条特异蛋白条带;电镜观察,重组Vp2蛋白能够自组装成病毒样颗粒,在感染细胞中发现了"包涵体样"结构。用HisTrap HP亲和层析柱纯化的重组Vp2蛋白作为包被抗原,建立的IBDV抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性。用重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞裂解物,免疫2周龄SPF鸡,一次免疫14d后,ELISA检测抗体效价为8×102,中和抗体效价为1106,攻毒实验的存活率为30%;二次免疫14d后,ELISA抗体效价为3.2×103,中和抗体效价为2536,存活率为100%。在实验观察7d内,重组Vp2蛋白免疫保护鸡未显任何临床症状和病理变化,法氏囊/体重比高于对照组(P<0.05)。本实验制备的病毒样颗粒重组Vp2蛋白在研制新型IBD基因工程疫苗和检测试剂方面显示出了应用前景。

关键词：传染性法氏囊病病毒 Vp2基因病毒样颗粒包涵体样结构间接ELISA 免疫实验

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IBDV抗原表位与HBcAg嵌合基因的分子设计及其表达产物分析

IBDV抗原表位与HBcAg嵌合基因的分子设计及其表达产物分析

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第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛

作者：刘小娟王永山欧阳伟张海彬王晓丽王忠灿唐雨德江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院南京军区军事医学研究所

为了提高模拟IBDV多表位基因5epis的免疫效力,运用重叠延伸PCR技术,在乙型肝炎病毒核心抗原(Hepatitis B core antigen,HBcAg)基因的231位～232位核苷酸(77位～78位氨基酸残基)之间插入BamH I和EcoR I酶切位点,构建HBcAg修饰基因(Modifi... 详细信息

为了提高模拟IBDV多表位基因5epis的免疫效力,运用重叠延伸PCR技术,在乙型肝炎病毒核心抗原(Hepatitis B core antigen,HBcAg)基因的231位～232位核苷酸(77位～78位氨基酸残基)之间插入BamH I和EcoR I酶切位点,构建HBcAg修饰基因(Modified HBc,mHBc)表达质粒pET-mHBc。然后,将5epis基因定向插入到该表达质粒mHBc基因中,获得嵌合基因mHBc-5epis表达质粒pET-mHBc-5epis,并在大肠杆菌中表达。用SDS-PAGE分析,重组嵌合蛋白的分子量约为29kDa,表达量约占菌体总蛋白的47.6%;在Western-blotting试验中,重组嵌合蛋白与IBDV抗体反应形成1条特异性蛋白带。将重组菌超声破碎后,用电镜观察,可见重组嵌合蛋白呈病毒样颗粒(VLP),直径约60 nm～80 nm;用IBDV抗体夹心ELISA检测,抗原效价达到2.0×10～2。本研究成功构建了5epis与HBcAg嵌合基因,在大肠杆菌中高效表达了具有IBDV抗原反应性的重组嵌合蛋白并形成了VLP,具有成为颗粒化表位型IBD基因工程疫苗的应用前景。

关键词：传染性法氏囊病病毒(IBDV) 乙肝病毒核心抗原(HBcAg) 抗原表位嵌合基因

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近期引起免疫失败的传染性法氏囊病病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达

近期引起免疫失败的传染性法氏囊病病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会

作者：曹冰玉王永山范红结欧阳伟王忠灿唐雨德江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院南京军区军事医学研究所

为制备近期IBDV毒株的重组VP2蛋白,将近期安徽IBD免疫预防失败的病鸡法氏囊组织中扩增的VP2基因定向克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中,构建原核表达质粒pGEX-VP2,转化大肠杆菌Rosetta(DE3);经IPTG诱导后,用IBDV双抗体夹心ELISA检测,呈阳... 详细信息

为制备近期IBDV毒株的重组VP2蛋白,将近期安徽IBD免疫预防失败的病鸡法氏囊组织中扩增的VP2基因定向克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中,构建原核表达质粒pGEX-VP2,转化大肠杆菌Rosetta(DE3);经IPTG诱导后,用IBDV双抗体夹心ELISA检测,呈阳性反应;以SDS-PAGE分析,重组VP2融合蛋白的分子量为68ku,表达量约占菌体总蛋白的16.0%,表达产物主要以包涵体形式存在于菌体内;在Western-blotting中,重组VP2蛋白与IBDV抗体反应形成1条特异性蛋白带。本实验为研制针对近期流行IBDV毒株的新型基因工程疫苗和检测试剂奠定了基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒 IBDV VP2 原核表达

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近期引起免疫失败的传染性法氏囊病病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达

近期引起免疫失败的传染性法氏囊病病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达

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第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛

