检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业科学 2005年第6期38卷 1264-1269页

作者：李明何孔旺陆承平南京农业大学/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏省农业科学院兽医研究所/农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室南京农业大学/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室南京210014 南京210014 南京210095

根据猪链球菌2型(Streptococcussuistype2,SS2)溶菌酶释放蛋白(muramidase-releasedprotein,MRP)和胞外蛋白因子(extracellularproteinfactor,EPF)的基因序列,各设计合成一对引物,以猪链球菌2型江苏分离株SS2-1的基因组为模板,扩增mrp基因1801~2513位序列和epf基因1783~2563位序列,分别构建原核表达载体pET32a-mrp、pET32a-epf,确定诱导表达的两种蛋白都具有免疫原性后,提取阳性克隆质粒各自进行双酶切并纯化,通过PCR串联两片段,将目的片段定向克隆到表达载体pET-32a中,重组质粒转化入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达分子量约为74kD的融合蛋白。用制备的两种抗血清与纯化融合蛋白进行免疫转印,结果显示融合蛋白分别具有MRP与EPF的中和表位。用融合蛋白MRP-EPF免疫新西兰兔,以最小致死量猪链球菌强毒株SS2-1攻击,兔的存活率达50%(2/4),存活率明显高于单个表达产物。证实串联表达的融合蛋白为重要的保护性抗原。

关键词：猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白胞外蛋白因子融合表达中和表位

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌转铁结合蛋白2基因克隆、序列分析及表达

引用

农业生物技术学报 2005年第2期13卷 175-178页

作者：王芳何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室南京210014

参照猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae)血清5型菌株序列Z46774设计1对特异性引物,用PCR方法扩增转铁结合蛋白2(Tbp2)基因,得到1条1624bp的片段,然后克隆到pMD18-T载体中,经测序比较,与参考序列的核苷酸同源性达... 详细信息

参照猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae)血清5型菌株序列Z46774设计1对特异性引物,用PCR方法扩增转铁结合蛋白2(Tbp2)基因,得到1条1624bp的片段,然后克隆到pMD18-T载体中,经测序比较,与参考序列的核苷酸同源性达99.8%,从T-载体中切下目的片段后,定向克隆到pET32a(+)中,转化大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(DE3),经诱导后,SDS-PAGE电泳,Tbp2高效表达,Western-blotting鉴定呈阳性。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌转铁结合蛋白2 克隆序列分析表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素I基因的克隆、序列分析及表达

引用

中国预防兽医学报 2006年第2期28卷 121-123页

作者：王芳何孔旺邱索平彭小华倪艳秀张雪寒郭容利俞正玉江苏省农业科学院兽医研究所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏南京210014

参照猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型Ⅰ菌株序列设计了一对特异性引物,用PCR方法扩增毒素Ⅰ基因,得到约920bp的片段,与参考序列的核苷酸同源性达99.3%,定向克隆到pET32a(+)中,转化BL21(DE3)

关键词：胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅰ 表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪链球菌2型溶血素基因的检测及其序列分析

引用

中国兽医科技 2002年第11期32卷 11-14页

作者：倪艳秀何孔旺何家惠王继春吕立新江苏省农业科学院兽医研究所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏南京210014

根据猪链球菌 2型的溶血素基因合成了一对可扩增长度为 14 96bp目的片段的引物 ,建立了检测溶血素基因的PCR方法。该方法对猪链球菌 2型参考株SS2 N株的检测结果为阳性 ,对马链球菌兽疫亚种 (C群 )参考株ATCC3 5 2 46、分离株SESZ Y、S... 详细信息

根据猪链球菌 2型的溶血素基因合成了一对可扩增长度为 14 96bp目的片段的引物 ,建立了检测溶血素基因的PCR方法。该方法对猪链球菌 2型参考株SS2 N株的检测结果为阳性 ,对马链球菌兽疫亚种 (C群 )参考株ATCC3 5 2 46、分离株SESZ Y、SESZ T、SESZ C和猪葡萄球菌、大肠埃希氏菌的检测结果均为阴性 ;用EcoRⅠ内切酶进行酶切 ,获得了与预期结果一致的 863bp和 63 3bp的 2个片段。经对SS2 1株的PCR产物进行测序及序列分析 ,表明其与 193 3株、P1/ 7株的核苷酸同源性分别为 99.7%和 10 0 %。

