检索结果-内蒙古大学图书馆

农药学学报 2024年第6期26卷 1069-1079页

作者：仲建锋高美静卢莉娜张志勇江苏省食品质量安全重点实验室——省部共建国家重点实验室培育基地农业农村部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所南京210014

抗独特型抗体制备技术是开发新型抗虫蛋白资源的一项创新策略。为设计构造以基因工程抗体为基础的杀虫蛋白资源,制备了对小菜蛾(Plutella xylostella)具有杀虫活性的猪、牛源改型单链抗体(single chain variable fragment,sc Fv)。通过N... 详细信息

抗独特型抗体制备技术是开发新型抗虫蛋白资源的一项创新策略。为设计构造以基因工程抗体为基础的杀虫蛋白资源,制备了对小菜蛾(Plutella xylostella)具有杀虫活性的猪、牛源改型单链抗体(single chain variable fragment,sc Fv)。通过NCBI数据库搜索猪、牛源抗体重、轻链可变区的8个骨架区,在其中植入人源抗独特型sc Fv 3E1的6个互补决定区,并进行人工合成及替换成噬菌体展示表达载体p IT2;利用间接竞争ELISA对动物源化改型sc Fv进行分型鉴定;利用表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)技术分析动物源化改型sc Fv与小菜蛾刷状缘膜囊泡(brush border membrane vesicles,BBMV)的结合能力;采用浸叶法测定动物源化改型sc Fv对小菜蛾的生物活性。通过替换表达载体获得了猪源swine-3E1-p IT2质粒和牛源bovine-3E1-p IT2质粒,结果显示:swine-p IT2和bovine-p IT2表达上清液对Cry1B与其多克隆抗体(p Ab)结合的抑制率分别为44.3%和43.0%,模拟抗原Cry1B的某些结构功能,发现两者均属于β型抗独特型sc Fv。SPR分析发现,swine-p IT2、bovine-p IT2与小菜蛾BBMV的结合能力分别为209.48和195.31 RU。生物活性测定结果显示,改造后的swinep IT2和bovine-p IT2对小菜蛾幼虫均具有杀虫活性,LD_(50)值分别为5.90×10^(7)和6.22×10^(7)CFU/m L,均低于亲本3E1的6.86×10^(7)CFU/m L;并且改造后2种材料的毒力回归方程的斜率分别为1.50和1.48,均高于3E1(1.23)。综上,动物源化swine-p IT2和bovine-p IT2改型sc Fv属β型抗独特型sc Fv,能够与小菜蛾的BBMV结合,且具有杀虫活性,为新型生物农药蛋白资源挖掘提供了新的思路。

关键词：动物源化 Bt毒素改型抗体杀虫活性表面等离子共振小菜蛾

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高效液相色谱-串联质谱法测定蛋和奶中氨基糖苷类药物残留

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江苏农业学报 2021年第4期37卷 1033-1042页

作者：栾枫婷龚兰朱磊陈明唐敏敏邵雪梅魏瑞成王冉江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地江苏南京210014 江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所江苏南京210014

建立了高效液相色谱-串联质谱法测定蛋和奶中氨基糖苷类药物(双氢链霉素、卡那霉素A、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、潮霉素B、大观霉素、阿米卡星、新霉素B和安普霉素)残留。用5%三氯乙酸水溶液提取目标物,经HLB固相萃取柱净化,高效液... 详细信息

建立了高效液相色谱-串联质谱法测定蛋和奶中氨基糖苷类药物(双氢链霉素、卡那霉素A、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、潮霉素B、大观霉素、阿米卡星、新霉素B和安普霉素)残留。用5%三氯乙酸水溶液提取目标物,经HLB固相萃取柱净化,高效液相色谱柱分离,梯度洗脱,外标法定量。结果表明,10种药物在各自范围内线性关系良好,R2>0.99,方法的检出限为10.0~50.0μg/kg,定量限为30.0~100.0μg/kg,平均回收率为62.3%~110.4%,相对标准偏差为1.0%~13.6%。该方法简便、准确、灵敏,且扩大了检测范围,适用于蛋和奶中氨基糖苷类药物的定量测定。

