检索结果-内蒙古大学图书馆

江西农业学报 2015年第4期27卷 81-84页

作者：刘宇卓宋子梁李银黄欣梅赵冬敏韩凯凯杨婧江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

对一例疑似坦布苏病毒和多杀性巴氏杆菌混合感染的6日龄鸡进行病原的分离鉴定。用套氏RT-PCR方法和常规细菌分离鉴定方法进行病毒、细菌的分离、鉴定,并对其病原的主要生物学特性进行了研究。结果表明:病毒经鉴定为坦布苏病毒,与鹅源坦... 详细信息

对一例疑似坦布苏病毒和多杀性巴氏杆菌混合感染的6日龄鸡进行病原的分离鉴定。用套氏RT-PCR方法和常规细菌分离鉴定方法进行病毒、细菌的分离、鉴定,并对其病原的主要生物学特性进行了研究。结果表明:病毒经鉴定为坦布苏病毒,与鹅源坦布苏病毒JS804株核苷酸同源性达99%;分离到的细菌为多杀性巴氏杆菌。细菌对鸡的回归试验显示,0.1mL的菌液可致20周龄SPF鸡死亡;对6周龄Balb/c小鼠的致病性试验结果表明,含约10 CFU的毒液即可在24h内致其4/4死亡。

关键词：雏鸡坦布苏病毒多杀性巴氏杆菌

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兔源多杀性巴氏杆菌C_(51-17)株ompA基因表达与免疫原性鉴定

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安徽农业科学 2015年第35期43卷 227-228,237页

作者：徐为中王芳胡波范志宇魏后军宋艳华薛家宾仇汝龙刘星江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

[目的]研究兔源多杀性巴氏杆菌C_(51-17)株omp A基因表达与蛋白免疫原性鉴定。[方法]根据Gen Bank公布的多杀性巴氏杆菌序列AE004439设计引物,经PCR扩增出兔源多杀性巴氏杆菌外膜蛋白omp A基因,开放阅读框包含1 062 bp碱基,插入到p GEX-... 详细信息

[目的]研究兔源多杀性巴氏杆菌C_(51-17)株omp A基因表达与蛋白免疫原性鉴定。[方法]根据Gen Bank公布的多杀性巴氏杆菌序列AE004439设计引物,经PCR扩增出兔源多杀性巴氏杆菌外膜蛋白omp A基因,开放阅读框包含1 062 bp碱基,插入到p GEX-6p-1质粒,构建成功重组表达载体p GEX-domp A,转入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导高效表达出多杀性巴氏杆菌成熟重组外膜蛋白omp A。[结果]表达产物经SDS-PAGE分析,重组多杀性巴氏杆菌外膜蛋白omp A分子量在63 ku,Western blot分析显示,重组蛋白能与兔抗多杀性巴氏杆菌高免血清呈现免疫反应,表明表达的重组蛋白具有较好的免疫活性。[结论]获得的重组蛋白为家兔多杀性巴氏杆菌病诊断试剂盒和疫苗的进一步研究奠定基础。

关键词：兔多杀性巴氏杆菌 ompA 原核表达

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兔源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定

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安徽农业科学 2015年第33期43卷 108-109,145页

作者：徐为中王芳胡波范志宇魏后军宋艳华薛家宾仇汝龙刘星江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

从送检病死兔肺和肝中分离培养出5株细菌,经过细菌培养、染色镜检、生化试验、PCR鉴定和动物致病性试验对其进行鉴定。鉴定结果表明,分离到的菌株为荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌,对小鼠有较强的致病性。药敏试验结果表明,分离菌株对环丙... 详细信息

从送检病死兔肺和肝中分离培养出5株细菌,经过细菌培养、染色镜检、生化试验、PCR鉴定和动物致病性试验对其进行鉴定。鉴定结果表明,分离到的菌株为荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌,对小鼠有较强的致病性。药敏试验结果表明,分离菌株对环丙沙星、氧氟沙星、氟苯尼考、恩诺沙星和磺胺六甲氧嘧啶等药物敏感。

关键词：兔多杀性巴氏杆菌荚膜血清A型分离鉴定

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坦布苏病毒对鸭的致病性和传播特性研究

坦布苏病毒对鸭的致病性和传播特性研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：刘青涛李银赵冬敏刘宇卓黄欣梅杨婧韩凯凯安凤娇江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

2010年春季,在我国东部省份主要养鸭地区的鸭群中暴发了由坦布苏病毒（Tembusu Virus,TMUV）引起的疫情,主要表现为种鸭、蛋鸭采食量和产蛋率迅速下降,肉鸭拉稀、神经症状和死亡,此次疫情一直持续到2010年冬季。此后,在江苏、山东、河... 详细信息

