检索结果-内蒙古大学图书馆

华北农学报 2009年第4期24卷 31-35页

作者：温立斌何孔旺杨汉春郭容利周俊明钟书霖江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 中国农业大学动物医学院农业部预防兽医学重点开放实验室北京100094

该研究旨在建立快速、敏感和特异的检测类猪圆环病毒因子P1的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR法,用于P1的早期诊断。以感染P1的猪血清DNA提取物为模板,采用PCR扩增P1 101 bp的基因片段,将其克隆至pMD18-T载体,重组质粒测序并进行同源性分析;... 详细信息

该研究旨在建立快速、敏感和特异的检测类猪圆环病毒因子P1的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR法,用于P1的早期诊断。以感染P1的猪血清DNA提取物为模板,采用PCR扩增P1 101 bp的基因片段,将其克隆至pMD18-T载体,重组质粒测序并进行同源性分析;以阳性质粒为模板,建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法,并进行敏感性和特异性检测。经测序证实扩增片段属于P1,所建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测P1的反应在101-108拷贝/μL之间具有良好的线性关系,反应的检出下限为10拷贝/μL,而对猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等的检测为阴性,表明该方法敏感、特异。成功建立了SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测P1载量的方法,为P1致病机制和机体免疫保护机制的研究提供了技术平台。

关键词：类猪圆环病毒因子 P1 荧光定量PCR 熔解曲线检测

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猪链球菌2型IMPDH基因功能结构域的研究

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2009年第2期30卷 5-8页

作者：刘亚彬何孔旺倪艳秀周俊明张雪寒陆承平江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

在猪链球菌毒力相关基因orf2和mrp之间发现一个新的开放阅读框,经酶活性染色试验证实该阅读框编码的蛋白具有次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)活性,该阅读框共计957 bp,编码319个氨基酸。经Interpro和PHD软件分析,推测该蛋白的功能结构域存... 详细信息

在猪链球菌毒力相关基因orf2和mrp之间发现一个新的开放阅读框,经酶活性染色试验证实该阅读框编码的蛋白具有次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)活性,该阅读框共计957 bp,编码319个氨基酸。经Interpro和PHD软件分析,推测该蛋白的功能结构域存在于9~798 bp基因片段所编码的多肽中,特对这790个碱基依次缺失,以找寻酶的催化部位和底物结合部位。4个缺失基因和全长基因经过基因克隆,表达出5种相应的蛋白。免疫印迹证实这5种蛋白可被猪链球菌2型(SS2)的抗血清识别,且其中的4种蛋白含有IMPDH单抗(1A8)识别表位;通过活性染色,初步确定了SS2中IMDPH的催化部位和底物结合部位。

关键词：猪链球菌2型次黄嘌呤核苷酸脱氢酶结构域活性染色

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白介素2基因与猪圆环病毒2型ORF2基因真核双表达质粒的构建

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南京农业大学学报 2009年第1期32卷 100-104页

作者：潘群兴何孔旺温立斌郭容利黄克和江苏省农业科学院兽医研究所／农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室／国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

应用基因重组技术,构建猪圆环病毒2型ORF2基因与白介素2基因(IL-2)的真核双表达载体并将其转染CHO细胞,通过RT-PCR、间接ELISA、Western-blot、间接免疫荧光检测(IFA)等方法验证基因的表达情况。结果表明:成功构建了猪圆环病毒2型ORF2... 详细信息

应用基因重组技术,构建猪圆环病毒2型ORF2基因与白介素2基因(IL-2)的真核双表达载体并将其转染CHO细胞,通过RT-PCR、间接ELISA、Western-blot、间接免疫荧光检测(IFA)等方法验证基因的表达情况。结果表明:成功构建了猪圆环病毒2型ORF2基因和IL-2基因的真核双表达质粒pIRES-ORF2-IL-2,该质粒可在体外同时表达ORF2和IL-2。

关键词：猪圆环病毒2型 ORF2基因 IL-2基因 DNA疫苗

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刚地弓形虫NT株P30基因的克隆与表达

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江苏农业学报 2009年第1期25卷 147-150页

作者：张理航刘茂军吕芳李贺侠吴叙苏冯志新邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 金陵科技学院江苏南京211169