关键词：高效液相色谱-串联质谱固相萃取氨基糖苷类药物残留禽蛋奶

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基于Bt毒素的杀虫蛋白理性设计与创新应用策略

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中国农业科学 2024年第1期57卷 96-125页

作者：徐重新金嘉凤孙晓明沈成张霄陈澄宇刘贤金刘媛江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所/省部共建国家重点实验室培育基地-江苏省食品质量安全重点实验室江苏大学食品与生物工程学院南京农业大学植物保护学院

Bt毒素是源于苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）的具有特殊杀虫功能的大分子蛋白，其制剂和转基因作物已广泛用于害虫防治，产生了巨大的经济和社会生态效益。围绕Bt毒素挖掘和提升其应用价值是持续研究的热点，特别是随着Bt毒... 详细信息

Bt毒素是源于苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）的具有特殊杀虫功能的大分子蛋白，其制剂和转基因作物已广泛用于害虫防治，产生了巨大的经济和社会生态效益。围绕Bt毒素挖掘和提升其应用价值是持续研究的热点，特别是随着Bt毒素结构功能和作用机制日趋明晰，为其功能修饰和创新应用创造了条件，相关研究蓬勃发展，成效显著。大量研究表明，采用定点突变、结构域替换或融合以及抗独特型抗体模拟等策略，是理性设计活性更高、稳定性更强、杀虫谱更广、非靶标生物安全性更高甚至是可用于害虫抗药性治理的有别于母体Bt毒素的突变体、结构杂合体乃至功能效应物抗体等新型杀虫蛋白的有效手段；此外，采用催化毒素活化、驱动毒素靶向受体结合、促进毒素表达以及同源或异源杀虫材料复配或共表达的协同促效等创新增效策略，也是助推Bt毒素应用价值的重要手段。本文总结了Bt毒素结构功能和作用机制，梳理了基于Bt毒素功能修饰的突变体、结构杂合体以及功能效应物抗体等新型杀虫蛋白理性设计和基于Bt毒素功能增效的创新应用策略等相关研究进展，并结合作者团队在模拟Bt毒素杀虫功能效应物抗体靶向设计研发方面的最新成果，探讨了基于Bt毒素的杀虫蛋白理性设计与创新应用策略未来发展动向及潜在可行捷径，为相关研究提供较为全面的最新有价值的文献资料和启发思路。

关键词： Bt毒素苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白定点突变抗独特型抗体蛋白融合表达杀虫增效物

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1株伏马毒素B_(1)降解真菌的筛选及降解特性分析

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食品科学 2023年第14期44卷 79-85页

作者：白青云高红侠胡俊强于阳光邱涵张宇航徐剑宏淮阴工学院生命科学与食品工程学院江苏淮安223003 江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地农业农村部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室农业农村部农产品质量安全风险评估实验室(南京)江苏省现代粮食流通与安全协同创新中心江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所江苏南京210014 南京农业大学生命科学学院农业农村部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

为筛选能够降解伏马毒素B_(1)(fumonisin B_(1),FB_(1))的真菌,将伏马毒素污染严重的玉米样品磨碎处理,采用富集培养的筛菌方法获得目的菌株,将所得菌株命名为FDS-2,对其进行菌种鉴定、生长特性与降解特性分析,并探究该菌株对FB_(1)的... 详细信息

为筛选能够降解伏马毒素B_(1)(fumonisin B_(1),FB_(1))的真菌,将伏马毒素污染严重的玉米样品磨碎处理,采用富集培养的筛菌方法获得目的菌株,将所得菌株命名为FDS-2,对其进行菌种鉴定、生长特性与降解特性分析,并探究该菌株对FB_(1)的初步降解途径。根据FDS-2的培养特征、显微特征以及rRNA-ITS序列特征构建的系统进化树,该菌被鉴定为棘状外瓶霉(Exophiala spinifera)。菌株的最适生长与降解条件为30℃、pH 5.0,在此条件下,菌株可在48h内将250μg的FB_(1)降解完全。通过降解物质定位实验,确定FDS-2中降解活性物质是位于细胞内的降解酶。使用液相色谱-质谱分析降解产物,确定初步降解途径为FDS-2首先把FB_(1)降解成为水解FB_(1)。本研究为粮食和饲料中伏马毒素的生物降解提供了菌种资源和理论基础。