关键词：传染性法氏囊病病毒 IBDV VP2 原核表达

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IBDV抗原表位与VP2组合基因的分子构建及其在昆虫细胞中的表达

IBDV抗原表位与VP2组合基因的分子构建及其在昆虫细胞中的表达

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会

作者：周宇王永山范红结欧阳伟唐雨德王忠灿江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院南京军区军事医学研究所

运用PCR重叠延伸技术将传染性法氏囊病病毒(IBDV)多表位5e与VP2基因连接构建组合基因VP2-5e,将其插入到杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHT中,转化E-coli DH10Bac感受态细胞,经三抗性筛选获得重组杆状病毒表达质粒pBacHT-VP2-5e,用脂... 详细信息

运用PCR重叠延伸技术将传染性法氏囊病病毒(IBDV)多表位5e与VP2基因连接构建组合基因VP2-5e,将其插入到杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHT中,转化E-coli DH10Bac感受态细胞,经三抗性筛选获得重组杆状病毒表达质粒pBacHT-VP2-5e,用脂质体法转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒vBacHT-VP2-5e。对vBacHT-VP2-5e感染的Sf9细胞,以间接免疫荧光试验(IFA)检测,具有特异性荧光;电镜检查,重组VP2-5e蛋白能够自组装成病毒样颗粒(VLP);用免疫印迹分析(Western-blotting),在59kD处出现一条特异性蛋白条带。本实验为组合基因型重组IBD多价疫苗的研究奠定了基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒 VP2基因抗原表位组合基因表达

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鸡传染性法氏囊病病毒JSNJ株的分离鉴定及其部分特性研究

鸡传染性法氏囊病病毒JSNJ株的分离鉴定及其部分特性研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：王占伟王丽白方方孔猛韦艳娜刘冬阳邵国青刘茂军冯志新熊琪琰王海燕白昀吴叙苏甘源刘冬霞江苏省农业科学院兽医研究所·农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心·南京天邦生物科技有限公司江苏南京 210014 南京天邦生物科技有限公司江苏南京 210012 江苏省农业科学院兽医研究所·农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心·南京天邦生物科技有限公司江苏南京 210014

从江苏南京疑似传染性法氏囊病病毒感染的鸡场采集病料，通过临床症状、病理剖检变化、人工感染、SPF鸡胚接种、琼脂扩散试验和PCR扩增鉴定等，证实了该鸡场发生了鸡传染性法氏囊病，且从病料中分离到了纯净的传染性法氏囊病病毒。同时... 详细信息

从江苏南京疑似传染性法氏囊病病毒感染的鸡场采集病料，通过临床症状、病理剖检变化、人工感染、SPF鸡胚接种、琼脂扩散试验和PCR扩增鉴定等，证实了该鸡场发生了鸡传染性法氏囊病，且从病料中分离到了纯净的传染性法氏囊病病毒。同时，证实该毒株的毒力较强，具有标准毒株的理化特性，免疫原性也比较好。

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒分离鉴定敏感性试验免疫原性

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应用猪瘟抗原/血清ELISA测定猪瘟兔化弱毒疫苗中的病毒含量

应用猪瘟抗原/血清ELISA测定猪瘟兔化弱毒疫苗中的病毒含量

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：唐红慧王金虎周勇歧冯志新张道华刘茂军邵国青甘源刘冬阳刘冬霞刘大伟江苏省农业科学院兽医研究所·农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心·南京天邦生物科技有限公司江苏南京 210014 扬州大学兽医学院江苏扬州 225009 南京天邦生物科技有限公司江苏南京 211102 江苏省农业科学院兽医研究所·农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心·南京天邦生物科技有限公司江苏南京 210014

简单、快速地测定猪瘟病毒的含量是猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)生产工艺中难以解决的技术之一。本试验通过应用猪瘟抗原/血清ELISA试剂盒(IDEXX HerdCheckCo.)，对已知滴度的24份HCLV半成品细胞苗和21份成品疫苗进行抗原含量测定，结果24份H... 详细信息

简单、快速地测定猪瘟病毒的含量是猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)生产工艺中难以解决的技术之一。本试验通过应用猪瘟抗原/血清ELISA试剂盒(IDEXX HerdCheckCo.)，对已知滴度的24份HCLV半成品细胞苗和21份成品疫苗进行抗原含量测定，结果24份HCLV半成品细胞苗95.83％与兔体定型热反应结果相符，检测敏感性可达20头份/瓶(或109个病毒拷贝教/瓶)。但该方法无法区分猪瘟病毒抗原与牛流行性腹泻病毒抗原。试验结果证明，IDEXX猪瘟抗原/血清ELISA试剂盒能够稳定、快速、简单地用于HCLV细胞苗的半成品与成品的病毒含量测定，为疫苗生产的质量控制提供了一种可靠和稳定的方法。