参考Genbank登录的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)P30全基因序列,设计合成1对引物,通过PCR在刚地弓形虫的基因组DNA中扩增出P30基因片段,然后构建重组表达质粒pET-32 a(+)/P30,用IPTG诱导,在表达菌BL21(DE3)表达出分子量为4.83×10... 详细信息

参考Genbank登录的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)P30全基因序列,设计合成1对引物,通过PCR在刚地弓形虫的基因组DNA中扩增出P30基因片段,然后构建重组表达质粒pET-32 a(+)/P30,用IPTG诱导,在表达菌BL21(DE3)表达出分子量为4.83×104的融合蛋白,经W estern-b lotting鉴定目的蛋白具有良好的免疫学活性,为刚地弓形虫疫苗的制备及猪弓形虫抗体ELISA检测方法的建立奠定了基础。

关键词：刚地弓形虫 P30基因克隆表达

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兔出血症病毒衣壳蛋白重组腺病毒的构建、表达及其免疫原性

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江苏农业学报 2009年第6期25卷 1320-1324页

作者：胡波王芳秦爱建范志宇徐为中张则斌薛家宾何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 扬州大学兽医学院江苏扬州225009

通过RT-PCR方法扩增上海地区兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白基因(VP60)。将其克隆入腺病毒表达载体系统中,构建成重组腺病毒质粒,用脂质体法转染HEK293细胞,得到重组病毒pAd-VP60,经RT-PCR、IFA、HA、SDS-PAGE和Western-blotting鉴定,结果... 详细信息

通过RT-PCR方法扩增上海地区兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白基因(VP60)。将其克隆入腺病毒表达载体系统中,构建成重组腺病毒质粒,用脂质体法转染HEK293细胞,得到重组病毒pAd-VP60,经RT-PCR、IFA、HA、SDS-PAGE和Western-blotting鉴定,结果表明重组VP60蛋白在HEK293细胞中获得表达。表达产物与铝胶佐剂混合后注射3月龄非免疫健康家兔,结果表明,免疫后21 d兔体内产生抗RHDV抗体,其HI效价可达2~6～2~7,能抵御HA≥2^(10)致死剂量RHDV强毒的攻击,保护率为100%。

关键词：兔出血症病毒重组腺病毒表达免疫原性

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类猪圆环病毒因子P1 VP2蛋白二级结构与B细胞表位预测

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华北农学报 2009年第5期24卷 45-49页

作者：温立斌何孔旺杨汉春王玉然江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 中国农业大学动物医学院农业部预防兽医学重点开放实验室北京100094 河北省动物卫生监督所河北石家庄050081

旨为预测类猪圆环病毒因子P1 VP2蛋白的B细胞表位。采用生物信息软件和互联网服务器,预测VP2的二级结构,分析VP2表面特性(亲水性、可塑性、可及性和抗原性),综合预测VP2的B细胞抗原表位。结果表明,P1VP2蛋白肽链的6-18和80-92区段为预测... 详细信息

旨为预测类猪圆环病毒因子P1 VP2蛋白的B细胞表位。采用生物信息软件和互联网服务器,预测VP2的二级结构,分析VP2表面特性(亲水性、可塑性、可及性和抗原性),综合预测VP2的B细胞抗原表位。结果表明,P1VP2蛋白肽链的6-18和80-92区段为预测的B细胞表位优势区。多参数方案综合预测P1 VP2蛋白的B细胞抗原表位,为进一步鉴定表位及设计疫苗奠定了基础。

关键词： P1 二级结构 B细胞表位生物信息学预测

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一株猪肺炎支原体强毒株的分离和鉴定

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江苏农业学报 2009年第2期25卷 308-310页

作者：刘茂军邵国青周勇岐苏国东王继春孙佩元冯志新刘冬霞江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京天邦生物科技有限公司江苏南京211102

从猪支原体肺炎病例病料中分离得到1株支原体,对其进行培养试验、代谢抑制试验、PCR鉴定和动物回归试验。分离株攻毒猪后,该猪出现典型的猪支原体肺炎临床症状和病变,证明该分离株为猪肺炎支原体。这为猪肺炎支原体的研究提供了条件。

关键词：猪肺炎支原体分离鉴定毒力

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Ghrelin对大鼠胃黏膜上皮细胞中H^＋ -K^＋ -ATP酶基因表达和活性的影响

