检索结果-内蒙古大学图书馆

麦类作物学报 2016年第2期36卷 129-135页

作者：史建荣仇剑波董飞徐剑宏祭芳刘馨俞明正江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所/农业部农产品质量安全风险评估实验室/农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室/江苏省现代粮食流通与安全协同创新中心/江苏省食品安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地江苏南京210014

近年来,小麦赤霉病在我国小麦产区高频率流行,尤其在长江中下游、淮河流域以及黄淮南部,导致小麦中镰刀菌毒素严重污染,不仅影响小麦产量,还危害人畜健康。镰刀菌毒素包括脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON,又称呕吐毒素)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、雪... 详细信息

近年来,小麦赤霉病在我国小麦产区高频率流行,尤其在长江中下游、淮河流域以及黄淮南部,导致小麦中镰刀菌毒素严重污染,不仅影响小麦产量,还危害人畜健康。镰刀菌毒素包括脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON,又称呕吐毒素)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、雪腐镰刀菌烯醇(NIV)以及伏马毒素(FB)等,可以引起动物消化、神经、免疫以及生殖系统异常,有的还具有致癌作用。本文对我国小麦镰刀菌毒素的发生情况与影响因素进行了分析,同时对镰刀菌毒素的风险评估与防控研究的迫切性进行了探讨,以期提高人们对小麦镰刀菌毒素污染的认识,保障我国小麦产业的健康发展。

关键词：小麦镰刀菌毒素风险分析赤霉病

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抗Cry1F毒素单链抗体的筛选及初步应用

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江苏农业学报 2015年第5期31卷 1166-1172页

作者：徐重新张存政何鑫张留娟张霄仲建锋刘媛谢雅晶刘贤金江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所/江苏省食品质量安全重点实验室--省部共建国家重点实验室培育基地/农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室江苏南京210014

对扩增的Tomlinson I噬菌体抗体库进行3轮特异性富集,挑取单菌落,采用ELISA、PCR及测序比对分析鉴定阳性噬菌体单链抗体(sc Fv);以宿主替换的方式将阳性噬菌体sc Fv基因导入Escherichia coli HB2151中进行可溶性表达,sc Fv过柱纯化后,... 详细信息

对扩增的Tomlinson I噬菌体抗体库进行3轮特异性富集,挑取单菌落,采用ELISA、PCR及测序比对分析鉴定阳性噬菌体单链抗体(sc Fv);以宿主替换的方式将阳性噬菌体sc Fv基因导入Escherichia coli HB2151中进行可溶性表达,sc Fv过柱纯化后,建立针对Cry1 F毒素的IC-ELISA检测方法。以Cry1 B、Cry1 C、Cry1 Ab、Cry1 Ac作为竞争抑制物,分析sc Fv的特异性,以Cry1 F毒素在玉米中的添加回收试验评价检测方法的实用性。结果显示,从第3轮富集库中筛选到了11株具有Cry1F毒素结合活性的噬菌体sc Fv菌株,经PCR鉴定都含有目的条带,对其中2株(H1、G9)进行测序,证实为人源化的sc Fv。选取G9号阳性噬菌体sc Fv进行可溶性表达,纯化后收集到的sc Fv浓度为256μg/ml。建立的IC-ELISA检测方法检测灵敏度(IC10)为5.99 ng/ml,抑制中浓度(IC50)为0.410μg/ml,线性检测范围(IC20~IC80)为0.107~0.713μg/ml。sc Fv(G9)对Cry1B、Cry1C具有一定结合活性,交叉反应率分别达到了20.92%和15.59%,但不识别Cry1Ab和Cry1Ac,交叉反应率均低于0.1%。添加回收试验结果表明,基于sc Fv(G9)建立的IC-ELISA检测方法稳定性和重复性都比较好。

关键词：苏云金芽孢杆菌 Cry1F毒素单链抗体酶联免疫分析

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噬菌体复合制剂对肉鸡生长性能、免疫功能、肠道形态及肠道菌群的影响

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动物营养学报 2022年第5期34卷 2928-2939页

作者：朱树娇张辉周艳董俊德艳艳张永柱仲召鑫王冉包红朵江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所农业部农产品质量安全风险评估实验室(南京)南京210014 宜兴天石饲料有限公司宜兴214200 江苏恒丰强生物技术有限公司南通226100 江苏沿海地区农业科学研究所盐城224002

本试验旨在研究噬菌体复合制剂对肉鸡生长性能、免疫功能、肠道形态及肠道菌群的影响。选取14000只体重(850±45)g的37日龄青脚麻鸡,随机分为2组,分别是对照组(基础饲粮)和试验组(基础饲粮+109PFU/mL的噬菌体复合制剂),每组7个重复... 详细信息