2010年春季,在我国东部省份主要养鸭地区的鸭群中暴发了由坦布苏病毒（Tembusu Virus,TMUV）引起的疫情,主要表现为种鸭、蛋鸭采食量和产蛋率迅速下降,肉鸭拉稀、神经症状和死亡,此次疫情一直持续到2010年冬季。此后,在江苏、山东、河南等地多次出现鸭坦布苏病毒病的流行,目前该病仍在不断发生,给我国养鸭业造成了巨大经济损失。据不完全统计,鸭坦布苏病毒病仅2010年造成的经济损失就达数十亿元。但是TMUV对鸭的致病机理和传播特性仍不清楚。为此,我们以21日龄樱桃谷鸭为动物模型,对TMUV（JS804株）的致病性和传播特性进行了研究。结果显示,通过滴鼻途经攻毒(10ELD/只),病毒JS804可以引起鸭的发病;攻毒后第3天攻毒鸭均表现出采食下降,拉绿色水样粪便和精神不振等症状;随着时间的推移,有些攻毒鸭还表现出步态不稳和鼻液增多等症状;而在攻毒后第9天发病鸭逐渐恢复正常,但是偶尔还会出现拉绿色稀粪的症状。此外,体重称量的结果显示,JS804攻毒组鸭的体重增长明显慢于对照组。增殖能力和炎性细胞因子的荧光定量RT-PCR测定结果显示,病毒JS804可以在鸭的心、肝、脾、肺、肾、脑内进行增殖,并且在心、脾、肺内的增殖能力要高于其它脏器;另外,对口腔拭子和泄殖腔拭子的测定结果显示,在攻毒后的第1天攻毒鸭就可以通过其口腔和泄殖腔向外排毒,并且至少可以持续1个月;而细胞因子的测定结果显示,在攻毒后的第3天和第5天病毒JS804可以引起鸭肺、脾、脑内的促炎性细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-8的过度应答;此外,病毒JS804在鸭肺、脑内同时也诱发了抑炎性细胞因子IL-10的过度应答,而脾内的IL-10仅仅在攻毒后第3天出现了上调表达,在攻毒后第5天又恢复至正常水平。鉴于TMUV在鸭群中的快速传播特性,我们对病毒JS804的传播途径也进行了研究。结果显示,病毒JS804可以在鸭之间进行直接触传播,这与先前的研究结果一致;此外,除了直接接触传播外病毒JS804还可以在鸭之间进行有效的粪-口传播和空气传播。因此,虽然基因系统进化树的分析结果将TMUV归属于蚊媒传播黄病毒,蚊媒传播也被认为是TMUV的一个主要传播途径,但是我们不应该忽视其它传播途径特别是粪-口途径和空气传播途径在该病毒传播过程中的作用,因为这可能与该病毒的快速传播和秋冬季节的流行有关。

关键词：坦布苏病毒测定结果鸭坦布苏病毒病传播特性

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兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌复合PCR方法的建立及临床应用

兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌复合PCR方法的建立及临床...

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中国畜牧兽医学会养兔学分会成立大会暨第一届学术交流大会

作者：范志宇魏后军胡波宋艳华王芳薛家宾徐为中苏国清江苏省农业科学院兽医研究所·农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心

本研究旨在建立检测家兔多杀性巴氏杆菌（Pm）和支气管败血波氏杆菌（Bb）的复合PCR方法。本实验室已经建立了支气管败血波氏杆菌PCR检测方法,特异性引物为P1:5'-TGAACAATGGCGTGAAAGC-3',P2:5'-TCGATAGTAGGACGGGAGGAT-3... 详细信息