关键词：猪链球菌2型溶血素基因检测序列分析人畜共患病 PCR方法

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

检测猪流行性腹泻病毒的R-PCR方法的建立

引用

畜牧与兽医 2004年第1期36卷 10-12页

作者：倪艳秀何孔旺俞正玉郭蓉利吕立新陈兆霞江苏省农业科学院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏南京210014

根据猪流行性腹泻病毒 (PEDV)的N基因自行设计和合成了一对可扩增长度为 641bp目的片段的引物 ,成功地建立了检测的猪流行性腹泻病毒的RT PCR方法。对猪轮状病毒 (PRV)、猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)的RT PCR检测结果均呈阴性。对PEDV JS... 详细信息

根据猪流行性腹泻病毒 (PEDV)的N基因自行设计和合成了一对可扩增长度为 641bp目的片段的引物 ,成功地建立了检测的猪流行性腹泻病毒的RT PCR方法。对猪轮状病毒 (PRV)、猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)的RT PCR检测结果均呈阴性。对PEDV JS株的RT PCR产物的序列分析表明 ,与CV777株的同源性为 97 3 %。

关键词：猪流行性腹泻病毒 RT-PCR 检测方法鉴别诊断

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅲ基因克隆、序列分析及表达

引用

扬州大学学报（农业与生命科学版） 2004年第3期25卷 19-21页

作者：王芳何孔旺江苏省农业科学院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏南京210014

参照已知猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清2型菌株毒素 (Apx A)序列设计1对特异性引物,经PCR扩增得到目的片段约1096bp,然后克隆入pMD18\|T载体中,经测序比较,与标准序列的核苷酸同源性达98.5%。从T-载体中切下目的片段后,定向克隆入pET32a... 详细信息

参照已知猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清2型菌株毒素 (Apx A)序列设计1对特异性引物,经PCR扩增得到目的片段约1096bp,然后克隆入pMD18\|T载体中,经测序比较,与标准序列的核苷酸同源性达98.5%。从T-载体中切下目的片段后,定向克隆入pET32a(+)中,转化BL21(DE3),经诱导后,SDS-PAGE结果显示,毒素得到高效表达,Western-blotting检测呈阳性。这为研制猪传染性胸膜肺炎新型疫苗和建立有效的诊断方法奠定了基础。

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅲ 克隆序列分析表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

细菌CpG DNA对鸡接种禽流感病毒H9亚型灭活苗的免疫增强作用

引用

中国兽医学报 2005年第2期25卷 135-138页

作者：崔义邦何孔旺陆承平郭爱珍南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏省农业科学院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室华中农业大学动物医学院病毒室湖北武汉430070

为了探讨细菌核酸对 H9亚型禽流感病毒灭活疫苗的免疫增强作用 ,将 1 5日龄蛋用公鸡 1 2 0只随机分为 4组 ,即空白组、抗原组、细菌核酸佐剂组及白油佐剂组 ,每组 30只。于 2 8日龄时 ,细菌核酸佐剂组以灭活 H 9亚型禽流感病毒作为抗原 ... 详细信息

为了探讨细菌核酸对 H9亚型禽流感病毒灭活疫苗的免疫增强作用 ,将 1 5日龄蛋用公鸡 1 2 0只随机分为 4组 ,即空白组、抗原组、细菌核酸佐剂组及白油佐剂组 ,每组 30只。于 2 8日龄时 ,细菌核酸佐剂组以灭活 H 9亚型禽流感病毒作为抗原 ,大肠杆菌牦牛株核酸作为佐剂 ,免疫接种于试验鸡 ,用 XTT法检测 T、B淋巴细胞增殖反应 ,并用血凝与血凝抑制法检测血清抗体水平。结果显示 ,在细菌核酸佐剂组 ,鸡的血凝抑制抗体水平和 T、B淋巴细胞增殖反应均显著高于抗原单独免疫组 (P<0 .0 5 ) ,而免疫组均显著高于空白组 (P<0 .0 5 ) ;细菌核酸佐剂组的抗体滴度峰值略高于白油佐剂组 (P>0 .0 5 ) ,但 T、B淋巴细胞增殖指数峰值显著高于白油佐剂组 (P<0 .0 1 )。结论认为 ,大肠杆菌牦牛株核酸可显著增强免疫鸡对禽流感病毒 H9亚型灭活疫苗的免疫反应。