本试验旨在研究噬菌体复合制剂对肉鸡生长性能、免疫功能、肠道形态及肠道菌群的影响。选取14000只体重(850±45)g的37日龄青脚麻鸡,随机分为2组,分别是对照组(基础饲粮)和试验组(基础饲粮+109PFU/mL的噬菌体复合制剂),每组7个重复,每个重复1000只,试验期27 d。结果表明:1)与对照组相比,试验组的料重比下降2.81%(P>0.05)。2)与对照组相比,43日龄时,试验组肉鸡胸腺指数和脾脏指数分别增加16.80%(P<0.05)和7.14%(P>0.05);52日龄时,肉鸡法氏囊指数和胸腺指数分别增加8.55%(P>0.05)和7.37%(P>0.05);61日龄时,肉鸡法氏囊指数增加39.66%(P>0.05);43、52及61日龄时,试验组肉鸡血清免疫球蛋白G(IgG)含量分别增加15.85%(P>0.05)、29.54%(P>0.05)和1.45%(P>0.05)。3)与对照组相比,43、52及61日龄时,试验组肉鸡十二指肠、空肠、回肠绒毛高度/隐窝深度显著提高(P<0.05)。4)在门水平上,与对照组相比,43日龄时,试验组肉鸡盲肠食糜中厚壁菌门(Firmicutes)相对丰度增加28.13%(P>0.05),并且拟杆菌门(Bacteroidetes)相对丰度降低9.97%(P>0.05);52日龄时,肉鸡噬菌体盲肠食糜中变形菌门(Proteobacteria)相对丰度下降(P>0.05),并且螺旋菌门(Spirochaetes)相对丰度增加(P>0.05);61日龄时,肉鸡试验组盲肠食糜中Proteobacteria及Firmicutes相对丰度下降(P>0.05),而Bacteroidetes相对丰度增加(P>0.05)。5)在属水平上,与对照组相比,52日龄时,试验组可选择性的促进副拟杆菌属(Parabacteroides)、脱硫弧菌属(Desulfovibrio)和巴内氏菌属(Barnesiella)的相对丰度(P>0.05),降低RFN20菌属(RFN20)相对丰度(P>0.05);61日龄时,试验组增加乳杆菌属(Lactobacillus)的相对丰度(P>0.05),降低RFN20相对丰度(P>0.05)。综上所述,噬菌体复合制剂有利于提高肉鸡生长性能和免疫功能,促进肠道发育,改善肠道菌群,保障肉鸡肠道健康。因此,噬菌体复合制剂在肉鸡养殖业中具有潜在的应用价值。

关键词：噬菌体复合制剂肉鸡生长性能免疫功能肠道形态肠道菌群

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磁珠筛选抗Cry2Aa人源化单链抗体及检测方法的建立

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江苏农业学报 2017年第4期33卷 945-950页

作者：武爱华王耘刘媛胡晓丹刘贤金江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所/江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地/农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室江苏南京210014 金陵科技学院园艺学院江苏南京210038

为了建立转基因成分的快速检测方法,利用亲和磁珠偶联Cry2Aa毒素蛋白从人源化噬菌体抗体库Tomlinson I中液相淘选特异性单链抗体(sc Fv)。通过4轮"扩增-吸附-洗脱",从洗脱产物计数板上随机挑取单克隆进行初步鉴定。选取相对... 详细信息

为了建立转基因成分的快速检测方法,利用亲和磁珠偶联Cry2Aa毒素蛋白从人源化噬菌体抗体库Tomlinson I中液相淘选特异性单链抗体(sc Fv)。通过4轮"扩增-吸附-洗脱",从洗脱产物计数板上随机挑取单克隆进行初步鉴定。选取相对结合活性最好的阳性克隆建立间接竞争ELISA,确定其检测范围。筛选后第4轮相对产出率较第1轮提高了4.07×106倍;单克隆ELISA鉴定出8个含有完整外源基因片段的阳性克隆,测序后获得3个不同序列的阳性克隆。D5克隆的噬菌体上清对Cry2Aa的检测灵敏度(IC10)为6.632 ng/ml,线性范围为0.016~2.881μg/ml。该克隆对Cry2Aa具有良好的特异性和板内板间重现性。

关键词： Cry2Aa毒素单链抗体磁珠间接竞争ELISA

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江苏部分地区牛源无乳链球菌流行病学研究

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2017年第4期38卷 25-29页

作者：庞茂达孙利厂何涛包红朵王冉江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所/江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地/农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室江苏南京210014