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江苏农业学报 2009年第4期25卷 803-806页

作者：杜改梅刘茂军罗碧平蒋加进胡志华戴鼎震陈钟鸣金陵科技学院动物科学与技术学院江苏南京210038 江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为揭示Ghrelin对胃酸分泌的作用,从断奶大鼠中分离新鲜胃黏膜,培养胃黏膜上皮细胞,培养30 h后,试验组培养液更换为分别含有1×10-4μmol/L、1×10-3μmol/L、1×10-2μmol/L和1×10-1μmol/L Ghrelin的新鲜培养液,对照... 详细信息

为揭示Ghrelin对胃酸分泌的作用,从断奶大鼠中分离新鲜胃黏膜,培养胃黏膜上皮细胞,培养30 h后,试验组培养液更换为分别含有1×10-4μmol/L、1×10-3μmol/L、1×10-2μmol/L和1×10-1μmol/L Ghrelin的新鲜培养液,对照组换为不含Ghrelin的正常新鲜培养液。继续培养4 h后,收集培养液和细胞,分别测定细胞中H+-K+-ATPasemRNA表达和活性。结果表明:1×10-3μmol/LGhrelin可显著增加细胞中H+-K+-ATPasemRNA的表达(P<0.05),1×10-4μmol/L、1×10-3μmol/L和1×10-2μmol/L Ghrelin明显增加了胃黏膜上皮细胞中H+-K+-ATPase的活性。这表明Ghrelin体外作用于胃黏膜上皮细胞可刺激胃酸的分泌。

关键词： ghrelin 胃黏膜上皮细胞大鼠 H+-K+-ATPase

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动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ．分泌抗大肠杆菌O157：H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

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江苏农业学报 2009年第2期25卷 291-295页

作者：夏兴霞刘洁王永山诸玉梅欧阳伟何孔旺张雪寒江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

将*** O157：H7（EHEC—O157：H7）用甲醛灭活、超声破碎，免疫BALB／c小鼠，制备免疫脾细胞；与SP2／0骨髓瘤细胞融合后，获得7株分泌抗*** O157：H7单克隆抗体（mAbs）的杂交瘤细胞株，分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3，Ig亚... 详细信息

将*** O157：H7（EHEC—O157：H7）用甲醛灭活、超声破碎，免疫BALB／c小鼠，制备免疫脾细胞；与SP2／0骨髓瘤细胞融合后，获得7株分泌抗*** O157：H7单克隆抗体（mAbs）的杂交瘤细胞株，分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3，Ig亚类分别是IgG2ak、IgG2aK、IgG1K、IgMK、IgMh、IgMK和IgG2aK。用间接ELISA检测，E7和F1细胞培养上清液的效价为1．6×10^3，腹水效价均为1×10^11；C3、F5、B8、G9和G11细胞培养上清液的效价为1×10～2×10^2，腹水效价均为1×10^3。相加ELISA结果显示，F1、G9和G113株mAbs对应相同的抗原表位，而其它4株对应不同的抗原表位。用间接ELISA分析特异性，7株mAbs与某些其他血清型的大肠杆菌有交叉反应。Westernblotting表明，c3、E7和F13株mAbs在蛋白分子量28×10^3处有特异性条带，而其它4株mAbs则未显示蛋白带。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157∶H7 单克隆抗体(mAb) 生物制剂人兽共患病

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肠出血性大肠杆菌O157：H7 rfbE与fliC基因的表达及鉴定

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江苏农业学报 2009年第3期25卷 568-571页

作者：潘群兴王永山刘洁夏兴霞何孔旺张雪寒江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

利用PCR技术将肠出血性大肠杆菌O157∶H7的rfbE与fliC基因片段分别克隆到pET原核表达系统,在***21(DE3)中表达。结果显示rfbE、fliC以包涵体形式表达,表达产量高达总菌体蛋白的40%左右,经His-Bind镍柱纯化目的蛋白,在***21(DE3)中表达的... 详细信息

利用PCR技术将肠出血性大肠杆菌O157∶H7的rfbE与fliC基因片段分别克隆到pET原核表达系统,在***21(DE3)中表达。结果显示rfbE、fliC以包涵体形式表达,表达产量高达总菌体蛋白的40%左右,经His-Bind镍柱纯化目的蛋白,在***21(DE3)中表达的rfbE、fliC具有良好的免疫活性。

关键词：肠出血性大肠杆菌 rfbE flic 免疫活性

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