关键词： HCLV ELISA HCLV半成品细胞苗 HCLV成品疫苗

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应用猪瘟抗原/血清ELISA测定猪瘟兔化弱毒疫苗中的病毒含量

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金陵科技学院学报 2010年第4期26卷 73-78页

作者：唐红慧杜希珍刘大伟王金虎冯志新张道华刘茂军邵国青江苏省农业科学院兽医研究所.农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室.国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 扬州大学兽医学院江苏扬州225009 北京爱德士元亨生物技术有限公司北京101300 南京天邦生物科技有限公司江苏南京210012

简单、快速地测定猪瘟病毒的含量是猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)生产工艺中难以解决的技术之一。本试验通过应用猪瘟抗原/血清ELISA试剂盒(IDEXX HerdCheck Co.),对已知滴度的24份HCLV半成品细胞苗和21份成品疫苗进行抗原含量测定,结果24份H... 详细信息

简单、快速地测定猪瘟病毒的含量是猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)生产工艺中难以解决的技术之一。本试验通过应用猪瘟抗原/血清ELISA试剂盒(IDEXX HerdCheck Co.),对已知滴度的24份HCLV半成品细胞苗和21份成品疫苗进行抗原含量测定,结果24份HCLV半成品细胞苗95.83%与兔体定型热反应结果相符,检测敏感性可达20头份/瓶(或病毒拷贝数109个/瓶)。但该方法无法区分猪瘟病毒抗原与牛流行性腹泻病毒抗原。试验结果证明,IDEXX猪瘟抗原/血清ELISA试剂盒能够稳定、快速、简单地用于HCLV细胞苗的半成品与成品的病毒含量测定,为疫苗生产的质量控制提供了一种可靠和稳定的方法。

关键词： HCLV ELISA HCLV半成品细胞苗 HCLV成品疫苗

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猪气喘病的防制

猪气喘病的防制

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：刘茂军邵国青周勇岐冯志新王海燕甘源江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京天邦生物科技有限公司江苏南京 210014 南京天邦生物科技有限公司江苏南京 211102

@@猪气喘病(猪支原体肺炎MPS猪地方性肺炎EPS，过去曾称病毒性肺炎或PPLO)是一种直接接触、慢性呼吸道传染病。木病的病原为猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp)，主要表现咳嗽、气喘及肺部肉样或肝样病变。猪气喘病在世界范... 详细信息

@@猪气喘病(猪支原体肺炎MPS猪地方性肺炎EPS，过去曾称病毒性肺炎或PPLO)是一种直接接触、慢性呼吸道传染病。木病的病原为猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp)，主要表现咳嗽、气喘及肺部肉样或肝样病变。猪气喘病在世界范围内广泛流行，发病率高、难根除，造成日增重及饲料效率降低。特别在现代高度集约化和机械化养猪环境中，单位面积养猪头数增加，使此病更易于蔓延和传播;本病的慢性病猪，易诱发其它呼吸道的疾病，引起猪呼吸疾病复合感染的综合症(PRDC),增加病死率，是造成养猪业经济损失很重要的疾病之一。

关键词：猪气喘病肺炎支原体疾病传染

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草鸡J亚群禽白血病病毒的PCR检测

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江西农业学报 2010年第3期22卷 5-7页

作者：张敬峰张晓勇赵毓郎魏雪涛李银刘宇卓江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 浙江嘉兴出入境检验检疫局浙江嘉兴314001 苏州出入境检验检疫局外来有害生物防控实验室江苏苏州215021

通过对GenBank发表的ALV的基因序列的分析,针对J型ALV保守区设计并合成1对特异性引物。通过对反应条件的优化,确定了检测ALV的PCR检测方法,对来源于江苏地区不同草鸡养殖基地的10份病料组织样本提取DNA进行PCR扩增。结果对疑似J亚群ALV... 详细信息

通过对GenBank发表的ALV的基因序列的分析,针对J型ALV保守区设计并合成1对特异性引物。通过对反应条件的优化,确定了检测ALV的PCR检测方法,对来源于江苏地区不同草鸡养殖基地的10份病料组织样本提取DNA进行PCR扩增。结果对疑似J亚群ALV病料和正常鸡肝脏组织的病原核酸检出率分别为90%和0,同时将扩增的目的基因进行克隆测序,并与GenBank中的参考毒株进行比较,结果表明目的基因片段序列长300 bp左右,与参考毒株核苷酸序列同源性为97%以上。试验表明,江苏地区草鸡群中确实存在J亚群鸡白血病病毒感染的情况。

关键词：鸡白血病病毒 PCR 检测

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