对江苏省部分地区的7个规模化奶牛场进行采样,通过16S rNDA测序、多位点序列分型、荚膜分型,明确无乳链球菌的流行情况及流行株类型;并通过检测毒力因子,分析菌株生化特性、溶血能力及耐药性,明确无乳链球菌流行株的生物学特性及致病因... 详细信息

对江苏省部分地区的7个规模化奶牛场进行采样,通过16S rNDA测序、多位点序列分型、荚膜分型,明确无乳链球菌的流行情况及流行株类型;并通过检测毒力因子,分析菌株生化特性、溶血能力及耐药性,明确无乳链球菌流行株的生物学特性及致病因子。结果表明:自327份乳房炎奶样中共分离到84株无乳链球菌,该菌在不同奶牛场中的阳性率存在较大差异(阳性率为0~51.3%),主要流行株类型为ST67、ST103及ST568型菌株;牛源菌株的荚膜分型为Ⅰa型或Ⅱ型,均具有PI-2b型菌毛及乳糖操纵子,能够代谢乳糖,且具有不同的溶血能力;另外,所有牛源菌株对头孢噻肟均未产生耐药性。这一研究为无乳链球菌在奶牛场中的临床监测和防控提供了重要信息,有助于进一步阐明该菌的致病机制。

关键词：奶牛无乳链球菌多位点序列分型毒力因子生化特性耐药性

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基于磁珠和双抗夹心免疫分析的Bt Cry1Ac毒素单链抗体筛选与鉴定

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中国农业科学 2014年第9期47卷 1802-1810页

作者：张留圈张霄刘媛徐重新张存政谢雅晶寇莉萍刘贤金江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所/江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地/农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室西北农林科技大学食品科学与工程学院

【目的】通过设计并优化生物素-亲和素标记磁珠筛选策略,建立针对Cry1Ac毒素的新型双抗夹心ELISA检测方法,为研究灵敏、快速的Bt毒素的检测方法建立一种新的检测模式。【方法】采用磁珠液相正负筛选方法,经过4轮筛选后,对每轮筛选后抗Cr... 详细信息

【目的】通过设计并优化生物素-亲和素标记磁珠筛选策略,建立针对Cry1Ac毒素的新型双抗夹心ELISA检测方法,为研究灵敏、快速的Bt毒素的检测方法建立一种新的检测模式。【方法】采用磁珠液相正负筛选方法,经过4轮筛选后,对每轮筛选后抗Cry1Ac毒素特异性结合噬菌体抗体的富集效果进行鉴定,通过单克隆ELISA方法从第4轮筛选得到的次级库中获得特异性结合Cry1Ac的阳性克隆,并对其进行PCR鉴定和DNA测序,确定有完整插入的scFv片段后进行后期相关试验。将相对结合活性最好的阳性克隆scFv-A12替换宿主菌HB2151中进行可溶性诱导表达并纯化。利用纯化后的scFv-A12作为"捕获抗体",Anti-Cry1Ac兔多克隆抗体作为"检测抗体",建立针对Cry1Ac的双抗夹心ELISA检测方法。【结果】以生物素化的Cry1Ac蛋白为包被原,利用噬菌体抗体库对其进行了4轮液相筛选。结果显示,相对产出率随着筛选轮数的增加而提高,第4轮较第1轮提高了42倍;单克隆噬菌体ELISA鉴定抗Cry1Ac噬菌体抗体,以试验孔OD450/阴性孔OD450大于2.1为阳性标准,从第4轮筛选后的培养皿中随机挑选了300个菌落,经单克隆ELISA鉴定出6个阳性克隆,分别命名为hsCry1Ac-C5、hsCry1Ac-D8、hsCry1Ac-C12、hsCry1Ac-A12、hsCry1Ac-F9和hsCry1Ac-F4。其中,hsCry1Ac-A12具有相对较高的亲和力。对上述6个阳性克隆进行菌液PCR检测发现,在935 bp处均有明显的目的条带,通过对其进行测序和氨基酸序列比对,最终得到4株不同氨基酸序列的阳性克隆。hsCry1Ac-A12在成功替换宿主菌HB2151后,经1 mmol·L-1 IPTG诱导表达,于30℃条件下培养过夜。其表达产物经His Trap HP镍亲和柱纯化后SDS-PAGE检测,hsCry1Ac-A12蛋白分子量约为30 kD。通过方阵滴定对抗体浓度进行优化后,利用单链抗体为"捕获抗体",多抗为"检测抗体",建立了Cry1Ac双抗夹心ELISA检测方法。在1.25—2.43μg·mL-1线性检测范围内,线性回归方程为Y=0.2522X+1.2832(R2=0.9564),检测限为1.08 ng·mL-1。【结论】利用磁珠液相筛选方法,建立了针对Cry1Ac毒素的双抗夹心ELISA检测方法,为快速、准确检测转基因食品中Cry1Ac提供了一种新的检测模式。