本研究旨在建立检测家兔多杀性巴氏杆菌（Pm）和支气管败血波氏杆菌（Bb）的复合PCR方法。本实验室已经建立了支气管败血波氏杆菌PCR检测方法,特异性引物为P1:5'-TGAACAATGGCGTGAAAGC-3',P2:5'-TCGATAGTAGGACGGGAGGAT-3',预期扩增的DNA产物片段大小为425 bp。根据GenBank中多杀性巴氏杆菌ATP合成酶（atpB）基因的保守序列,设计一对特异性引物,P1:5'-TTCTGTTCGCTTCATCCT-3',P2:5'-CTGTTCTGTTCGCTTCATC-3',预期扩增的DNA产物片段大小为1141 bp,成功建立巴氏杆菌PCR检测方法。将两种PCR方法进行合并,对PCR反应中的Mg浓度、Taq酶浓度、DNA模板量、退火温度等进行筛选优化。反应体系:Taq DNA聚合酶0.5μL,10×PCR buffer 2.5μL,25mM MgCl2.5μL,2.5mM dNTPs2.0μL,P3、P4各1.0μL,DNA模板4.0μL,ddHO11.5μL。反应条件:94℃预热5 min;94℃变性30 s,53.9℃退火30 s,72℃复性80 s,30个循环;72℃延伸10min。经反应条件的优化,成功建立Pm、Bb复合PCR诊断方法。将Pm和Bb的DNA模板做10倍梯度稀释,连续稀释8个梯度,每个梯度取8μL模板加入复合PCR反应体系(单个反应体系含有支气管败血波氏杆菌和多杀性巴氏杆菌分别为4×10～5×10CFU)进行敏感性试验。结果显示,该方法检出的最小Pm和Bb菌数分别为40CFU和4CFU。对兔源产气荚膜梭菌、大肠杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、猪鼻支原体、链球菌的检测结果均为阴性,说明该方法具有良好的特异性。用建立的方法对2012年度至2014上半年在江苏、浙江、安徽及广东四省采集的临床鼻拭子样本共712份进行检测。结果显示,Pm阳性率为25.56%,Bb阳性率为34.55%,双阳性率为13.20%;各年度、各地区、不同品种的鼻拭子样品均能检测到支气管败血波氏杆菌和多杀性巴氏杆菌。肉兔品种的阳性率显著低于獭兔和毛兔,可能由于獭兔和毛兔比肉兔的饲养周期长有关;对南京市某兔场不同月份呼吸道鼻拭子样本检测。结果显示,在天气状况较好的4、10、11月（春秋季）和天气较热的6、7月（夏季）,Bb阳性率分别为31.21%和25.61%,Pm阳性率分别为21.47%和22.56%,Pm的检出率没有明显变化。而Bb检出率有明显差别,春秋季明显高于夏季。不同场次的临床样品检测显示,Bb的阳性率均明显高于Pm,有的阳性率甚至达到50%,可能是由于多杀性巴氏杆菌有疫苗可以用于免疫,而波氏杆菌暂时没有疫苗提供。综上结果显示,该复合PCR方法能快速、敏感地从家兔鼻拭子样品中检出Pm和Bb,为临床疾病检测和流行病学调查提供技术保障。

关键词：兔支气管败血波氏杆菌多杀性巴氏杆菌复合PCR

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嵌合双串联OVA T细胞表位的RHDV VP60蛋白免疫特性研究

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安徽农业科学 2015年第32期43卷 89-92页

作者：宋艳华张燕胡波范志宇魏后军刘星黄兵薛家宾徐为中王芳江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 山东省农业科学院家禽研究所山东济南250023

为研究RHDV VP60作为载体容纳外源片段以及递呈外源T细胞表位的能力,将双串联卵清蛋白T细胞表位插入N端、C端以及替代N端氨基酸的方式获得3种嵌合蛋白,进行免疫试验。3种嵌合蛋白分别命名为DN1、DN2和DC,将蛋白进行浓缩、纯化及定量,利... 详细信息

为研究RHDV VP60作为载体容纳外源片段以及递呈外源T细胞表位的能力,将双串联卵清蛋白T细胞表位插入N端、C端以及替代N端氨基酸的方式获得3种嵌合蛋白,进行免疫试验。3种嵌合蛋白分别命名为DN1、DN2和DC,将蛋白进行浓缩、纯化及定量,利用透射电镜观察VLPs的形成,发现均可形成形态大小与VP60相似的VLPs。将3种嵌合蛋白分别腹腔注射C57BL/6雌性小鼠,利用间接ELISA检测首免后0、4和6周小鼠血清样品中VP60特异性抗体,结果表明嵌合蛋白组与VP60组均能够诱导产生较高水平的抗VP60特异性抗体,2组间无显著差异。首免后6周,利用合成的OVA多肽刺激脾淋巴细胞,ELISPOT检测特异性IFN-γ的分泌水平,结果表明3种嵌合蛋白均能诱导特异性IFN-γ的分泌。该研究扩展了VP60作为载体可携带的外源片段的耐受性及有效递呈T细胞表位的能力,为VP60-VLPs展示系统的研究提供了理论依据。

关键词： RHDV 衣壳蛋白 OVA T细胞表位嵌合蛋白免疫原性研究

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动物卫生监督管理评估模型的构建

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江苏农业学报 2014年第2期30卷 370-375页

作者：臧一天谭业平胡肄农陆昌华江苏省农业科学院兽医研究所、农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室、国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 中国农业大学水利与土木工程学院北京100083

为了建立反映动物卫生监督管理工作效果的模型,本文通过实际调研及德尔菲专家调查法,并结合层次分析法及模糊综合评判法,构建动物卫生监督管理评估模型,利用文献定量收集及五级评定法确定模型中各指标评判值,将评判值代入所建模型,对动... 详细信息