关键词：鸡禽流感病毒H9亚型灭活苗免疫增强作用细菌核酸免疫佐剂

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪链球菌2型毒力因子部分片段的克隆与表达

引用

中国人兽共患病杂志 2004年第11期20卷 943-946页

作者：徐淑菲何孔旺陆承平南京农业大学动物医学院南京210095 江苏省农业科学院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室

根据猪链球菌2型(Streptococcussuistype2)胞外蛋白因子(extracellularfactorprotein,EF)的基因(epf)序列,设计合成一对引物,以猪链球菌2型江苏分离株SS2-H的基因组为模板,扩增epf基因1585-2547位序列,进行T/A克隆,转化入宿主菌DH5α中。提取阳性克隆质粒进行双酶切并纯化,将目的片段向克隆到表达载体pET-32a中组氨酸的下游,将重组质粒转化入大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导可表达分子量约为53000的融合蛋白。免疫转印分析表明,该融合蛋白具有EF的抗原表位。

关键词：猪链球菌2型毒力因子克隆表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

肠毒素性大肠杆菌mSTⅠ-linker-LTB融合蛋白的表达及免疫保护试验

引用

农业生物技术学报 2007年第3期15卷 383-387页

作者：倪艳秀何孔旺俞正玉张雪寒王芳郭容利江苏省农业科学院兽医研究所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室南京210014

用分子生物学方法拼接成肠毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)mSTⅠ-linker-LTB融合基因,并定向克隆到pET-32α(+)中,转化宿主菌(***)BL21(DE3)。重组菌经1mmolLIPTG诱导,在30℃下,5h时表达产物(分子量约为37kD)达到高峰,表达量约占菌体总蛋白30%。表达产物主要存在包涵体中,经Westernblot鉴定呈阳性。乳鼠胃内接种实验证明,融合蛋白无野生型STⅠ的生物毒性。将融合蛋白与矿物油乳化后免疫ICR小鼠,对K88、K99、987P和F41的保护率分别为83.3%、100%、66.7%和66.7%。

关键词：肠毒素性大肠杆菌 mSTⅠ-linker-LTB融合基因表达免疫保护

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

流行性乙型脑炎病毒E基因的克隆、表达及初步应用

引用

中国病毒学 2005年第5期20卷 494-497页

作者：张雪寒何孔旺郭容利倪艳秀王芳俞正玉江苏省农业科学院兽医研究所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏南京210014

参照GenBank中的日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)SA14-14株序列设计了一对特异性引物,用PCR方法从SA14-14扩增E基因全长,然后克隆到pMD18-T载体中,转化宿主菌DH5a,提取阳性克隆质粒进行双酶切鉴定,将目的片段定向克... 详细信息

参照GenBank中的日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)SA14-14株序列设计了一对特异性引物,用PCR方法从SA14-14扩增E基因全长,然后克隆到pMD18-T载体中,转化宿主菌DH5a,提取阳性克隆质粒进行双酶切鉴定,将目的片段定向克隆到pET32a(+)中,转化入BL21(DE3),经IPTG诱导可表达分子量约73ka的蛋白,Western blotting试验呈阳性,表明E基因得到表达。以纯化的表达产物为核心抗原,猪抗JEV血清为一抗,HRP标记羊抗猪IgG抗体为二抗建立间接ELISA方法,并初步检测了一些血清样品,结果提示表达的蛋白具有很好的应用开发价值。

关键词：乙型脑炎病毒 E基因表达间接ELISA

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：