关键词：伏马毒素B_(1) 生物降解棘状外瓶霉降解途径

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鼠源噬菌体抗体展示库的构建及初步应用

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江苏农业学报 2017年第1期33卷 210-217页

作者：徐重新张霄张存政刘媛仲建锋董飒胡晓丹林曼曼刘贤金江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所省部共建国家重点实验室培育基地--江苏省食品质量安全重点实验室农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室江苏南京210014

构建可用于特异性单链抗体(ScFv)筛选和应用的大容量鼠源噬菌体抗体展示库,获得拥有自主知识产权的抗体库材料。从小鼠脾脏细胞中提取总RNA,反转录成c DNA后,分别扩增抗体的重链基因、轻链基因,并设计2条互补的Linker基因。采用重叠延伸... 详细信息

构建可用于特异性单链抗体(ScFv)筛选和应用的大容量鼠源噬菌体抗体展示库,获得拥有自主知识产权的抗体库材料。从小鼠脾脏细胞中提取总RNA,反转录成c DNA后,分别扩增抗体的重链基因、轻链基因,并设计2条互补的Linker基因。采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)法将重链-Linker和Linker-轻链拼接为完整的ScFv基因,酶切、酶连后,将ScFv基因克隆到pCANTAB-5E噬菌粒载体上,经电穿孔导入*** TG1感受态细胞中,过夜培养获得初级噬菌体展示库。以单克隆菌落数计算库容量大小,通过比对随机挑取的单克隆噬菌体ScFv可变区序列的差异,分析库的多样性。以Bt毒素(Cry1B、Cry1C、Cry1F)为包被抗原,从库中筛选具有结合活性的ScFv验证库的实用性。经检测,提取的总RNA条带清晰,浓度为2.76μg/μl,扩增的抗体重链基因、轻链基因条带清晰,且2条互补的Linker基因成功添加到重链基因和轻链基因上。经SOE-PCR法扩增,重链-Linker与Linker-轻链成功拼接为ScFv基因。电转化后,经PCR(Polymerase chain reaction)扩增和凝胶电泳检测,证实ScFv基因克隆成功,测得初级噬菌体抗体展示库的库容为3.67×10~8。随机挑取12个单克隆菌种进行测序和比对,证实ScFv基因为鼠源抗体基因,且12个单克隆菌种的ScFv基因可变区均有一定差异,说明ScFv基因具有多样性。以3种Bt毒素(Cry1B、Cry1C、Cry1F)为抗原,经4轮特异性富集筛选后均获得了具有抗原结合活性的噬菌体ScFv菌种,表明该库的实用性较强。

关键词：噬菌体展示库单链抗体重叠延伸PCR 噬菌粒载体 Bt毒素

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1株产脂肽类抗生素芽孢杆菌的鉴定及脂肽类抗生素相关基因克隆

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食品科学 2016年第17期37卷 127-132页

作者：冉军舰徐剑宏胡晓丹史建荣江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室江苏省转基因安全评价公共服务中心江苏省现代粮食流通与安全协同创新中心江苏南京210014 河南科技学院食品学院河南新乡453003

从小麦根际土壤中分离得到一株对禾谷镰刀菌有拮抗作用的菌株7F1。以菌株7F1基因组总DNA为模板,通过16S rDNA和gyrB基因序列分析,鉴定7F1为多粘类芽孢杆菌。本实验对该菌种产拮抗物的稳定性进行了研究,同时,应用特异性引物对7F1中脂肽... 详细信息