为了建立反映动物卫生监督管理工作效果的模型,本文通过实际调研及德尔菲专家调查法,并结合层次分析法及模糊综合评判法,构建动物卫生监督管理评估模型,利用文献定量收集及五级评定法确定模型中各指标评判值,将评判值代入所建模型,对动物卫生监督管理的效果进行模拟评估。结果显示,监督运行费用投资比例、饲养环节和监督人员专业比例分别位于总排序第1、第2和第3,动物卫生监督管理多部门管理模式存在问题。该模型可用于评估动物卫生监督管理效果。

关键词：动物卫生监督管理评估模型

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类猪圆环病毒因子P1在自然感染仔猪体内的组织分布

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中国兽医学报 2013年第1期33卷 1-3页

作者：温立斌何孔旺俞正玉茅爱华高晓静倪艳秀张雪寒郭容利李彬王小敏周俊明吕立新江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

选用3头自然感染仔猪和1头阴性对照猪,剖杀后采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰脏、脑、空肠、扁桃体、胸腺、淋巴结、膀胱、性腺等组织,用荧光定量PCR方法检测病毒在组织中的分布及病毒载量。结果显示,类猪圆环病毒因子P1分布在仔... 详细信息

选用3头自然感染仔猪和1头阴性对照猪,剖杀后采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰脏、脑、空肠、扁桃体、胸腺、淋巴结、膀胱、性腺等组织,用荧光定量PCR方法检测病毒在组织中的分布及病毒载量。结果显示,类猪圆环病毒因子P1分布在仔猪的心脏、肝脏、肺脏、胰脏、脑和膀胱等组织,病毒载量以胰脏、脑和膀胱为最高,可达105拷贝/g以上;对照猪脏器中没有检测到病毒核酸。该研究为P1的诊断及致病机制奠定了基础。

关键词：类猪圆环病毒因子P1 组织分布病毒载量

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嵌合O型口蹄疫病毒多表位基因猪细小病毒VLPs载体疫苗的构建

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江苏农业学报 2013年第1期29卷 101-107页

作者：潘群兴诸玉梅王永山何孔旺王晓丽欧阳伟毕振威夏兴霞江苏省农业科学院兽医研究所、农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室、国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

综合运用生物信息学和分子生物学技术,模拟PPV VP2蛋白表面不同Loop区插入O型FMDV VP1蛋白上多表位基因(VP1:21～40、141～160和200～213残基)空间构象,并在VP2 N端引入通用型辅助性T淋巴细胞表位(PADRE),人工合成嵌合基因并克隆到杆状... 详细信息

综合运用生物信息学和分子生物学技术,模拟PPV VP2蛋白表面不同Loop区插入O型FMDV VP1蛋白上多表位基因(VP1:21～40、141～160和200～213残基)空间构象,并在VP2 N端引入通用型辅助性T淋巴细胞表位(PADRE),人工合成嵌合基因并克隆到杆状病毒转移载体pFastBac HTA中,转化*** DH10Bac感受态细胞,经三抗筛选,获得重组杆状病毒表达质粒rBac-FMDV VP1∶PPV VP2,用脂质体法转染Sf9细胞。对rBac-FMDVVP1∶PPV VP2感染的Sf9细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)检测,具有特异性荧光;用Western-blotting分析,在64 000处出现一条特异蛋白条带;电镜观察,重组VP2蛋白能够自主组装成病毒样颗粒。红细胞凝集试验证实,表达的嵌合蛋白PPV∶VP2-FMDV∶VP1具有与全病毒类似的血凝活性。

关键词：猪细小病毒 O型口蹄疫病毒病毒样颗粒分子设计

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畜产品质量安全的风险管理与风险预警

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江苏农业学报 2013年第5期29卷 1172-1177页

作者：陆昌华胡肄农谭业平江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

针对畜产品安全涉及到的多方面、多环节和多层次问题,分析畜产品质量安全管理现状,确定影响畜产品安全的主要因素,指出动物疫病风险预警是公共卫生应急及城市预警应急系统的重要组成部分。提出如何构建畜产品质量安全风险预警框架、形... 详细信息

针对畜产品安全涉及到的多方面、多环节和多层次问题,分析畜产品质量安全管理现状,确定影响畜产品安全的主要因素,指出动物疫病风险预警是公共卫生应急及城市预警应急系统的重要组成部分。提出如何构建畜产品质量安全风险预警框架、形成风险评估及预警决策模型方法。提出采用基于地理信息系统(Geographic information system,GIS)的数字化监控系统,将流行病学数据库、地理图形、非空间应用模型和空间应用模型有机地结合,实现图形和数据资源共享。系统可及时跟踪疾病的蔓延,通过动物疫病流行病学图形分析,可提出适宜的防治措施,达到重大动物疫病预警预报目的。并对解决畜产品质量安全问题提出了建议与对策。

关键词：畜产品质量安全动物疫病风险管理风险预警

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