检索结果-内蒙古大学图书馆

中国畜牧兽医学会2009学术年会

作者：冯志新逯晓敏刘茂军吴叙苏甘源邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心山西农业大学动物科技学院

为更准确对猪肺炎支原体(Mhp)感染及免疫状况进行检测,本文以猪鼻拭子为检测样品,利用猪肺炎支原体粘附因子P97R1原核表达蛋白作为包被抗原;以羊抗猪IgA为二抗,兔抗猪IgG-HRP作为酶标三抗,建立Mhp sIgA间接ELISA检测方法(SIgA-ELISA)。... 详细信息

为更准确对猪肺炎支原体(Mhp)感染及免疫状况进行检测,本文以猪鼻拭子为检测样品,利用猪肺炎支原体粘附因子P97R1原核表达蛋白作为包被抗原;以羊抗猪IgA为二抗,兔抗猪IgG-HRP作为酶标三抗,建立Mhp sIgA间接ELISA检测方法(SIgA-ELISA)。通过对包被抗原的浓度,样品的孵育时间,封闭液,二抗与三抗的最佳稀释度和作用时间以及显色液的作用时间进行优化,摸索该方法的最佳反应条件。根据对260份Mhp SIgA阴阳性标准品的检测结果,利用Medcalcl软件确定了SIgA-ELISA检测方法的cut-off值。并将该方法与Mhp套式PCR检测方法以及商品化的Mhp抗体ELISA检测试剂盒(IgG-ELISA)进行平行比较,结果发现SIgA-ELISA方法对Mhp感染检测具有很高的敏感性(97.0%)、特异性(94.4%)与准确性(95.8%);且SIgA-ELISA方法与IgG-ELISA方法相比,能有效区分Mhp的感染与免疫。

关键词：猪肺炎支原体 SIgA 间接ELISA

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猪肺炎支原体黏附因子P97R1、膜蛋白P46单抗制备

猪肺炎支原体黏附因子P97R1、膜蛋白P46单抗制备

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：冯志新刘茂军王海燕甘源吴叙苏邵国青江苏省农业科学院兽医研究所.农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室.国家兽用生物制品工程技术研究中心.江苏省生物兽药筛选服务中心江苏南京 210014

目的：P46蛋白是猪肺炎支原体的主要免疫优势蛋白，且与其它支原体无交叉反应，常作为猪肺炎支原体检测的靶蛋白或靶基因。P97蛋白是猪肺炎支原体的黏附因子，与病原的感染与致病机制相关，其中R1区是P97蛋白的主要抗原决定簇。制备针... 详细信息

目的：P46蛋白是猪肺炎支原体的主要免疫优势蛋白，且与其它支原体无交叉反应，常作为猪肺炎支原体检测的靶蛋白或靶基因。P97蛋白是猪肺炎支原体的黏附因子，与病原的感染与致病机制相关，其中R1区是P97蛋白的主要抗原决定簇。制备针对该两种蛋白的特异性单抗能为猪肺炎支原体的检测及机理研究提供有效的资源。方法：本研究用猪肺炎支原体全菌抗原免疫小鼠，分别利用大肠杆菌表达的P46蛋白和P97R1蛋白作为筛选抗原制备P46与P97R1的单克隆抗体。结果：本研究成功制备了两株针对P46的特异性单克隆抗体1A4和3c11以及三株针对P97R1的特异性单克隆抗体2A10，6C4和6C5。两株P46单抗最高EusA效价可达1:64000，且均能与原核表达的P46蛋白及猪肺炎支原体全菌蛋白中46KD大小的蛋白发生特异性反应.但配对试验表明，该两株P46单抗是针对同一表位的单抗。三株P97R1单抗中，2A10与6C5两株滴度较高，ELISA效价达1:32000.配对试验表明该三株单抗分别针对P97R1蛋白的不同表位。Western-blot结果表明，三株P97R1单抗均能与原核表达的P97R1蛋白及猪肺炎支原体全菌蛋白中80-120KD之间的两蛋白发生特异性反应。本研究制备的五株杂交瘤细胞株经三个月冻存或连续传代三个月均能保持较高的滴度。结论：本研究分别成功制备了两株针对猪肺炎支原体P46蛋白以及三株针对P97R1蛋白的特异、稳定且高滴度的单克隆抗体。

关键词：猪肺炎支原体 P46蛋白 P97R1蛋白单克隆抗体

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猪肺炎支原体可疑样品PCR检测方法的建立

猪肺炎支原体可疑样品PCR检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：刘茂军邵国青冯志新王海燕甘源刘冬霞江苏省农业科学院兽医研究所.农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室.国家兽用生物制品工程技术研究中心.江苏省生物兽药筛选服务中心江苏南京 210014

本试验建立病猪肺脏组织和可疑培养物的处理方法，根据猪肺炎支原体的P36基因设计一对引物，建立猪肺炎支原体PCR检测方法，并对该方法进行了特异性和敏感性试验。使用建立的方法检测了临床样品。结果成功建立了病猪肺脏组织和可疑培养... 详细信息