从小麦根际土壤中分离得到一株对禾谷镰刀菌有拮抗作用的菌株7F1。以菌株7F1基因组总DNA为模板,通过16S rDNA和gyrB基因序列分析,鉴定7F1为多粘类芽孢杆菌。本实验对该菌种产拮抗物的稳定性进行了研究,同时,应用特异性引物对7F1中脂肽类抗生素合成相关基因进行检测。结果表明：该菌产生的拮抗物在40-90℃保持较高的活性;在蛋白酶K、胃蛋白酶和胰蛋白酶处理后,抑菌活性显著下降;在pH 3.0-10.0具有抑菌活性;使用已报道的脂肽类抗生素基因片段设计的引物进行聚合酶链式反应扩增,从该菌的基因组DNA中扩增得到了3种bamC、eriSa、ituC脂肽类抗生素合成酶基因。此研究结果对脂肽类抗生素进一步的分离提供了重要参考。

关键词：脂肽类抗生素芽孢杆菌鉴定抑菌活性基因克隆

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1株宽噬菌谱肠出血性大肠杆菌噬菌体的分离及生物学特性分析

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中国动物传染病学报 2020年第3期28卷 1-6页

作者：孙利厂周艳张莉莉庞茂达何涛包红朵张辉何灵尘王冉江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所江苏省食品质量安全重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地南京210014

本研究从养殖场采集的污水样品中分离到1株宽噬菌谱肠出血性大肠杆菌烈性噬菌体V_EcoM_C1,并对其进行了噬菌斑、噬菌谱、形态学(透射电镜)、遗传物质、酸碱及热稳定性、一步生长曲线等生物学特性及其控制养殖环境中的肠出血性大肠杆菌... 详细信息

本研究从养殖场采集的污水样品中分离到1株宽噬菌谱肠出血性大肠杆菌烈性噬菌体V_EcoM_C1,并对其进行了噬菌斑、噬菌谱、形态学(透射电镜)、遗传物质、酸碱及热稳定性、一步生长曲线等生物学特性及其控制养殖环境中的肠出血性大肠杆菌污染的研究.结果表明:噬菌体V_EcoM_C1呈现出典型裂解性噬菌体特征,空斑透亮,无晕环,空斑边缘整齐清晰;噬菌体V_EcoM_C1噬菌斑直径为1.0～1.5 mm;噬菌体V_EcoM_C1头部椭圆形,长径约86 nm,横径约54 nm;噬菌体V_EcoM_C1具有可收缩性尾,尾长约76 nm,直径约10 nm,头部与尾部被颈圈隔开;噬菌体V_EcoM_C1可裂解5种不同血清型肠出血性大肠杆菌,且噬菌斑透亮,具有较宽噬菌谱;噬菌体V_EcoM_C1在30～50℃保持高活性;噬菌体V_EcoM_C1在pH5～10稳定;噬菌体V_EcoM_C1感染宿主菌的潜伏期约10 min,暴发持续时间约60 min,平均暴发量为26,具有较高的裂解活性;噬菌体V_EcoM_C1可以控制养殖环境中的肠出血性大肠杆菌,证明该噬菌体可以有效杀灭养殖环境(奶牛料槽表面)中的肠出血性大肠杆菌.综上所述,V_EcoM_C1为1株宽噬菌谱肠出血性大肠杆菌烈性噬菌体,可用于肠出血性大肠杆菌噬菌体制剂的研发.

关键词：肠出血性大肠杆菌噬菌体宽噬菌谱分离生物学特性

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噬菌体在食品生产和加工中的生物防控应用及思考

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食品安全质量检测学报 2021年第17期12卷 7030-7035页

作者：张辉包红朵江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所南京210014

噬菌体以其突出的优势在生物防控和疾病治疗中扮演着重要角色,不仅有效抑制致病菌延长食品货架期,且具有特异无残留等优点。目前在农业、动物疾病防控、食品安全以及耐药性疾病治疗中的应用案例屡见不鲜,许多国家已有噬菌体产品应运而... 详细信息

噬菌体以其突出的优势在生物防控和疾病治疗中扮演着重要角色,不仅有效抑制致病菌延长食品货架期,且具有特异无残留等优点。目前在农业、动物疾病防控、食品安全以及耐药性疾病治疗中的应用案例屡见不鲜,许多国家已有噬菌体产品应运而生。噬菌体在食品生产"农场"和加工后"餐桌"的干预措施,能够控制重要食源性病原,如沙门氏菌、李斯特菌和大肠杆菌等。在"农场-餐桌"的供应链中,噬菌体及其衍生物均能发挥重要作用,有效抑制致病菌来保障农产品质量安全。本文就噬菌体在食品生物防控中的应用进展以及应用中存在的问题进行综述,以期为噬菌体的应用开发提供参考。

