检索结果-内蒙古大学图书馆

江苏农业科学 2016年第9期44卷 1-3页

作者：王芳陈萌萌宋艳华范志宇胡波魏后军仇汝龙徐为中薛家宾江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

兔出血症病毒(RHDV)可引起兔病毒性出血症(RHD)。RHD是一种急烈性、高度致死性兔传染病,给家兔养殖业造成巨大经济损失。2010年,研究人员在法国兔场发现一种新型兔出血症病毒RHDV2。与经典RHDV不同,该毒株能够感染幼龄家兔,甚至跨物种... 详细信息

兔出血症病毒(RHDV)可引起兔病毒性出血症(RHD)。RHD是一种急烈性、高度致死性兔传染病,给家兔养殖业造成巨大经济损失。2010年,研究人员在法国兔场发现一种新型兔出血症病毒RHDV2。与经典RHDV不同,该毒株能够感染幼龄家兔,甚至跨物种感染野兔,并突破经典RHDV疫苗的免疫防线,迅速在世界范围内流行。目前我国还未有RHDV2的报道,但随时面临发生该疫情的风险。本文综述RHDV2的病原学、流行病学特征、临床症状、诊断和防控等方面的研究进展,旨在提高对RHDV2的认识,加强对RHDV2的监测,提前做好防控措施。

关键词：兔出血症病毒新毒株跨物种风险防控

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肠出血性大肠杆菌O157∶H7鞭毛可变区基因片段的克隆、表达与免疫原性

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江苏农业学报 2011年第5期27卷 1021-1025页

作者：张雪寒何孔旺赵攀登栾晓婷叶青温立斌李彬王小敏郭容利倪艳秀周俊明俞正玉茅爱华吕立新江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7是食源感染的人兽共患病原菌。鞭毛蛋白(H7)是EHEC O157∶H7重要的毒力因子,其编码基因为flic。该研究在体外克隆和表达flic基因的可变区,并检测其免疫原性,旨在为EH... 详细信息

肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7是食源感染的人兽共患病原菌。鞭毛蛋白(H7)是EHEC O157∶H7重要的毒力因子,其编码基因为flic。该研究在体外克隆和表达flic基因的可变区,并检测其免疫原性,旨在为EHEC O157∶H7疫苗的研制提供候选抗原。PCR扩增到flic基因538～1 483bp的可变区,成功克隆入冷诱导表达载体pColdⅠ中,构建重组表达质粒。重组菌BL21(pCold I-flic)0.5 mmol/LIPTG过夜诱导,SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定。Balb/c小鼠免疫和攻毒试验评价重组H7蛋白的免疫原性。结果显示:H7基因(flic)片段945 bp在pColdⅠ中成功表达,大小为31 000,能够与天然EHEC O157∶H7全抗血清反应;免疫小鼠存活率可以达到80%,而非免疫小鼠存活率仅为20%;免疫组粪便排菌数量显著低于对照组(P<0.05)。以上结果说明,H7鞭毛的可变区与菌体黏附密切相关,并且其诱导产生的抗体具有一定的抑制黏附作用,可以作为亚单位疫苗研制的候选抗原,在EHEC O157∶H7早期黏附时,协同Ⅲ型分泌系统蛋白降低菌体在肠道内的黏附。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157∶H7 flic基因表达小鼠

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鸡传染性支气管炎病毒RT-LAMP 检测方法的建立

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江苏农业学报 2013年第4期29卷 818-821页

作者：刘宇卓韩凯凯李银黄欣梅赵冬敏江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了建立一种适用于鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)快速检测方法,本试验根据IBV衣壳蛋白M基因保守区域设计了一套特异性引物,并对反应条件进行优化。结果显示,建立了IBV的RT-LAMP检测方法,该方法既可通过将... 详细信息

为了建立一种适用于鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)快速检测方法,本试验根据IBV衣壳蛋白M基因保守区域设计了一套特异性引物,并对反应条件进行优化。结果显示,建立了IBV的RT-LAMP检测方法,该方法既可通过将反应产物进行凝胶电流观察结果,也可直接通过向反应产物中加入荧光染料对结果进行可视化观察。该方法具特异性,对鸡新城疫病毒(NDV)、H9亚型禽流感病毒(AIV H9)、坦布苏病毒(TMUV)及正常鸡胚尿囊液均无扩增反应。该方法对IBV的最小检测量为12 fg。表明本研究建立的方法简便而快速,灵敏而特异,适合于兽医临床对IBV的快速检测及流行病学调查。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒环介导等温扩增技术检测方法

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鹅细小病毒LH株的分离鉴定

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江苏农业学报 2009年第5期25卷 1091-1094页