本试验建立病猪肺脏组织和可疑培养物的处理方法，根据猪肺炎支原体的P36基因设计一对引物，建立猪肺炎支原体PCR检测方法，并对该方法进行了特异性和敏感性试验。使用建立的方法检测了临床样品。结果成功建立了病猪肺脏组织和可疑培养物的猪肺炎支原体PCR检测方法。

关键词：猪肺炎支原体 P36基因 PCR检测临床诊断

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应用RAPD技术鉴定猪肺炎支原体和猪鼻支原体

应用RAPD技术鉴定猪肺炎支原体和猪鼻支原体

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：邵国青刘茂军孙佩元冯志新王海燕甘源刘冬霞江苏省农业科学院兽医研究所.农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室.国家兽用生物制品工程技术研究中心.江苏省生物兽药筛选服务中心南京江苏 210014

RAPD技术是1990年创立的一种新的DNA遗传标记技术，能够用来检测基因组DNA的多态性，以及进行种株的鉴定和分类。本实验通过RAPD技术研究了猪肺炎支原体和猪鼻支原体基因组DNA遗传结构的差异，建立了鉴定这2个菌株的RAPD方法。

关键词：猪肺炎支原体猪鼻支原体 RAPD技术遗传结构菌株鉴定

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家兔γ-干扰素在昆虫细胞中的表达及其活性测定

家兔γ-干扰素在昆虫细胞中的表达及其活性测定

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2009中国微生物学会学术年会

作者：王芳胡波任雪枫范志宇张则斌徐为中何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所·农业部动物疲病免疫与诊断重点开放实验室·国家善用生物制品工程技术研究中心南京 210014 江苏省动物疫病预防拉制中心南京 210036 江苏省农业科学院兽医研究所·农业部动物疫病免疫与诊断重点开放实验室·国家善用生物制品工程技术研究中心南京 210014

@@干扰素(Interferon IFN)是一种具有广谱抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等活性的细胞因子。目前，猪、犬、鸡等多种动物的IFN-γ基因被成功克隆并表达。与人类和其他哺乳动物相比，兔IFN-γ的研究比较滞后，在我国近年仅有极少数有关家兔的... 详细信息

@@干扰素(Interferon IFN)是一种具有广谱抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等活性的细胞因子。目前，猪、犬、鸡等多种动物的IFN-γ基因被成功克隆并表达。与人类和其他哺乳动物相比，兔IFN-γ的研究比较滞后，在我国近年仅有极少数有关家兔的IFN-γ基因的研究报道。

关键词： γ-干扰素昆虫细胞表达活性测定

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同一个世界,同一个健康——实现动物-人类-生态共同健康繁荣全球战略框架介绍

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中国动物检疫 2009年第11期26卷 5-7页

作者：孙佩元江苏省农业科学院兽医研究所.农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室.国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 中国-加拿大动物健康推广服务项目北京100026

为“同一个世界，同一个健康”而奋斗，实现动物一人类一生态共同健康繁荣。这是2007年12月在印度新德里召开的禽流感及流感大流行部长级国际会议提出的口号。

关键词：健康全球战略世界生态人类动物框架国际会议

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重组口蹄疫病毒T细胞表位基因的猪细小病毒VP2蛋白病毒样颗粒的构建

重组口蹄疫病毒T细胞表位基因的猪细小病毒VP2蛋白病毒样颗粒的构...

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：潘群兴王永山何孔旺欧阳伟王晓丽诸玉梅夏兴霞江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院

将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1上T细胞表位肽(第21～40残基)基因嵌合在PPV VP2的N端,克隆到杆状病毒供体质粒pFastBac HTA中,构建成重组转座载体pFastBac-FMDV VP1:PPV VP2,转化含有穿梭载体Bacmid的*** DH10Bac中,发生转座作用,经蓝白斑筛... 详细信息

将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1上T细胞表位肽(第21～40残基)基因嵌合在PPV VP2的N端,克隆到杆状病毒供体质粒pFastBac HTA中,构建成重组转座载体pFastBac-FMDV VP1:PPV VP2,转化含有穿梭载体Bacmid的*** DH10Bac中,发生转座作用,经蓝白斑筛选获得重组杆状病毒表达质粒rBac-FMDV VP1:PPV VP2,转染昆虫草地夜蛾(Sf9)细胞,并在Sf9中进行了表达。用间接免疫荧光试验(IFA)、Western-blot分析,表达产物具有与PPV VP2天然蛋白相似的生物活性.电镜观察,表达的蛋白能够自我组装成病毒样粒子[PPV:VLP(FMDV)].

关键词：猪细小病毒口蹄疫病毒 VP2 PPV 重组杆状病毒细胞表位病毒样颗粒

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动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究 Ⅰ.分泌抗大肠杆菌0157:H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究 Ⅰ.分泌抗大肠杆菌...