关键词：噬菌体生物防控抗菌

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基于高通量测序技术分析麝香草酚处理禾谷镰孢菌后转录组学的变化

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江苏农业学报 2017年第6期33卷 1257-1265页

作者：高弢史建荣江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所江苏南京210014 省部共建国家重点实验室培育基地--江苏省食品质量安全重点实验室江苏南京210014 农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室江苏南京210014

植物源化合物麝香草酚能够破坏禾谷镰孢菌细胞膜的完整性来抑制病原菌的生长,但其具体的作用靶标尚不明确。为发掘禾谷镰孢菌中麝香草酚潜在作用靶标,本研究以禾谷镰孢菌标准菌株(PH-1)为材料,采用新一代高通量测序技术Illumina Hiseq 2... 详细信息

植物源化合物麝香草酚能够破坏禾谷镰孢菌细胞膜的完整性来抑制病原菌的生长,但其具体的作用靶标尚不明确。为发掘禾谷镰孢菌中麝香草酚潜在作用靶标,本研究以禾谷镰孢菌标准菌株(PH-1)为材料,采用新一代高通量测序技术Illumina Hiseq 2000对麝香草酚处理及未处理的禾谷镰孢菌进行转录组测序分析,利用生物信息学方法对差异表达基因的功能进行研究,同时利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术对部分关键基因进行验证。结果表明,禾谷镰孢菌经过50μg/ml麝香草酚处理12 h后,共检测到1 477个基因的表达量发生了变化,其中下调基因数目为772个,上调基因数目为705个。这些差异表达基因参与多种代谢途径,表明麝香草酚对禾谷镰孢菌的作用是一个多基因参与的协同调控过程。qRT-PCR验证部分基因上调下调结果与转录组分析结果一致。本研究通过二代高通量转录组测序技术分析麝香草酚处理后禾谷镰孢菌的差异表达基因,为进一步揭示麝香草酚作用的分子机制,挖掘作用靶标提供基础资料。

关键词：禾谷镰孢菌麝香草酚转录组高通量测序

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基因工程抗体在微囊藻毒素检测分析中的应用研究

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分析测试学报 2019年第3期38卷 372-378页

作者：徐重新刘媛李建宏刘贤金江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所省部共建国家重点实验室培育基地--江苏省食品质量安全重点实验室江苏南京210014 南京师范大学生命科学学院江苏南京210023

微囊藻毒素是蓝藻水华过程中产生的一类小分子多肽生物毒素,能对人和动物的肝脏造成严重损伤,属于2B类致癌物质。由于全球性工业和生活废水的大量排放以及气候变暖等现实因素,蓝藻水华现象日趋频繁和加剧,使得微囊藻毒素在水体和土壤中... 详细信息

微囊藻毒素是蓝藻水华过程中产生的一类小分子多肽生物毒素,能对人和动物的肝脏造成严重损伤,属于2B类致癌物质。由于全球性工业和生活废水的大量排放以及气候变暖等现实因素,蓝藻水华现象日趋频繁和加剧,使得微囊藻毒素在水体和土壤中大量蓄积,严重威胁生态环境和农产品质量安全。基于"抗体-抗原"识别原理的免疫学检测方法是当前生物毒素快速检测研究的热点,近年抗体创制技术突飞猛进,现已从传统的多克隆抗体和单克隆抗体逐渐发展到了新型的基因工程人工抗体创制阶段。该文系统阐述了微囊藻毒素产生的内外因素及其对生态系统、人和动物的主要危害风险;全面梳理了基因工程抗体创制技术及其在微囊藻毒素检测应用研究上的最新进展;并结合作者及所在科研团队最新研究成果,深入探讨了基因工程抗体在微囊藻毒素检测应用上的发展趋势、存在的问题以及拟解决的对策。

关键词：基因工程抗体微囊藻毒素农产品质量安全免疫分析

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