关键词：磁珠 Cry1Ac毒素单链抗体双抗夹心ELISA

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吡蚜酮及其复配制剂对蜜蜂和家蚕的安全性评价

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农药 2016年第8期55卷 590-592,606页

作者：吴若函丁悦严海娟郭晓瑜辛星余向阳江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室南京210014

[目的]为明确吡蚜酮及其复配制剂对环境生物的安全性,试验测定70%吡蚜酮水分散粒剂、30%吡蚜酮·噻虫胺悬浮剂、25%吡蚜酮·毒死蜱悬乳剂、60%吡蚜·噻嗪酮可湿性粉剂和80%烯啶·吡蚜酮水分散粒剂对2种非靶标昆虫(意大... 详细信息

[目的]为明确吡蚜酮及其复配制剂对环境生物的安全性,试验测定70%吡蚜酮水分散粒剂、30%吡蚜酮·噻虫胺悬浮剂、25%吡蚜酮·毒死蜱悬乳剂、60%吡蚜·噻嗪酮可湿性粉剂和80%烯啶·吡蚜酮水分散粒剂对2种非靶标昆虫(意大利工蜂和家蚕)的急性毒性,并进行安全性评价。[方法]通过触杀法测定农药对蜜蜂的急性接触毒性,通过浸叶法测定农药对家蚕的急性毒性。[结果]吡蚜酮·噻虫胺和吡蚜酮·毒死蜱对蜜蜂的急性接触毒性为高毒,吡蚜酮和烯啶·吡蚜酮为中毒,吡蚜·噻嗪酮为低毒;吡蚜酮·噻虫胺对家蚕的急性毒性为剧毒,吡蚜酮·毒死蜱和烯啶·吡蚜酮为高毒,吡蚜·噻嗪酮为中毒,吡蚜酮为低毒。[结论]吡蚜酮复配制剂并不都是低毒型农药,4种吡蚜酮复配制剂中,吡蚜·噻嗪酮对非靶标昆虫有较高的生物安全性。复配制剂的使用对延缓吡蚜酮的使用寿命有着重要意义。

关键词：吡蚜酮复配制剂非靶标生物急性毒性

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玉米赤霉烯酮降解菌的分离鉴定及其降解特性研究

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中国粮油学报 2018年第6期33卷 113-119,126页

作者：潘丽婷徐圣佳胡晓丹徐丽梅史建荣顾振新徐剑宏南京农业大学南京210095 江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地农业部农产品质量安全风险评估实验室(南京) 江苏省现代粮食流通与安全协同创新中心江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所南京210014

采用富集培养的方法从麦粒中筛选到一株玉米赤霉烯酮(ZEN)降解菌7D3-2,该菌株对ZEN的降解能力高达95%;通过对7D3-2形态、生理生化特性及16S r DNA、gyr A基因系统进化发育地位分析,该菌株被鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefac... 详细信息

采用富集培养的方法从麦粒中筛选到一株玉米赤霉烯酮(ZEN)降解菌7D3-2,该菌株对ZEN的降解能力高达95%;通过对7D3-2形态、生理生化特性及16S r DNA、gyr A基因系统进化发育地位分析,该菌株被鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。研究了初始p H、培养温度、接种量及ZEN初始质量浓度等环境条件对7D3-2降解ZEN的影响,结果表明:7D3-2降解ZEN的最适温度为30℃,最适p H为7.0;当接种量小于10%时,7D3-2对ZEN的降解率与接种量成正比;ZEN质量浓度在1.0~25.0 mg/L范围内,7D3-2对ZEN的降解差异不显著,当ZEN质量浓度大于25.0 mg/L时,ZEN降解率与ZEN初始质量浓度成反比,但是ZEN被降解的绝对量与其ZEN初始质量浓度呈正相关;降解物质的定域实验结果显示:7D3-2中降解ZEN的物质主要位于细胞外。7D3-2不仅对培养液中的ZEN具有降解效果,也能很好地降解玉米粉中的ZEN。本研究结果不仅可以丰富ZEN降解菌种质资源库,在粮食和饲料的ZEN生物脱毒方面还具有广阔的应用前景。