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中国畜牧兽医学会2009学术年会

作者：夏兴霞刘洁王永山诸玉梅欧阳伟何孔旺张雪寒江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院

引言/目的:食源性病原微生物已成为当今不断增多的食品安全和突发性公共卫生事件的主要诱因。全世界每年至少有200万人死于以感染性腹泻为主的食源性疾病。在食源性病原微生物中,肠出血性大肠杆菌（EHEC）占有重要地位。O157:H7的感染... 详细信息

引言/目的:食源性病原微生物已成为当今不断增多的食品安全和突发性公共卫生事件的主要诱因。全世界每年至少有200万人死于以感染性腹泻为主的食源性疾病。在食源性病原微生物中,肠出血性大肠杆菌（EHEC）占有重要地位。O157:H7的感染因具有暴发流行趋势、强烈的致病性与致死性以及抗生素治疗可能会加剧病情等特点,已成为全球性的公共卫生问题,获得简便、快速、敏感、实用的O157:H7快速检测方法仍是当前食源性病原微生物防控研究亟需解决的问题。本研究旨在制备抗O157:H7的系列单克隆抗体,为该病原菌的快速检测、抗原结构分析及其致病机理研究提供技术支撑。材料与方法:将*** O157:H7（EHEC-O157:H7）用甲醛灭活超声破碎,免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞,与SP/20骨髓瘤细胞融合,建立分泌抗大肠杆菌O157:H7单克隆抗体杂交瘤细胞株。结果与讨论:获得七株分泌抗*** O157:H7单克隆抗体（mAbs）的杂交瘤细胞株,分别命名为2E7、B8、E7、D3、H7、F1和C3,Ig亚类分别是IgG2bκ、IgG2aκ、IgG1κ、IgMκ、IgMκ、IgMκ和IgG2aκ。用间接ELISA检测,E7和F1细胞培养上清液的效价为1.6×10～3,腹水效价均为1×10;C3、2E7、B8、D3和H7细胞培养上清液的效价为1×10～1～2×10～2,腹水效价均为4×10～2～2.5×10～6。相加ELISA结果显示,D3和H7 mAbs对应相同的抗原表位,而其它五株对应不同的抗原表位。用间接ELISA分析特异性,2E7、H7和D3为抗EHEC-O157:H7特异性单克隆抗体,其它四株mAbs与某些其他血清型的大肠杆菌有交叉反应。Western blotting表明,C3、E7和F1三株mAbs在蛋白分子量28kD处有特异性条带,2E7、D3和H7三株mAbs在蛋白分子量35kD处有特异性条带,而mAbs B8则未显示蛋白带。本研究制备抗O157:H7的系列单克隆抗体,为该病原菌的快速检测、抗原结构分析及其致病机理研究提供技术支撑。同时,实验结果表明大肠杆菌的抗原成分十分复杂,不同血清型甚至同种血清型不同菌株之间存在着大量的共同抗原表位。

关键词：杂交瘤细胞株培养上清液人兽共患细菌病大肠杆菌食源性病原微生物动物源性新制剂单克隆抗体

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动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ.分泌抗大肠杆菌O157:H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ.分泌抗大肠杆菌O...

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：夏兴霞刘洁王永山诸玉梅欧阳伟何孔旺张雪寒江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院

将*** O157:H7（EHEC-O157:H7）用甲醛灭活、超声破碎,免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞;与SP/20骨髓瘤细胞融合后,获得七株分泌抗*** O157:H7单克隆抗体（mAbs）的杂交瘤细胞株,分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3,Ig亚类分别是IgG2... 详细信息

将*** O157:H7（EHEC-O157:H7）用甲醛灭活、超声破碎,免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞;与SP/20骨髓瘤细胞融合后,获得七株分泌抗*** O157:H7单克隆抗体（mAbs）的杂交瘤细胞株,分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3,Ig亚类分别是IgG2aκ、IgG2aκ、IgG1κ、IgMκ、IgMλ、IgMκ和IgG2aκ。用间接ELISA检测,E7和F1细胞培养上清液的效价为1.6×10～3,腹水效价均为1×10;C3、F5、B8、G9和G11细胞培养上清液的效价为1×10～1～2×10～2,腹水效价均为1×10～3。相加ELISA结果显示,F1、G9和G11三株mAbs对应相同的抗原表位,而其它4株对应不同的抗原表位.用间接ELISA分析特异性,七株mAbs与某些其他血清型的大肠杆菌有交叉反应.Western blotting表明,C3、E7和F1三株mAbs在蛋白分子量28kD处有特异性条带,而其它四株mAbs则未显示蛋白带。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7 单克隆抗体(mAb) 生物制剂人兽共患病

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动物抗血清及其制备技术要点与应用进展

动物抗血清及其制备技术要点与应用进展

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：王占伟邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京天邦生物科技有限公司

抗血清对于控制动物疫病具有很重要的作用。本文综述了动物抗血清的发展历程,产品技术现状、制备技术要点与最新研究应用进展以及面临的问题等方面。

关键词：抗血清抗体效价抗猪瘟血清生物制品动物疫病免疫原性琼脂扩散试验抗炭疽血清抗原性应用进展制备技术

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