作者：刘宇卓李银魏雪涛张敬峰江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

采用鹅胚接种方法从南京六合具典型鹅细小病毒病病变的死亡雏鹅体内分离到1株鹅细小病毒(LH株)。在电镜下观察到该病毒液具细小病毒样粒子;8日龄健康易感雏鹅人工感染后100%发病、死亡,且具有典型鹅细小病毒病临床症状和剖检特征。在琼... 详细信息

采用鹅胚接种方法从南京六合具典型鹅细小病毒病病变的死亡雏鹅体内分离到1株鹅细小病毒(LH株)。在电镜下观察到该病毒液具细小病毒样粒子;8日龄健康易感雏鹅人工感染后100%发病、死亡,且具有典型鹅细小病毒病临床症状和剖检特征。在琼脂扩散试验中,用感染鹅胚液制备的待检沉淀抗原,能与鹅细小病毒阳性血清发生特异性反应。应用针对GPVVP3特异性引物对LH毒液进行PCR检测,扩增出的片段为1.6 kb,与目的条带大小相符。序列分析发现,扩增产物与已发表的GPV的VP3片段相比较,同源性达99%以上,表明所分离到的LH株是一株鹅细小病毒。

关键词：鹅细小病毒分离鉴定

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RAPD法分析猪肺炎支原体DNA多态性

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江苏农业学报 2009年第5期25卷 1058-1062页

作者：邵国青刘茂军甘源冯志新王海燕江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

应用RAPD技术，用7条随机引物对7株猪肺炎支原体和2株猪鼻支原体基因组DNA进行了多态性分析，结果表明，7条引物共产生244个扩增片段，其中有92个是多态性片段。相似系数分析结果显示，国际标准株J株和国内分离株之间相似性系数为0．139... 详细信息

应用RAPD技术，用7条随机引物对7株猪肺炎支原体和2株猪鼻支原体基因组DNA进行了多态性分析，结果表明，7条引物共产生244个扩增片段，其中有92个是多态性片段。相似系数分析结果显示，国际标准株J株和国内分离株之间相似性系数为0．139～0．333，猪肺炎支原体和猪鼻支原体之间相似性系数为0．203～0．400。

关键词：猪肺炎支原体 RAPD DNA多态性

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一株新型家兔肠炎沙门氏菌的分离鉴定及防治

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江苏农业学报 2016年第6期32卷 1367-1371页

作者：范志宇魏后军仇汝龙胡波宋艳华陈萌萌徐为中王辉薛家宾王芳江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

针对山东省某兔场发生以仔兔脾脏肿大、母兔流产为特征的传染病,本研究对发病濒死兔进行细菌分离,利用16S rRNA基因扩增技术、特异性PCR技术和生化试验对致病细菌进行鉴定,并进行了药敏试验和自制疫苗效力试验。分离菌株16S rRNA基因序... 详细信息

针对山东省某兔场发生以仔兔脾脏肿大、母兔流产为特征的传染病,本研究对发病濒死兔进行细菌分离,利用16S rRNA基因扩增技术、特异性PCR技术和生化试验对致病细菌进行鉴定,并进行了药敏试验和自制疫苗效力试验。分离菌株16S rRNA基因序列与肠炎沙门氏菌相似度大于99.0%,培养特性和生化特性符合肠炎沙门氏菌特性。分离菌株特异性PCR产物序列与肠炎沙门氏菌sef A基因的同源性为99.3%~100.0%,因此将其命名为Salmonella SD/2016。动物回归试验成功复制出该病并分离到目的细菌。自制疫苗安全性良好,对断奶幼兔能提供免疫保护。

关键词：兔肠炎沙门氏菌 16S rRNA基因扩增技术特异性PCR

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兔出血症病毒感染机体后炎性因子的检测分析

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江苏农业科学 2016年第2期44卷 238-241页

作者：仇汝龙范志宇王芳胡波宋艳华魏后军刘星徐为中薛家宾江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

兔出血症病毒(RHDV)感染成年兔可以诱导兔体内产生强烈的炎性反应,是病毒感染后急性死亡的重要原因之一。为揭示病毒感染机体后体内重要炎性因子的表达情况,采用荧光定量PCR方法检测RHDV感染后6、12、24、30、36 h兔外周血、肝脏和脾脏... 详细信息

兔出血症病毒(RHDV)感染成年兔可以诱导兔体内产生强烈的炎性反应,是病毒感染后急性死亡的重要原因之一。为揭示病毒感染机体后体内重要炎性因子的表达情况,采用荧光定量PCR方法检测RHDV感染后6、12、24、30、36 h兔外周血、肝脏和脾脏内病毒增殖情况以及IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ炎性因子的表达情况。结果表明,兔出血症病毒拷贝数在外周血、肝脏和脾脏内随着感染时间的变化呈快速上升的趋势。外周血、肝脏和脾脏在病毒感染中,促炎性因子IL-6和TNF-α表达水平都明显上调。肝脏促炎性因子IL-6在30 h左右达到最大值,而在外周血和脾脏中则持续上调。抑炎因子IL-10随着炎性因子的上调也随之上升,但其表达水平只有较低程度的上调。IFN-γ相对表达水平在肝脏和脾脏有短暂的上调,在外周血中则持续下调。