关键词：玉米赤霉烯酮生物降解筛选鉴定解淀粉芽孢杆菌

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1株宽噬菌谱肠出血性大肠杆菌噬菌体的分离及生物学特性分析

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中国动物传染病学报 2018年第6期26卷 58-63页

作者：孙利厂周艳张莉莉庞茂达何涛包红朵张辉何灵尘王冉江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所省部共建国家重点实验室培育基地-江苏省食品质量安全重点实验室农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室江苏省畜禽产品安全性研究重点实验室南京210014

本研究从养殖场采集的污水样品中分离到宽噬菌谱肠出血性大肠杆菌烈性噬菌体V_EcoM_C1,并进行了噬菌斑、噬菌谱、形态学(透射电镜)、遗传物质、酸碱及热稳定性、一步生长曲线等生物学特性及控制养殖环境中的肠出血性大肠杆菌的污染研究... 详细信息

本研究从养殖场采集的污水样品中分离到宽噬菌谱肠出血性大肠杆菌烈性噬菌体V_EcoM_C1,并进行了噬菌斑、噬菌谱、形态学(透射电镜)、遗传物质、酸碱及热稳定性、一步生长曲线等生物学特性及控制养殖环境中的肠出血性大肠杆菌的污染研究。结果表明:噬菌体V_EcoM_C1呈现出典型裂解性噬菌体特征,空斑透亮,无晕环,空斑边缘整齐清晰;噬菌体V_EcoM_C1噬菌斑直径为1.0～1.5 mm;噬菌体V_EcoM_C1头部椭圆形,长径约86 nm,横径约54 nm;噬菌体V_EcoM_C1具有可收缩性尾,尾长约76 nm,直径约10 nm,头部与尾部被颈圈隔开;噬菌体V_EcoM_C1可裂解5种不同血清型肠出血性大肠杆菌,且噬菌斑透亮,具有较宽噬菌谱;噬菌体V_EcoM_C1在30℃～50℃保持高活性;噬菌体V_EcoM_C1在pH5～10稳定;噬菌体V_EcoM_C1感染宿主菌的潜伏期约10 min,爆发持续时间约60 min,平均爆发量为26,具有较高的裂解活性;噬菌体V_EcoM_C1可以控制养殖环境中的肠出血性大肠杆菌证明该噬菌体可以有效杀灭养殖环境(奶牛料槽表面)中的肠出血性大肠杆菌。综上所述,V_EcoM_C1为1株宽噬菌谱肠出血性大肠杆菌烈性噬菌体,可用于肠出血性大肠杆菌噬菌体制剂的研发。

关键词：肠出血性大肠杆菌噬菌体分离生物学特性

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桃胶中多农药残留分析及风险评估

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食品与机械 2023年第5期39卷 55-63,100页

作者：田菊李勇吕春茂余向阳沈阳农业大学食品学院辽宁沈阳110000 省部共建国家重点实验室培育基地—江苏省食品质量安全重点实验室江苏南京210014 江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所江苏南京210014

目的:研究桃胶中农药残留及风险。方法:基于液相色谱—串联质谱法(LC-MS/MS)建立桃胶中44种农药残留的定量分析方法,并对全国173份桃胶样品进行农药残留检测和风险评估分析。结果:基于LC-MS/MS农药残留检测方法的检出限(LOD)为0.05~1.80... 详细信息

目的:研究桃胶中农药残留及风险。方法:基于液相色谱—串联质谱法(LC-MS/MS)建立桃胶中44种农药残留的定量分析方法,并对全国173份桃胶样品进行农药残留检测和风险评估分析。结果:基于LC-MS/MS农药残留检测方法的检出限(LOD)为0.05~1.80μg/kg,定量下限(LOQ)为0.20~2.42μg/kg,加标回收率为61.77%~119.48%。桃胶样品中共检出22种农药,农药总检出率为98.8%,平均每个样品检出农药次数为2.8次,苯醚甲环唑检出率最高(95%),其次是毒死蜱(54%)、多菌灵(34%)、呋虫胺(32%)、吡唑醚菌酯(19%)等。不同桃胶样品中苯醚甲环唑平均残留量最高为0.332 mg/kg,其次是呋虫胺(0.093 mg/kg)、多菌灵(0.061 mg/kg)、毒死蜱(0.033 mg/kg)。结论:桃胶中农药的残留与桃生产用药有关,其残留量总体处于低风险水平,推荐8—10月份采摘桃胶。

关键词：桃胶农药残留液相色谱—串联质谱法风险排序风险评估

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