关键词：兔出血症病毒炎性因子荧光定量PCR 外周血脾脏肝脏

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两株猪圆环病毒2型病毒的分离鉴定及其序列分析

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江苏农业学报 2009年第5期25卷 1063-1067页

作者：郭容利何孔旺钟书霖温立斌潘群兴江苏省农业科学院兽医研究所农业动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

利用PK15细胞从猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）临床发病与死亡猪中分离到2株病毒；分别命名为Haian（登录号为FJ712216）和Xuancheng（登录号为FJ712215）。利用间接免疫荧光（IFA）和聚合酶链式反应（PCR）对其进行鉴定，并对其全... 详细信息

利用PK15细胞从猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）临床发病与死亡猪中分离到2株病毒；分别命名为Haian（登录号为FJ712216）和Xuancheng（登录号为FJ712215）。利用间接免疫荧光（IFA）和聚合酶链式反应（PCR）对其进行鉴定，并对其全基因组序列进行了测定和分析。结果表明，分离株感染细胞后病毒抗原主要分布在细胞核中，2分离株的基因组全长为1767nt，与世界上其他地区的PCV2分离株密切相关，核苷酸序列同源性达93．7％-97．7％，属于毒力较强的Genotype1。

关键词：猪圆环病毒2型分离鉴定序列分析

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新西兰白兔γ-干扰素在昆虫细胞中的表达及其活性测定

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华北农学报 2010年第3期25卷 9-13页

作者：王芳胡波任雪枫范志宇张则斌徐为中何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病免疫与诊断重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 江苏省动物疫病预防控制中心江苏南京210036

用RT-PCR方法对ConA刺激后的新西兰白兔外周血淋巴细胞(PBMC)扩增家兔γ-干扰素(IFN-γ)基因并进行测序,测序结果显示,与GenBank公布的序列核苷酸同源性达到99.4%～99.6%,氨基酸同源性为98.8%～99.4%;然后通过克隆、转化将家兔γ-干扰... 详细信息

用RT-PCR方法对ConA刺激后的新西兰白兔外周血淋巴细胞(PBMC)扩增家兔γ-干扰素(IFN-γ)基因并进行测序,测序结果显示,与GenBank公布的序列核苷酸同源性达到99.4%～99.6%,氨基酸同源性为98.8%～99.4%;然后通过克隆、转化将家兔γ-干扰素基因转入转移载体pFastBacTM1,得到重组转移载体pFastBacTM1-IFN-γ,用pFastBacTM1-IFN-γ转化含有穿梭载体Bacmid的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经筛选得到重组穿梭载体Bacmid-IFN-γ,用此质粒转染Sf9昆虫细胞,得到重组病毒rAcV-Bac-IFN-γ,经RT-PCR鉴定,结果显示重组IFN-γ在Sf9昆虫细胞中得到表达。用兔IFN-γELISA试剂盒测得重组兔IFN-γ的浓度为1 950 pg/mL。细胞病变抑制法结果显示,重组兔IFN-γ在MDCK上显示了较高的抗病毒活性,并测得重组兔IFN-γ的活性约为5.12×105 U/mg。

关键词：家兔 γ-干扰素克隆重组杆状病毒

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靶向传染性法氏囊病病毒VP1基因siRNA对病毒复制的抑制

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中国兽医学报 2011年第10期31卷 1404-1409页

作者：欧阳伟王永山刘小娟张海彬江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

根据传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP1基因保守区序列,选择设计了3个靶向VP1的小干扰RNA序列(siR-NA):VP1-siRNA668、VP1-siRNA1034和VP1-siRNA2250,化学合成DNA序列,体外转录合成siRNA,转染鸡胚成纤维细胞(CEF)后接种IBDV,分析siRNA对病毒复制的影响。结果显示,病毒接种后72h,3个VP1-siRNA转染组未出现明显的细胞病变(CPE),病毒滴度分别为102.75,102.00,101.75 TCID50/0.1mL,而siRNACON转染和单纯IBDV接种对照组均出现明显CPE,病毒滴度均为106 TCID50/0.1mL;用荧光定量RT-PCR分析VP1基因水平,3个VP1-siRNA转染组比对照组分别降低了73.10%,81.79%,90.28%。结果表明,本试验选择设计的3个siRNA具有明显抑制IBDV复制功能,其中2 250位点的siRNA抑制效果最明显,推测该区域是VP1基因的重要功能区,是新型抗IBDV药物与疫苗设计的重要靶标。

关键词： RNA干扰(RNAi) 小干扰RNA(siRNA) 传染性法氏囊病病毒(IBDV) VP1基因

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